La columna de fase líquida es el componente central de separación del cromatógrafo de fase líquida de alto rendimiento (clar), y su rendimiento afecta directamente la precisión y repetibilidad de los resultados del análisis. Cuando se produce una forma pico anormal, un aumento de la presión de la columna, una disminución del número teórico de placas de torre o la pérdida de fase fija, la columna debe reemplazarse a tiempo. Los siguientes son los procesos de reemplazo estandarizados y las precauciones clave:

I. preparativos preliminares

protección de seguridad

Use guantes protectores, gafas y ropa experimental para evitar el contacto con disolventes orgánicos y piezas afiladas.

Apague la fuente de alimentación del instrumento y libere la presión del sistema para evitar salpicaduras de líquido de alta presión.

Herramientas y materiales

Nueva columna cromatográfica (el modelo / tamaño es el mismo que la columna original), conector de dos vías, llave inglesa, Junta de sellado (se prefiere el material peek).

Accesorios de tubería de repuesto (si es necesario ajustar la longitud).

Consulte las instrucciones del instrumento y la tabla de parámetros técnicos de la columna cromatográfica.

Confirmación del Estado del sistema

Detener el procedimiento de operación actual, cambiar a una fase móvil pura (como metanol / nitrilo) y enjuagar continuamente a un bajo caudal (0,5 - 1 ml / min) durante al menos 30 minutos para eliminar las muestras residuales en la tubería.

Desconecte la línea de señal del detector y marque la posición de la interfaz de la línea de entrada y salida.

2. pasos de desmontaje de columnas antiguas

Módulo de columna de cromatografía de localización

Localice el soporte de la columna cromatográfica en la Caja de temperatura de la columna y observe el orden de conexión de la línea (generalmente: válvula de entrada de muestra → columna cromatográfica → detector).

Eliminación gradual de columnas antiguas

Suelte las tuercas en ambos extremos con una llave inglesa, primero retire el extremo de salida (cerca del lado del detector) y libere lentamente el líquido residual a la botella de desecho.

Después de esperar un momento para descargar el sistema, retire el extremo de entrada.

Está prohibido tirar de la tubería por la fuerza para evitar daños en los hilos de la articulación.

Limpiar la interfaz y evaluar el desgaste

Compruebe si la placa de tamiz está bloqueada o deformada y limpie con ultrasonido si es necesario.

Registre el número de serie de la columna antigua, la duración del uso y las características de la falla para la selección posterior.

3. puntos clave para la instalación de nuevas columnas

Verificación de dirección

Todas las columnas tienen una identificación clara del flujo (la flecha apunta a la salida), y la instalación inversa puede causar el colapso del relleno.

Algunas columnas de fase inversa se pueden utilizar en la cabeza y la cola, pero las columnas de fase positiva / intercambio de iones deben seguir estrictamente la Dirección.

Instalación sin burbujas

Adoptar el "método de acoplamiento submarino": sumergir la entrada de la nueva columna en un vaso de precipitados con fase móvil y conectar la línea con el escape.

Abra la bomba para inyectar a un caudal extremadamente bajo (0,2 ml / min) hasta que no se descargue ninguna burbuja en la salida.

Control del par

Apriete la tuerca alternativamente diagonalmente con una llave especial, con fuerza moderada (se puede sentir ligeramente bloqueado), y el apriete excesivo puede causar compresión de la cama de la columna.

Se recomienda Inspeccionar regularmente la aflojamiento durante la operación después de la instalación.

IV. reinicio y equilibrio del sistema

Lavado inicial

Enjuagar a baja velocidad de flujo con la composición inicial de la fase móvil (mezcla en la misma proporción) durante 60 minutos para observar la estabilidad de la presión de la columna.

Si la presión de la columna es anormalmente alta, se puede suspender y enjuagar y dragar con propanol a corto plazo.

Equilibrio de gradiente

Para llevar a cabo el procedimiento de gradiente en blanco, la cantidad de deriva de la línea de base de monitoreo debe ser < ± 0,5 mau.

La mezcla de prueba de inyección verifica el grado de separación y compara si el número teórico de placas de Torre cumple con el estándar (n ≥ 80% del valor teórico).

Calibración de datos

Actualizar la información de la columna cromatográfica en el archivo del método de la estación de trabajo y restablecer la tabla de comparación del tiempo de retención.

Conservar el informe de certificación de la nueva columna, incluido el mapa de pruebas de eficiencia de la columna y la curva de presión.

A través de la operación estandarizada, se puede maximizar la vida útil de la columna cromatográfica, y la vida útil de la columna de fase inversa típica puede alcanzar 500 - 1000 inyecciones de muestras. El mantenimiento diario recomienda un lavado simple cada semana y un mantenimiento de regeneración profunda cada mes.