Polietileno imino lineal de grado de transfección (mw25000)

Polietileno imino lineal de grado de transfecciónMW25000) es un producto de reactivo de transfección instantánea basado en polietileno imino, que tiene un alto efecto de transfección. La polietileno imine es un polímero macromolecular orgánico con alta carga de iones positivos, que se une fácilmente a moléculas de ácido nucleico con carga negativa para formar compuestos con carga positiva. El complejo se une a los aniones de la superficie celular y entra en la célula a través de la endocitosis. Este reactivo de transfección tiene baja citotoxicidad, es adecuado para muchas líneas celulares y se ha utilizado ampliamente en proteínas recombinantes.AAVProducción, etc.

1. Configuración del reactivo

Materiales necesarios:

Agua desionizada o superior, agua de grado biológico,12 mol/Lácido clorhídricoHCl),10 mol/L* *NaOH), desechable0,1 a 0,2μm PESFiltro estéril al vacío, estérilHDPEO botellas de almacenamiento de polipropileno.

Configuración del líquido de almacenamiento:

① Poner1 gramoPolietileno imino lineal de grado de transfección25.000Disuelta en900 mlAgua desionizada, mezclada al mismo tiempo (se puede calentar hasta60 - 80℃ goteo lateral12 Mácido clorhídrico, ajustado aEl pHIII.2.0, agitar3Más de horas hasta la disolución;

2) usar10 M* ajustesEl pHa6,9 a 7,1V;

③ Transferir la solución al cilindro medidor (o vaso medidor)Dentro, añadir aguaVolumen fijo a1 LV;

4. Con desechable0.2 µmFiltración al vacío del filtro para eliminar bacterias, es decir, obtener1 mg/mlEl líquido de almacenamiento;

⑤ Se puede empaquetar el líquido de almacenamiento según sea necesario y almacenarlo en-20℃ se puede conservar1Año; El líquido de almacenamiento no se puede volver a congelar después de la descongelación.

2. Proceso de operación de transfección

Células vacunadas: para mejorar la eficiencia de la transfección, se recomienda vacunar las células el día anterior a la transfección para la densidad celular en el momento de la transfección.En70 a 80%Es apropiadoV;

prepararADN- reactivos de transfecciónComplejo:

① PonerADN. los reactivos de transfección y los diluyentes vuelven primero a la temperatura ambiente;

2) Diluir la cantidad adecuada con un medio adecuado sin proteínasADNV;

③ De acuerdo con un cierto porcentaje(cada1 μg de ADNNecesario1-5 μLReactivos de transfección, se recomienda explorar la proporción por sí mismo)Gotear el reactivo de transfección diluido en el recipienteADNTubo de ensayo de la solución(no invierta el orden de adición), por un ladoSuaveVórtice, completamente mezclado, reposo a temperatura ambiente10 a 25minutoEclosión.

Células transfundidas:

① Cuando se transfirió en condiciones libres de suero, se eliminó el medio de cultivo celular y se reemplazó por un medio libre de suero;

2) Añadir una cantidad adecuada a la célulaADN- reactivos de transfecciónComplejoMezclar suavemente, transfección6 - 8Después de las horas, reemplace el medio de cultivo recién precalentadoV;

③ En37℃,5% de CO₂IncubadoracentroCultivo, después de la transfección24horaSe puede detectar la expresión del gen transferido (se puede determinar el tiempo de detección adecuado por sí mismo).

Condiciones de transporte y almacenamiento

Condiciones de transporte: transporte a temperatura ambiente

Condiciones de conservación: polvo a temperatura ambiente o4Grados Celsius conservación, período de validez2Año.

Precauciones

1. Para la mayoría de las células, cada1 μg de ADNusar3 μLLos reactivos de transfección pueden obtener una alta eficiencia de transfección, y también se puede probar cada1 μg de ADNusar1,5 ~ 4 μLLos reactivos de transfección se optimizan.

2. Para su seguridad y salud, Use ropa experimental y guantes desechables.

3. Este producto solo se utiliza para fines de investigación científica.