La Autofagia como objetivo prometedor para el tratamiento farmacológico

La Autofagia y sus trastornos se han detectado en enfermedades neurodegenerativas y cáncerJugarDesempeña un papel importante, por lo que el descubrimiento de nuevos objetivos terapéuticos en este proceso se ha convertido en un tratamiento farmacológico prometedor. La Autofagia es un proceso de regulación que degrada y recupera proteínas y organelos dañados bajo estrés celular.1，2.serUna bolsa llamada AutofagiaPasar por la burbujaSe forman membranas dobles alrededor del componente celular marcado como destruidoLlevar a caboMontaje1. las vesículas autofagianas luego se fusionan con los lisosomas, transmitiendo su contenido para la degradación de las enzimas lisosomales.

La Autofagia tiene una variedad de efectos fisiológicos y fisiopatológicos complejos, como la adaptación al hambre nutricional, la eliminación de proteínas y organelos celulares dañados, el desarrollo celular, la lucha contra el envejecimiento, la eliminación de microorganismos, la muerte celular, la inhibición tumoral y la presentación de antígenos.2. La División mitocondrial es la degradación selectiva de las mitocondrias por Autofagia3. El proceso suele seraEliminar las mitocondrias defectuosas después del daño celular o el estrés.

Materiales

· PC12Línea celular de neuroblastoma humano..ATCC(...)

· 384 Placa de agujero..Greiner(...)

· Identificación celular ®Kit de detección de autofagia..ENZO Ciencias de la Vida(...)

· Tinte mitocondrial naranja

· Hoechst 33342

· ImageXpressPico®Sistema Automatizado de imágenes celulares..Dispositivos moleculares(...)

· CellReporterXpress Software de adquisición y análisis de datos()Dispositivos moleculares(...)

ventaja

Efectos de los compuestos cuantitativos en el proceso de Autofagia

División de células con marcadores nucleares, detección y caracterización pequeñasObjetivo

Uso de imágenes automáticas para garantizar resultados estadísticos confiables

Uso de imágenes celulares automáticas para detectar y cuantificar partículas de Autofagia

Evaluar el impacto en la Autofagia

En esta nota de aplicación, hemos evaluadoImageXpressPicoEficiencia del sistema automatizado de imágenes celulares para detectar y cuantificar partículas de autofagia.PC12Las líneas celulares de neurocitoma humano se utilizan como modelos de desarrollo de detección. Poner las células en 6，000 unCélulas/.Vacunación de agujeros a384En el tablero de agujeros, incubar48Horas. Para evaluar el impacto en la autofagia,HacerTratamiento de células con diferentes concentraciones de cloroquina o Verapamilo48Horas. VilapamipuedeAutofagia inducida, mientras que la cloroquinapuedeInhibir la degradación Autofagia que conduce a la acumulación de partículas.CompuestoDespués del tratamiento, useIdentificación celular ®Detección de AutofagiaKits vivosLas células se tiñen paraMostrarRastroAutofagia. Además, utilizamos tintes mitocondriales fluorescentes para detectar mitocondrias y utilizamosHoechstIdentificar el núcleo Nuclear..concentraciónRespectivamente 0.2 μMy 1 μM). usarcombinación20XO40 vecesObjetivodeImageXpressPicoSistema y tres canales de detección()FITC,TRITCyFluorescencia azul(...)A las célulasHaga una imagen. En20XObjetivoUna imagen se recoge en cada agujero de la parte inferior, y40 vecesBajo la lenteCada agujeroRecolección2-4Imágenes para garantizar resultados estadísticos confiables. usarCellReporterXpressAnálisis de imágenes por Autofagia o esquemas de aplicación mitocondrial en el software de adquisición y análisis de imágenes.

Imagen 1:Detección de autofagia.La imagen de arriba muestra los clásicos.pasarInductor de Autofagia cloroquina30 pM) procesar yHacerusarIdentificación celularTeñido con tintesPC12Imagen de Autofagia representativa de la célula y máscara de análisis. EnCellReporterXpressEn el software, se utiliza la División de puntos para identificar partículas de autofagia. NúcleoSe muestra comoAzul, mitocondriasSe muestra comoNaranja, AutofagiaSe muestra comoVerde. AbajoImagenMostrarHacerTeñir las células no tratadas con un tinte naranja de integridad mitocondrial.Mascarillas de imagen y análisis para la detección mitocondrial..

Estos algoritmos puedenaDetección y caracterización pequeñasObjetivoComo Autofagia o mitocondria en el plasma, mientras se utilizan marcadores nucleares para dividir las células. Cantidad utilizada para detectar la AutofagiaDetecciónIncluye el número total o promedio de partículas, el área total o promedio de partículas (objetos subcelulares) y la intensidad. Con cloroquina30 μM) tratamientoDetrásImagen representativa de la célula y máscara de análisis como se muestra en la imagen1Se muestra. InspecciónMediciónCloroquina y vilapamiCélulas tratadasRespuesta a la concentración y evaluaciónCE50Valor. Recuento total de AutofagiaLos datos muestran que,El tratamiento con cloroquina y vilapamiCélulasLos niveles de Autofagia aumentaron por separado.4.6Beihe3.3Veces()CE50Los valores son4.0y3.6 μM).

conclusión

Este método yIdentificación celularTintesCombinarSe puede utilizar para detectar partículas de Autofagia y para detectar los efectos del desarrollo y la cuantificación de compuestos en el proceso de autofagia.

referenciaDocumentación

1. 1. Mizushima, N.; Komatsu, M. (2011). Autofagia: renovación de células y tejidos. Celular. 147: 728–41

2. 2. Mizushima, N.; (2007). Autofagia: proceso y función, Genes & Dev. 21: 2861-2873