Como componente central de la separación cromatográfica, el rendimiento de la columna determina directamente la precisión y repetibilidad de los resultados del análisis. El mantenimiento científico puede prolongar significativamente la eficiencia de la columna y reducir la frecuencia de fallas. los siguientes puntos de mantenimiento se exponen sistemáticamente desde tres aspectos: especificaciones de uso, mantenimiento limpio y gestión de almacenamiento:
I. seguir estrictamente las condiciones límite de uso
Control del pH
Los rellenos de matriz de silicona tienen un rango de pH de tolerancia limitado (habitual), y más allá de este rango puede causar la degradación y desprendimiento de la fase de unión. Es necesario controlar estrictamente el pH de la fase móvil y, si es necesario, seleccionar columnas especiales resistentes a los álcalis (como sustratos de polímeros).
Ejemplo: el análisis de compuestos ácidos prioriza el sistema de sal tampón de pH para evitar la inyección directa de ácido puro en la muestra.
Control de presión y velocidad
Evitar la operación de sobrepresión a largo plazo (≤ valor máximo de presión), la alta presión es fácil de acelerar el colapso del relleno; En el uso inicial, se aumenta gradualmente la presión a las condiciones de trabajo para evitar daños repentinos en la estructura de la cama de columna.
El ajuste de la velocidad de flujo no debe exceder el valor recomendado (), aunque la alta velocidad de flujo acorta el tiempo de análisis, agrava el desgaste del relleno y reduce el número teórico de placas de torre.
Gestión de la temperatura
Las altas temperaturas pueden mejorar la separación de componentes complejos, pero las altas temperaturas a largo plazo (> 60 ° c) acelerarán la pérdida de líquido fijo. Se recomienda aumentar la temperatura de la columna solo si es necesario, y la tasa de calentamiento no excederá de 5 ° C / MIN cada vez.
2. plan de limpieza y regeneración periódica
Procedimiento de lavado convencional
Después del análisis diario, se enjuaga durante 30 minutos con una baja velocidad de flujo de la fase móvil inicial y luego se enjuagan los contaminantes hidrofóbicos con una solución acuosa que contiene entre el 5% y el 10% de nitrilo.
Las impurezas difíciles de lavar se pueden lavar mediante un gradiente: de una fase de agua alta a una fase orgánica alta, utilizando cambios en la polaridad del disolvente para quitar los residuos.
Tecnología de regeneración profunda
Cuando se acumulan contaminantes liposolubles, se pueden lavar a baja velocidad con soluciones preparadas con tensoactivos no iónicos (como Twain - 20);
La contaminación por complejos metálicos se puede eluir en línea a través de una solución EDTA de 0,01m (ph = 3);
Las sustancias fuertemente retenidas pueden probar el lavado inverso de la mezcla de metanol - nitrilo - diclorometano, pero es necesario confirmar la compatibilidad del relleno.
Advertencia de operación tabú
Está prohibido enjuagar directamente las columnas cromatográficas sin cola con ácidos fuertes como ácido clorhídrico / ácido fosfórico;
Evitar la limpieza de la columna de llenado por choque ultrasónico, lo que puede causar que el relleno se afloje.
III. estandarizar el proceso de almacenamiento y habilitación
Sellado a corto plazo (1 mes)
Reemplazar por una solución de conservación de nitrilo / metanol (95: 5) para inhibir el crecimiento microbiano; Suspensión vertical y almacenamiento para evitar el asentamiento desigual del relleno.
Reiniciar los pasos de activación
Después de descartar el líquido residual frontal, primero se equilibra con la fase móvil inicial durante 2 horas, y luego se introduce el estándar de muestra para verificar la recuperación de la eficiencia de la columna. Si se produce un factor de arrastre anormal, es necesario repetir el proceso de regeneración.
La vida útil de la columna se puede prolongar estableciendo procedimientos operativos estandarizados (sop) y realizando evaluaciones periódicas de la eficiencia de la columna (como la prueba del número de placas teóricas usp). Cuando el número teórico de placas de Torre cae por debajo del 70% del valor inicial, las columnas antiguas deben eliminarse a tiempo para evitar afectar la fiabilidad de los datos. La inversión científica en mantenimiento puede reducir considerablemente el costo de un solo análisis y mejorar la eficiencia general del laboratorio.