- Correo electrónico
- Teléfono
-
Dirección
307 Huaxia Science and Technology building, No. 8 Zhongguancun software park, Haidian district, Beijing
Categorías de producto
Beijing lanbolide Trading co., Ltd.
Reactivo de cloroformo en lugar del extractor de ácido nucleico trizor PAL
NegociableActualización en05/06
- modelo
- Naturaleza del fabricante
- Productores
- Categoría de producto
- Lugar de origen
Descripción general
El reactivo de cloroformo en lugar del extractor de ácido nucleico trizor pal se utiliza para la extracción de arn. El triol PAL (reactivo de cloroformo) se puede utilizar en combinación con el triol real (número de artículo: r1000), que puede reemplazar el cloroformo y extraer repetidamente el sistema de craqueo para eliminar proteínas, con una amplia gama de usos, y puede extraer ARN total de muestras de tejidos animales, materiales vegetales, diversos microorganismos y células cultivadas. Las muestras se dividen completamente en triazol, lo que garantiza al máximo la integridad del arn.
Detalles del producto
Reactivos de cloroformo de la generación de trizol pal para la extracción de ARNNúmero de artículo: r1200
Condiciones de almacenamiento: 0 - 30 ° C almacenamiento protegido de la luz
Reactivos de cloroformo de la generación de trizol pal para la extracción de ARNDescripción del producto:
El trizor pal, que se puede utilizar en combinación con el trizor real (número de artículo: r1000), puede reemplazar el cloroformo y extraer repetidamente el sistema de craqueo para eliminar proteínas, tiene una amplia gama de usos y puede extraer ARN total de muestras de tejidos animales, materiales vegetales, diversos microorganismos y células cultivadas. Las muestras se dividen completamente en triazol, lo que garantiza al máximo la integridad del arn. Después de la centrifugación con triazol pal, la solución se divide en tres capas: fase de agua incolora superior, fase intermedia y fase orgánica Roja inferior, y el ARN se distribuye en la capa superior. Después de recoger la capa superior de limpieza, el ARN total se puede recuperar después de la precipitación de alcohol isopropílico. El ARN total extraído es bueno en integridad, libre de contaminación por proteínas y adn, y se puede utilizar en varios experimentos convencionales de biología molecular, como RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、 Traducción in vitro, etc.
Reactivos propios
Triazol real (número de artículo: r1000), alcohol isopropílico, etanol al 75%, agua sin rnase (dedicada a la apertura nueva o extracción de arn)
Extractor de ácido nucleicoPrecauciones:
1. para prevenir la contaminación por rnase, se debe prestar atención a los siguientes aspectos:
1) utilice productos plásticos sin rnase y cabezas de pistola para evitar la contaminación cruzada.
2) la cristalería debe secarse a una temperatura de 180 ° C durante 4 horas antes de su uso, y la cristalería puede remojarse en 0,5 m NaOH durante 10 minutos, enjuagarse con Chedi con agua y esterilizarse a alta presión.
3) la solución debe prepararse con agua sin rnase.
4) los operadores usan máscaras y guantes desechables, y los guantes deben cambiarse con frecuencia durante el experimento.
2. las muestras extraídas evitan la congelación y el deshielo repetidos, de lo contrario afectan la tasa de extracción y la calidad del arn.
3. al usar este producto, debe usar artículos de protección, como guantes, vendas para los ojos, máscaras faciales, etc. Si se entra accidentalmente en contacto con los ojos, se debe lavar inmediatamente con una gran cantidad de agua y acudir al hospital para recibir tratamiento. Manténgase alejado del fuego y la fuente de calor durante su uso.
3. precipitación de ARN conservada en un 75% de etanol, 2 - 8 ℃ se puede conservar durante una semana y - 20 ℃ durante un año.
4. la semivida del ARN es relativamente corta y fácil de degradar. se recomienda realizar experimentos posteriores lo antes posible después de la extracción, como la transcripción inversa en adnc, Northern blot, etc.
5. si los experimentos aguas abajo son muy sensibles al adn, se recomienda procesar el ARN con dnase I sin rnase.
Pasos de operación:
1. tratamiento de diversos materiales.
1.1 tejido vegetal: tomar el tejido vegetal fresco y moler completamente en nitrógeno líquido o cortar el Grupo vegetal Zhi y moler rápidamente directamente en triazol, añadir 1 ml de triazol por cada 30 - 50 mg de tejido y mezclar bien.
Nota: el volumen de la muestra generalmente no debe exceder el 10% del volumen de triazol.
1.2 tejidos animales: cortar los tejidos animales frescos o congelados a - 70 ° C en la medida de lo posible, añadir 1 ml de triazol por cada 30 - 50 mg de tejido, y homogeneizar el instrumento para el tratamiento. O añadir triazol 1 ML para mezclar bien después de moler en nitrógeno líquido.
Nota: el volumen de la muestra generalmente no debe exceder el 10% del volumen de triazol.
1.3 células cultivadas de una sola capa: absorbiendo el medio de cultivo, se puede agregar directamente una cantidad adecuada de trizol a la placa de cultivo (se necesita 1 ml de trizol por cada 10 cm2 de área), y se puede romper la célula soplando repetidamente con el muestreador. También se puede utilizar la enzima Bai de huevo pancreático para transferir la solución celular a un tubo centrífuga de rnase - free, centrifugar 300 × G durante 5 minutos, recoger la precipitación celular, aspirar cuidadosamente todos los sobrenadantes y agregar triazol 1 ML para mezclar bien.
Nota: 1) el número de células recogidas no debe exceder de 1 × 107.
2) la adición de trnzol se determina en función del área de la placa de cultivo, no del número de células. Si la adición de trizor es insuficiente, puede causar contaminación del ADN en el ARN extraído.
3) al recoger las células, asegúrese de eliminar el medio de cultivo celular, de lo contrario causará que la lisis no sea completa, lo que provocará una reducción de la producción de arn.
1.4 suspensión celular: recolección centrífuga de células. Añadir 1 ml de triazol cada 5 × 10 6 - 1 × 10 7 animales, plantas y células de levadura o cada 107 células bacterianas.
Nota: 1) no lave las células antes de agregar triazol para evitar la degradación del arn.
2) algunas levaduras y células bacterianas pueden necesitar un homogeneizador o un tratamiento de molienda de nitrógeno líquido.
1.5 tratamiento hematológico: tomar directamente sangre fresca y agregar tres veces el volumen de triazol (se recomienda agregar 0,25 ml de sangre entera a 0,75 ml de triazol), agitar completamente y mezclar bien.
1.6 pasos opcionales: para muestras con alto contenido de proteínas, grasas, Polisacáridos o sustancias extracelulares, como los tubérculos del tejido muscular, el tejido adiposo o las plantas, se puede centrifugar durante 10 minutos a 12.000 RPM (~ 13.400 × g) a 4 ° C después del tratamiento de homogeneización para eliminar las sustancias insolubles, cuando la precipitación contiene ADN extracelular, Polisacárido y de alto peso molecular, mientras que el ARN está presente en el sobrenadante.
2. después de agregar triazol a la muestra, se sopla repetidamente varias veces para que la muestra se rompa completamente. Se colocó a temperatura ambiente durante 5 minutos para que el complejo de ácido nucleico proteico se separara por quan.
3. añadir trizor pal a la solución anterior, añadir 0,2 ml de trizor pal cada 1 ml de trizor, cubrir la tapa del tubo, oscilar violentamente durante 15 segundos y colocarlo a temperatura ambiente durante 2 - 3 minutos.
4. centrifugación a 12000 RPM a 4,4 ° C durante 15 minutos, cuando la muestra se divide en tres capas: fase orgánica roja, fase de agua incolora en la capa media y superior, y el ARN se encuentra principalmente en la fase de agua, transfiriendo la fase de agua (aproximadamente 600 μl) a un nuevo tubo centrífuga rnase - libre (autoproporcionado).
5. agregue el mismo volumen de alcohol isopropílico a la solución acuosa obtenida, invierta y mezcle bien, y colócalo a temperatura ambiente durante 10 minutos.
6. centrifugar 12000 RPM a 4 ° C durante 10 minutos y descartar el líquido superior.
7. añadir un 75% de etanol (preparado con agua sin rnase) para lavar y precipitar. Cada vez que se utiliza 1 ml de triazol, se lava la precipitación con 1 ml de etanol al 75%.
8. centrifugar 12000 RPM a 4 ° C durante 3 minutos, aspirar cuidadosamente el líquido superior y no aspirar la precipitación de arn.
Nota: la pequeña cantidad de líquido restante se puede centrifugar brevemente y luego aspirar con la cabeza de la pistola, tenga cuidado de no aspirar y descartar la precipitación.
9. deje a temperatura ambiente durante 2 - 3 minutos y seque. Añadir 30 - 100 μl de agua sin rnase, disolver completamente el arn, y el ARN obtenido se conserva a - 70 ℃ para evitar la degradación.
Nota: la precipitación no debe secarse demasiado para no ser difícil de disolver.
Producto similar Recomendar
