Sistema de cultivo de células giratorias tridimensionales de microgravedad tdccs - 3D

Beijing keyu XingyeSistema de cultivo de células giratorias tridimensionales de microgravedad tdccs - 3DEl núcleo es simular la microgravedad espacial (10⁻ ò a 10⁻ g) a través de un recipiente giratorio de baja velocidad, dejando las células en un Estado de suspensión de caída libre continua y baja fuerza de corte, logrando así un cultivo celular / órgano tridimensional (3d) de alta simulación. Es la reducción actual del microambiente corporal.AcercarseUna de las técnicas in vitro.

I. principios básicos (mecanismo clásico de la NASA rwv / rccs(...)

Llenado líquido, sin burbujas: el recipiente de cultivo (cilindro / disco) está 100% lleno del medio de cultivo, excluyendo todas las burbujas y evitando la interfaz Gas - líquido y la turbulencia.

Rotación simultánea del eje horizontal: el recipiente gira lentamente alrededor del eje horizontal (5 a 20 rpm), y el líquido se mueve simultáneamente con el recipiente.

El vector de gravedad promedio es cero: la rotación cambia constantemente la dirección de la gravedad, y la gravedad promedio del tiempo celular es ¿ 0, en caída libre continua.

Suspensión de baja fuerza de cizallamiento: el líquido es laminar, la fuerza de cizallamiento es extremadamente baja (¿ 0,01 pa), las células no se adhieren a la pared, no chocan con la pared y se reúnen naturalmente para formar esferas / órganos similares a 3D.

3. ventajas tecnológicas básicas (comparación entre 2D y 3D estático)

Estructura 3D

Forma bolas / organoides tumorales uniformes, con proliferación externa, reposo en la capa media, estratificación de hipoxia y necrosis central, y reduce altamente la estructura tumoral / tisular del cuerpo.

Conservación de la sequedad y la heterogeneidad

Mantenimiento de células madre tumorales (gsc / Cancer stem cell) * * fenotipos (cd133, nestin)

Conservar la heterogeneidad de los genes / subgrupos celulares tumorales del paciente y evitar la detección clonal 2d

Protección de corte bajo

Conexión celular protectora, ECM de matriz externa, Citoesqueleto

Reducir el daño mecánico y estabilizar el cultivo a largo plazo (semanas)

Simulación de altura del microambiente

Gradiente anóxico natural (activación HIF - 1 alfa)Apoyar el cocultivo de células inmunes y fibrocitos para reconstruir el microambiente inmunosupresor tumoralLa detección de medicamentos es más precisa

La resistencia a la temozolomida, el Cisplatino y otros medicamentos es altamente consistente con el cuerpo.

El falso positivo es mucho menor que el 2d, lo que es más adecuado para la medicación personalizada y precisa.

IV. parámetros clave de cultivo (glioblastoma GBM comúnmente utilizado)

Velocidad de rotación: 10 a 15 RPM (la suspensión celular no se adhiere a la pared)

Densidad de vacunación: 1 × 10 ⁵ a 5 × 10 ⁵ células / ML

Medios de cultivo: dmem / F12 + B27 + EGF + bfgf (células madre) o rutina del 10% FBS

Matriz: se puede aumentar la baja concentración de matrigel (2 a 5%) para promover la estabilidad de la esfera

Cambio de líquido: cambiar de líquido cada 2 a 3 días y medio para evitar perturbar la esfera

Ciclo: de 7 a 14 días se forman bolas tumorales maduras de GBM

Sistema de cultivo de células giratorias tridimensionales de microgravedad tdccs - 3DEs el estándar de oro para simular la microgravedad espacial en tierra y construir tumores / organoides 3D de alta simulación, especialmente en el mantenimiento de células madre de glioblastoma, mecanismos de resistencia a los medicamentos y detección precisa de medicamentos.