A continuación se detalla el método de mantenimiento de la columna de cromatografía líquida:

I. la percepción básica y la importancia de la columna

Como componente central del sistema de separación, el rendimiento de la columna de Cromatografía líquida afecta directamente la precisión y repetibilidad de los resultados del análisis. La columna cromatográfica logra la separación de los componentes de la muestra a través de la interacción entre la fase fija y la fase móvil, mientras que el mantenimiento correcto puede prolongar significativamente la vida útil (la vida útil de la columna C18 convencional es de aproximadamente 500 - 2000 inyecciones), reducir el ruido Basal y mantener estable el número teórico de placas de torre. Especialmente en el análisis de sustratos complejos, como muestras biológicas, detección de aditivos alimentarios y otros campos, la capacidad de separación eficiente de la columna cromatográfica determina directamente la fiabilidad de los datos.

II. especificaciones para el uso diario de columnas cromatográficas

1. selección y preprocesamiento de fases móviles

Requisitos de pureza: se debe utilizar un disolvente de grado clar para evitar que la deposición de impurezas bloquee la cabeza del cilindro. Por ejemplo, el sistema de metanol / agua debe ser filtrado por una membrana filtrante de 0,45 micras, y el nitrilo recomienda usar una membrana filtrante de 0,22 micras.

Control del ph: las columnas de fase inversa (como c18) se aplican en el rango de pH 2 - 8, más allá de lo que puede causar la disolución del esqueleto de silicona. Para condiciones especiales de ph, se deben seleccionar columnas de partículas híbridas (como Waters xbridge shield).

Concentración de sal tampón: la concentración de tampón fosfórico común no supera los 50 mmol / l, y la alta resistencia iónica es fácil de precipitar rellenos de daño cristalino. Después del experimento, se necesita una transición de agua pura durante al menos 30 minutos.

2. equilibrio del sistema antes de la inyección

Preequilibrio de elución de gradiente: una nueva columna o una columna cromatográfica no utilizada durante mucho tiempo debe enjuagarse con una fase móvil proporcional inicial a un bajo flujo (0,2 ml / min) durante más de 2 horas para que la fase fija esté completamente húmeda.

Monitoreo de presión: la fluctuación normal de la presión debe estar dentro de ± 5%, si se produce un aumento repentino de más del 30%, se indica que la placa de tamiz está bloqueada o el relleno se derrumba, se debe detener inmediatamente para su inspección.

III. estrategia de limpieza profunda de la columna

1. método de lavado positivo

Proceso estándar: desconecte la conexión del detector y cambie a una mezcla de alcohol isopropílico: agua = 1: 1, enjuague en sentido inverso a una velocidad de flujo de 1 ml / MIN durante 30 minutos, y luego cambie a la fase orgánica pura (metanol / nitrilo) para funcionar durante 1 hora. Este método puede eliminar más del 90% de los contaminantes polares.

Tratamiento especial de la contaminación: se recomienda enjuagar los residuos de proteínas con una solución de urea 6m que contenga un 0,1% de tfa; Los lípidos fueron tratados por ultrasonido en un sistema de N - propanol = 1: 1 durante 15 minutos.

2. tecnología de regeneración in situ

Método alternativo ácido - base: para los adsorbentes obstinados, se inyecta 0,1 MOL / L NaOH → 0,1 MOL / L HCl → se lava con 20 ml cada uno, prestando atención a la necesidad de Transición de fase móvil neutral después de cada cambio. Adecuado para columnas de matriz de polímeros (como la serie prp).

Limpieza de fluidos supercríticos: los fluidos CO 2 pueden eliminar eficazmente las impurezas no polares a 40 ° C y 300bar, especialmente adecuados para columnas de gran tamaño de Poro semipreparadas (≥ 100).

IV. almacenamiento y gestión del transporte de columnas cromatográficas

1. almacenamiento a corto plazo (1 mes)

Protección contra gases nobles: cargar nitrógeno para reemplazar el oxígeno interno e inhibir la reproducción microbiana. La columna se puede colocar en un recipiente sellado que contenga un desecante.

Control de temperatura: la temperatura de almacenamiento óptima es de 15 - 25 ° C para evitar la luz solar directa. En un ambiente de baja temperatura (4 ° c), es necesario restaurar a temperatura ambiente con antelación antes de activarlo.

V. Resumen

El mantenimiento científico de la columna cromatográfica debe establecer el concepto de "prevención primero, combinación de tratamiento y mantenimiento", y formular registros de mantenimiento detallados para registrar el número de usos, cambios de presión e historia de mantenimiento. Se recomienda realizar una prueba de integridad trimestral (como la prueba de eficacia de la columna estándar de benzoato de sodio), y se determina que se alcanza el final de la vida útil cuando el número teórico de placas de Torre cae al 70% del valor inicial. A través de un proceso de operación estandarizado y medios de gestión inteligentes, la columna cromatográfica siempre puede mantener el mejor estado de trabajo y garantizar la precisión y fiabilidad de los datos analizados.