Secuenciación de segunda generación

Secuenciación de segunda generaciónIntroducción:

La Epigenética (epigenética) es uno de los puntos calientes de la investigación actual en biología molecular. la secuenciación metilada del ADN es una parte importante de la Epigenética y una de las principales formas de modificación Epigenética del ADN genómico. La metilación del ADN se refiere a una forma modificada de transferir grupos metilados a bases de Citosina catalizadas por metiltransferasa del ADN (dnmts). Se produce principalmente en áreas ricas en islas CPG de ácido dinucleico. En circunstancias normales, las Islas CpG están presentes en forma no metilada (forma activa), y la metilación del ADN puede causar silencio en la expresión génica. La actividad anormal de los dnmts está estrechamente relacionada con la enfermedad. Desempeña un papel vital en el mantenimiento de la función celular normal, la transmisión de la huella genética genómica, el desarrollo embrionario y la aparición de tumores humanos.

Shanghai Wing y Biology se procesan a través de bisulfito, amplificando el fragmento de destino con PCR múltiple, agregando Barcode y secuenciando el conector universal, en llumina X10Secuenciación de segunda generaciónLa plataforma secuencia los productos PCR de alto rendimiento y utiliza métodos bioinformáticos para calcular con precisión y cuantitativamente el Estado de metilación de los sitios de metilación en el rango objetivo, lo que reduce considerablemente los costos de investigación al tiempo que completa la detección del área objetivo.

Hi - metathylseq combina la tecnología de conversión de sulfitos y secuenciación de alto rendimiento de amplicones dirigidos, lo que permite un análisis cuantitativo preciso de la metilación en múltiples segmentos y puntos. Este método es adecuado para el estudio de metilación de fragmentos de propósito de interés, confirmando aún más los sitios positivos seleccionados por el estudio de metilación de todo el genoma en muestras grandes.

El tratamiento con sulfitos pesados es el estándar de oro para el tratamiento del ADN genómico en la secuenciación de metilación del adn. es un proceso químico que puede causar daño al adn. es difícil lograr una eficiencia de conversión del 100% y mantener la integridad del ADN al mismo tiempo. los dos necesitan hacer un cierto equilibrio. Se seleccionaron tres secuencias de islas no CPG fuera de la zona objetivo de Hi - metathylseq como control interno para evaluar con precisión la conversión de la muestra.