Polietileno imino lineal de grado de transfección (mw40000)

Presentación del producto

Polietileno imino lineal de grado de transfecciónMW40000) es un producto de reactivo de transfección instantánea basado en polietileno imino, que tiene un alto efecto de transfección. La polietileno imine es un polímero macromolecular orgánico con alta carga de iones positivos, que se une fácilmente a moléculas de ácido nucleico con carga negativa para formar compuestos con carga positiva. El complejo se une a los aniones de la superficie celular y entra en la célula a través de la endocitosis. El reactivo de transfección tiene baja citotoxicidad, es adecuado para una variedad de líneas celulares y es ampliamente utilizado en proteínas recombinantes.AAVProducción, etc.

yMW25000En comparación con los reactivos de transfección,MW40000El reactivo de transfección tiene una buena disolución y se puede disolver directamente en agua, sin necesidad de ajustar la solubilización ácido - base; La operación es más simple y el efecto de transfección es bueno.

información básica

Instrucciones de uso

Configuración del reactivo

Materiales necesarios:

Agua desionizada o superior, agua de grado biológico,1 mol/L* *NaOH), desechable0,1 a 0,2μm PESFiltro estéril al vacío, estérilHDPEO botellas de almacenamiento de polipropileno.

Configuración del líquido de almacenamiento:

① Poner1 gramoPolietileno imino lineal de grado de transfecciónMW40000(disuelta en900 mlAgua desionizada, revuelva bien en una batidora magnética hasta que se disuelva;

2) usar1 mol/L* ajustesEl pHa6,9 a 7,1(por ejemploEl pHMayor que7.1, con ácido clorhídricoEl pHValor ajustado a6,9 a 7,1);

③ Transferir la solución al cilindro medidor (o vaso medidor)Dentro, añadir aguaVolumen fijo a1 LV;

4. Con desechable0.2 µmFiltración al vacío del filtro para eliminar bacterias, es decir, obtener1 mg/mlEl líquido de almacenamiento;

⑤ Se puede empaquetar el líquido de almacenamiento según sea necesario y almacenarlo en4℃ se puede conservar1Meses.

Proceso de operación de transfección

Células vacunadas: para mejorar la eficiencia de la transfección, se recomienda vacunar las células el día anterior a la transfección para la densidad celular en el momento de la transfección.En70 a 80%Es apropiadoV;

prepararADN-Complejo de reactivos de transfección:

① PonerADN. los reactivos de transfección y los diluyentes vuelven primero a la temperatura ambiente;

2) Diluir la cantidad adecuada con un medio de cultivo libre de suero adecuadoADNV;

③ De acuerdo con un cierto porcentaje(cada1 μg de ADNNecesario1-5 μLReactivos de transfección, se recomienda explorar la proporción por sí mismo)Gotear el reactivo de transfección diluido en el recipienteADNTubo de ensayo de la solución(no invierta el orden de adición), por un ladosuavementeVórtice, completamente mezclado, reposo a temperatura ambiente10 a 25MinEclosión.

Células transfundidas:

① Cuando se transfirió en condiciones libres de suero, se eliminó el medio de cultivo celular y se reemplazó por un medio libre de suero;

2) Añadir una cantidad adecuada a la célulaADN-Complejo de reactivos de transfecciónMezclar suavemente, transfección6 - 8Después de las horas, reemplace el medio de cultivo recién precalentadoV;

③ EnCondiciones adecuadascentroCultivo, después de la transfección24HorasSe puede detectar la expresión del gen transferido (se puede determinar el tiempo de detección adecuado por sí mismo).

Condiciones de transporte y almacenamiento

Condiciones de transporte: transporte a temperatura ambiente

Condiciones de conservación: polvo a temperatura ambiente o4Grados Celsius conservación, período de validez2Año.

Precauciones

1. Para la mayoría de las células, cada1 μg de ADNusar3 μLLos reactivos de transfección pueden obtener una alta eficiencia de transfección, y también se puede probar cada1 μg de ADNusar1,5 ~ 4 μLLos reactivos de transfección se optimizan.

2. Para su seguridad y salud, Use ropa experimental y guantes desechables.

3. Este producto solo se utiliza para fines de investigación científica.