Resumen

Para las múltiples aplicaciones biológicas que monitorean el número de células, la reproducción, la salud, el grado de fusión y la citotoxicidad, es necesario realizarNadaCélulas marcadasDetección. estas aplicacionesnecesitarUso de luz transmitida efectiva y confiable(TL)Función de imagen y análisis, que proporciona una segmentación precisa para cuantificar las células y evaluar diversas respuestas y formas celulares. Además, la combinación de imágenes de luz transmitida de alto contraste e imágenes de etiquetado fluorescente para muchas pruebas basadas en célulasanalizarEs muy importante decirlo.

MetaXpress 6.5En el editor de módulos personalizadosTLEl algoritmo de segmentación celular es un método que utiliza luz transmitida para imágenes de células.YAlgoritmo de análisis cuantitativo optimizado y confiable. Esta nota de aplicación muestraTLPracticidad y precisión de la División celular.Análisis y cuantificación comparando el recuento total de células en la luz transmitida con el recuento de núcleos celulares teñidos de fluorescenciaCHOyHeLaAlgoritmos de las células (figura 1(...).

método

PonerCHOyHeLaLa dilución celular se inocula en negro, fondoTransparente96En el tablero de agujeros, desde la parte superior del tableroComienza la tabla de tela (en la línea superior)Por agujero20，000Células individuales(...). presione cada célula por1:2La proporción esSe realiza hacia abajo en la placa microporosa.diluir，6Un agujero complejo.Cultivo celular24horaDetrás, en37°C,5% de CO2 En la incubadoraHoechst 33342CélulasLos tintes nucleares tiñen las células30Min. Luego USA4%El poliformaldehído fija las células y las usaDPBSLavar dos veces. a través deImageXpressMicro®Sistemas de imágenes de alta connotación yMetaXpressEl software toma imágenes de las células. usar10x Plan de flúorEl objetivo toma imágenes de un campo de visión que puede capturar con precisión hasta1500Células individuales. Uso de luz transmitida yFluorescencia azulEl canal de fluorescencia toma la imagen, y el tiempo de exposición es15 msy35 ms.

ventaja

usar
Par de imágenes de luz transmitidaObjeto objetivoRealizar el monitoreo de División y conteoBajo luz transmitidaProliferación celular

Uso de múltiples métodos de análisisEvaluaciónTLEfecto del algoritmo de división celular

Conocer varios tipos y tamaños de célulasHerramientas cuantitativas
Herramientas cuantitativas y analíticas

Imagen 1:Configuración para analizar la luz transmitidaFilmardeHeLayCHOCélulasImagenMódulo personalizado. HacerusarHoechst 33342CélulasLos tintes nucleares tiñen las células. usarFluorescencia azulCanales yLuz transmitida(TL)Llevar a caboImágenes celulares,configuraciónMódulos personalizados para analizar y cuantificar células en función de imágenes de luz transmitida e imágenes de fluorescencia nuclear.

En el editor de módulos personalizadosconfiguraciónTLAlgoritmo de segmentación celular

La segmentación celular precisa es muy importante para cuantificar las células capturadas a través de la luz transmitida.ParaTLCélulasDivisiónCélulas seleccionadasAlgoritmosUnapuedeSegmentación precisayIdentificaciónHeLayCHOCélulas （Imagen 2). Hay otras opciones de configuración. CélulasAlgoritmosC. B.O célulasAlgoritmosCPoderPor separadoPara analizar células pequeñas o grandes.En el análisisEn el móduloSe puede configurarPara filtrar el área totalMenos150 pM2Células de (figura) 3). EstoConfiguración individualPoderaAsegúrese de evitar pequeñas células muertas que rodeanComoLas células vivas se cuentan y analizan.Además,Células configuradasEl algoritmo de recuento puedeaprecisoCuantificaciónHeLayCHOdeNúcleo (figura) 4).

CombinarRecuento celular y recuento de núcleos fluorescentes bajo luz transmitida

usarTLAlgoritmo de segmentación celularconfiguraciónLos módulos personalizados se pueden dividir con precisiónHeLayCHOCélulas (figura 6(...).No hay diferencias estadísticas entre el recuento total de células y el recuento nuclear en la luz transmitida,IndicarTLPrecisión del algoritmo de segmentación celular (figura 7). Además del recuento celular,TLEl algoritmo de división celular también puede generar múltiplesdatosPara evaluar la respuesta celular yCélulasDiferentes características de la morfología (figura 5). Por ejemplo, puede generar células y dentro de las célulasObjeto objetivoCuenta total y media, área, intensidad, forma, altura、Anchos y diversosotrosDiferentes lecturas. usarOpciones de filtroLa eliminación de las células muertas rodeadas puede ir más alláoptimizarEstoProceso y reducciónMenosLa necesidad de teñir con células vivas o con células enteras. Además, los núcleos se tiñen y cuentanCélulasverificarElefanteEl uso del algoritmo muestra que la imagen de luz transmitida se puede analizar.

Imagen 2. PonerTLEl algoritmo de segmentación celular se aplica a la selecciónHeLaImagen de luz transmitida por la célula.En el editor de módulos personalizados, se puedeaa través deconfiguraciónSelección de la longitud de onda de la fuente y el par de tipos de células representativasTLEl algoritmo de división celular se configura. CélulasAlgoritmosUnaPoderaEfectivamenteEn la imagen de reconocimientodeHeLayCHOCélulas.

Imagen3. TLDivisión celular superpuesta yDespués de configurar el filtro para filtrarImagen de comparación superpuesta. Área mínimaEstablecer como150 μm2aFiltrar死Células.

Imagen 4. usarVerificación celularElefanteDivisiónPar de módulosImagen del núcleo fluorescenteLlevar a caboCuenta.Las células se cuantifican de acuerdo con el núcleo celular,HacerusarHoechst 33342Par de núcleosLlevar a caboTeñir. Se optimizan las valoraciones de ancho mínimo y máximo y las intensidades que superan los parámetros de fondo locales para ser precisasIdentificacióntodoDetalleNúcleo celular.DetalleEl núcleo celular es azul (izquierda), análisisSombreadoEs amarillo (foto derecha).

Imagen5. HeLaImágenes representativas de las células,configuraciónAnálisis de imágenes del módulo personalizadométodo. azulSombreadoAprobada por el RepresentanteTLUso de algoritmos de segmentación celularTLfiltroCubrirCribado de blindajeLas células encontradas, representadas en amarillo, se verifican por recuentoElefanteEl núcleo descubierto por el algoritmo. Los elementos de determinación necesarios para personalizar el módulo se pueden realizar en la ficha determinación.configuración.NecesidadEl objeto a determinar esDefiniciónParapuedea través deTLDivisión celularAlgoritmosPara realizar el objeto sombreado, seleccione la verificación de conteoElefanteCubrirCegarDeterminación de cadaObjeto objetivoCaracterísticas.

Imagen6. HeLayCHOImágenes de las células, yaplicaciónTLMódulo personalizado de división celularDespués de la optimizaciónAnálisis de imágenesresultado.Fluorescencia azulEl núcleo se muestra en azul(izquierda)，En la imagenanalizarcentroMascarillaAmarillo(derecha)Las células en la luz transmitidaMáscara azul claro. aprobado10x Plan de flúorObjetivo enImageXpressMicroCaptura de imágenes en el sistema y utiliza nuevoTLEl módulo personalizado configurado por el algoritmo de segmentación celular analiza la imagen.

Imagen 7. Basado enTLDivisión celular y nuclearNúmero de objetosComparación de módulosHeLayCHOEl recuento total de células de la célula. Presionar1:2La proporción de células diluidas, desde cada agujero20，000Comienza la concentración de células individuales.

conclusión

MetaXpressEn el editor de módulos personalizadosTLEl algoritmo de división celular puedeaCuantificar y analizar eficazmente una variedad de tipos y tamaños de células.ImageXpress®Micro ConfocalLa función de segmentación optimizada apoyada por el sistema de análisis de imágenes de alta connotación de coque de disco giratorio se puede analizar independientemente del Grupo fluorescente.CélulasMorfología. Cuantificar las células con imágenes de luz transmitidapuedeHacer que la capacidad de detección de los investigadores sea más flexible. EstoInstrucciones de aplicaciónEl método descrito muestraTLLos algoritmos de segmentación celular se pueden utilizar en una variedad de pruebas, incluyendo, pero no limitado a, la proliferación, los estudios de Citotoxicidad y la transfección.