SK - N - be (2) + células de neuroblastoma humano Luc + Luc

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Características celulares

Especies y géneros:Fuente humana..Homo sapiens(...)

Fuentes organizativas:CerebroCerebro(...)

Enfermedad:NeuroblastomaNeuroblastoma(...)

edad: 2Años2 Años(...)

Género:Hombre..Hombre(...)

Tipo de célula:Neuroblastos..Neuroblast(...)

Características de crecimiento:Crecimiento pegado a la pared y suspendido..Adherente y suspensión(...)

Contenido:>1x10^6Número de células

Especificaciones:T25Botellas o1 mlEmbalaje de tubo de almacenamiento congelado

Uso: solo para investigación científica.

Transporte y conservación

Transporte de hielo seco y reanimación de células vivas

（1(...)1 mlEmbalaje de almacenamiento congelado y transporte de hielo seco, después de la recepción-80Después de conservar durante la noche, el refrigerador se transfiere al nitrógeno líquido o se recupera directamente. si se encuentra que el hielo seco se ha volatilizado y limpio, la tapa del congelador se ha desprendido, se ha roto y las células están contaminadas, Póngase en contacto con nosotros de inmediato.

（2(...)T25Las células sobrevivientes de la reanimación de la botella se envían a temperatura ambiente y se operan de acuerdo con el método de tratamiento después de la recepción celular después de la recepción.

Tratamiento después de la recepción celular

1) después de recibir la célula,75%La pared de la botella desinfectante con alcoholT25Colocación de la botella37℃ la incubadora se coloca aproximadamente2-3hSi se encuentra que la botella de cultivo está rota, hay un derrame de líquido y las células están contaminadas, Póngase en contacto con nosotros a tiempo después de tomar una foto.

2) por favor, en4O5XConfirmar el Estado de la célula bajo el microscopio y tomar fotos de la célula recién recibida..10×,20×) cada uno2 - 3Se conservan una foto de la apariencia del frasco de cultivo como base para el Estado de la célula cuando se recibe después de la venta.

3) células adherentes: las células están en37Colocar en la incubadora2-3hBajo el microscopio, se observa el crecimiento y la adherencia de las células, y algunas células adheridas se desprenden y se agrupan debido a la vibración durante el transporte expreso. Si se observa la densidad de crecimiento celular bajo el espejo, si60%A continuación, se puede eliminar el medio de cultivo de infusión en el frasco de cultivo (si hay células no adheridas que necesitan ser recicladas por centrifugación, la suspensión pesada se introduce en el frasco de cultivo original),Añadir un medio de cultivo especial recién preparado6-8 ml, en una caja de cultivo celular para continuar el cultivo. Si la densidad de crecimiento celular alcanza70% - 80%Lo anterior permite el tratamiento de paso de las células. Durante el proceso de transmisión, si las células que se desprenden debido al transporte de vibraciones necesitan ser recicladas por centrifugación.

4Nota: el medio de cultivo utilizado para el transporte (medio de cultivo de infusión) ya no se puede utilizar para cultivar células, por favor, cambie por uno recién preparado de acuerdo con las condiciones de cultivo celular de las instrucciones.especializadoMedios de cultivo para cultivar células. Recomendación para la primera transmisión después de recibir la célulaT25Botella de cultivo1:2De generación en generación.

I. preparación de los medios de cultivo y las condiciones de congelación del cultivo:

1(...)DMEM/F12Medio de cultivo+10% FBSSuero bovino fetal+1% P/SDoble resistencia

2(...) Condiciones de cultivo: fase gaseosa: aire,95%; dióxido de carbono,5%. temperatura:37Grados centígrados, la humedad de la incubadora es70% - 80%.

3(...) Liofilizado:90%Suero,10% de DMSOEstá disponible.

II. Tratamiento celular:

1(...) Recuperación de células congeladas:

Contendrá1 mlEl criotubo de la suspensión celular está en37Sacudir rápidamente y descongelar en un baño de agua, añadir a contiene4-6 mlespecializadoLa mezcla es uniforme en el tubo centrífuga del medio de cultivo. En1000RPMCentrifugación en condiciones3-5 minutos, abandona el líquido shangqing,especializadoLas células de suspensión pesada del medio de cultivo. A continuación, se añade la suspensión celular al6-8 mlespecializadoEn el frasco (o placa de petri) del medio de cultivo37℃ cultivo durante la noche. Al día siguiente, se observó el crecimiento celular y la densidad celular bajo el microscopio.

2(...) Transmisión celular: si la densidad celular alcanza80% - 90%Se puede llevar a cabo el cultivo de generación en generación.

Para la transmisión de células adherentes, se pueden consultar los siguientes métodos:

1. Abandonar el sobrenadante de cultivo y usar iones de calcio y magnesio libresPBSHumedecer las células1 - 2Veces.

2. unirse0.25%..W / V) TripsinaEDTA de 0,53 mMEn la botella de cultivo..T25botella1-2 ml,T75botella2-3 ml), colocado en37Digestión en incubadora1 - 2Minutos (las células difíciles de digerir pueden prolongar adecuadamente el tiempo de digestión) y luego observar la digestión celular bajo un microscopio. si la mayoría de las células se redondean y se caen, se recuperan rápidamente de la Mesa de operaciones y se añaden después de golpear el frasco de cultivo varias veces.3-4 mlIncluyendo10% FBSEl medio de cultivo para terminar la digestión.

3. Después de mezclar suavemente, aspirar, en1000RPMCentrifugación en condiciones3-5 minutosAbandonar el líquido superior y reponer1-2 mlSoplar bien después del medio de cultivo. Presione la suspensión celular1:2La proporción se divide en NuevaT25En la botella, añadir6-8 mlNuevo configurado de acuerdo con los requisitos de las instruccionesespecializadoMedios de cultivo para mantener la vitalidad del crecimiento celular, y la transmisión posterior se basa en la situación real.1: 2 a 1: 5La proporción se lleva a cabo.

3) Criopreservación celular:Después de recibir la célula se recomienda antes del cultivo3Se congeló un lote de semillas celulares para su uso experimental posterior.

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