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Medio de cultivo celular especial SW 1990 (l15)

NegociableActualización en05/06

modelo

Naturaleza del fabricante: Productores

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Descripción general

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Detalles del producto

Atributos del producto:

nombre del producto	especificación	forma del producto
Medio de cultivo celular especial SW 1990 (l15)	125ml × 4	líquido

Detalles del producto:

Cuidadosamente optimizado por el equipo técnico, este producto se puede mantener después de pruebas a largo plazo.El mejor estado de crecimiento de las células SW 1990. Este producto ya contiene varios ingredientes necesarios para el crecimiento de las células SW 1990, sin necesidad de agregar ningún ingrediente, y se puede utilizar directamente en el cultivo in vitro de las células SW 1990. Este producto es solo para investigación científica adicional y no se puede utilizar para diagnóstico, tratamiento, clínica, familia y otros fines.

Descripción del producto

forma del producto: líquido

Concentración del producto: 1 ×

Especificaciones del producto: 125ml × 4

Componentes del medio de cultivo: L-15 de Leibovitz + 10% FBS + 1% P / S

Detección de bacterias: negativo

Detección de hongos: negativo

Detección de micoplasma: negativo

Experimento de crecimiento celular: las células crecen bien y tienen una morfología normal

Contenido de LPS(UE/ml): ≤3

Condiciones de almacenamiento: 2 a 8 ° c, almacenamiento protegido de la luz

Condiciones de transporte: transporte refrigerado en bolsas de hielo

Período de validez: 3 meses

Informe experimental:

I. aislamiento y cultivo:

2. identificación por inmunofluorescencia:

1. en condiciones estériles, se extrae el tejido auricular de las ratas de SD de 1 - 3 días de edad, luego se limpia este bloque de tejido dos veces con PBS y finalmente se convertirá en aproximadamente 1 mm3;
2. añadir 4 ml de líquido digestivo enzimático (0,1% y 0,1% colagenasa tipo i) al bloque de tejido, suspender durante 10 segundos, digerir a 37 ° C durante 10 minutos, luego soplar con un gotero para hacer una suspensión unicelular, precipitar y recoger el suero naturalmente, y colocar a 4 ° C después de terminar la digestión con un medio de cultivo FBS que contiene 10%;
3. añadir 3 a 4 ml de líquido digestivo enzimático al tejido restante, suspender durante 10 segundos, digerir a 37 ° C durante 10 minutos, recoger el suero superior de acuerdo con el método anterior y terminar la digestión y colocarlo a 4 ° c. repetir este paso 2 - 3 veces hasta que el tejido sea digerido;
4. filtrar el líquido digestivo celular con un tamiz de acero inoxidable de 200 mallas, centrifugar 1200r / MIN durante 10 minutos, descartar el sobrenadante, precipitar las células con suspensión de medio de cultivo que contiene 10% FBS dmem / f12, inocular en un frasco de cultivo de 25 cm 2, colocarlas a 37 ° C y cultivarlas en una incubadora de CO2 al 5%;
5. después de pegar la pared a una velocidad diferencial durante 1 hora, se succiona el medio de cultivo y se inocula en una placa de 6 agujeros para continuar el cultivo de acuerdo con las necesidades del experimento;

1. cuando los miocitos auriculares crezcan hasta el 80% de fusión, abandone el medio de cultivo, lave las células 2 veces con PBS cultivados a temperatura ambiente, 10 minutos cada vez, y luego fije las células a temperatura ambiente durante 15 minutos con poliformaldehído al 4%;
2. el PBS enjuaga las células dos veces, 10 minutos cada vez, y luego penetra la película con un 0,1% de Tritón X - 100 a 4 ° C durante 15 minutos;
3. el PBS enjuaga las células dos veces, 10 minutos cada vez, y luego cierra las células con un 4% de BSA durante 30 minutos a temperatura ambiente;
4. diluir alfa - Acción un anticuerpo en una proporción de 1: 100, y luego colocarlo en un refrigerador a 4 ° C para incubar células durante la noche;
5. el PBS enjuaga las células tres veces, 10 minutos cada vez, diluye la resistencia secundaria a la alfa - Acción en una proporción de 1: 150 y las coloca durante 1 hora a 37 ° c;
6. enjuagar con PBS tres veces, 10 minutos cada vez, y finalmente observar la imagen bajo un microscopio fluorescente invertido y tomar una foto.

Protocolo de operación:
I. preparación de los medios de cultivo y las condiciones de congelación del cultivo:
1) preparar el medio de cultivo rpmi - 1640, 90%; Suero bovino fetal de alta calidad, 10%.
2) condiciones de cultivo: fase gaseosa: aire, 95%; Dióxido de carbono, 5%. Temperatura: 37 ° c, humedad de la incubadora del 70% al 80%.
3) liofilizado: 90% suero, 10% dmso, listo para usar, almacenado en nitrógeno líquido.
II. tratamiento celular:
1) células de reanimación: coloque rápidamente el criostorio que contiene 1 ml de suspensión celular en un baño de agua a 37 ° c (la superficie del agua debe estar por debajo de la tapa del criostorio) para Sacudirlo y descongelarlo, y mueva al tubo centrífuga de 15 ML preparado previamente que contiene un medio de cultivo de 4 ML para mezclar uniformemente. Centrifugar durante 4 minutos a 1000 rpm, descartar el líquido sobrenadante, añadir 1 ml de medio de cultivo y soplar bien. A continuación, todas las suspensiones celulares se trasladan a un frasco de cultivo que contiene un medio de cultivo de 5 ML para el cultivo durante la noche. Al día siguiente, cambie de líquido y compruebe la densidad celular.
2) transmisión celular: si la densidad celular alcanza el 80% - 90%, se puede realizar el cultivo de transmisión.
Para las células suspendidas, la transmisión puede referirse a los siguientes métodos:
Método 1: recoger células,1000RPM， Centrifugar a temperatura ambiente durante 5 minutos, descartar el sobrenadante, añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo y soplarlo bien, y dividir la suspensión celular en una nueva placa de Petri o botella que contenga 8 ml de medio de cultivo en una proporción de 1: 2 a 1: 5.
Los productos de la compañía solo se utilizan para la investigación científica.

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