Analizador de células sin etiqueta en tiempo real

RTCA TP de xCELLigenceAnalizador de células sin etiqueta en tiempo realSe pueden detectar diversas células adherentes detectando la Citotoxicidad de varios compuestos, el cocultivo celular, el crecimiento y la proliferación celular, la adhesión y extensión celular, y las vías de señalización mediada por receptores.

Características

1. en comparación con los métodos tradicionales, el sistema de análisis puede proporcionar un mayor nivel de sensibilidad y previsibilidad de detección.

2. el sistema admite hasta tres usuarios para realizar experimentos simultáneos de detección y análisis celular

3. se puede configurar e - Plate al mismo tiempo para detectar varias células adheridas a la pared midiendo la Citotoxicidad de varios compuestos, el cocultivo celular, el crecimiento y la proliferación celular, la adhesión celular y la extensión, así como la vía de señalización 4 y la vía mediada por el receptor.

5. el analizador de células en tiempo real está especialmente diseñado y se puede colocar en una incubadora de CO2 durante el experimento.

6. bajo el control del software de análisis, se puede detectar la resistencia de tres e - Plate (16 agujeros) de forma paralela e independiente.

7. los resultados del sistema se envían a la Plataforma de trabajo del sistema de análisis celular en tiempo real para su procesamiento, visualización y análisis.

Indicadores de rendimiento

tecnología

Análisis de la resistencia celular

El método de detección celular está entre las pruebas bioquímicas reductoras y los experimentos in vivo de organismos en su conjunto, y es una herramienta importante en la investigación biológica básica y aplicada. Sin embargo, la utilidad de muchos métodos de detección celular se reduce debido a los siguientes factores: (1) la necesidad de usar marcadores, (2) la incapacidad de realizar un monitoreo continuo (es decir, solo se pueden generar datos de punto final), (3) la incompatibilidad con otros métodos de detección ortonormal y (4) la incapacidad de proporcionar lecturas objetivas / cuantitativas. Sin embargo, cada una de estas deficiencias ha sido superada por métodos de detección de resistencia celular no invasivos, no marcados y en tiempo real.

Unidades funcionales para la detección de la resistencia celular

La unidad funcional de la detección de resistencia celular es un grupo de microelectrodos de oro fusionados en la superficie inferior del agujero de la placa de microtitulación (figura 1). Cuando estos electrodos se sumergen en una solución conductora, como un amortiguador o un medio de cultivo de tejido estándar, la aplicación de un potencial eléctrico a través del electrodo hace que el electrón salga del negativo, pase por el cuerpo de la solución y luego se deposite en el electrodo positivo, completando así el circuito. Debido a que este fenómeno depende de la interacción entre el electrodo y el cuerpo de la solución, las células adherentes presentes en la interfaz electrodo - Solución obstaculizan el flujo de electrones. El tamaño de esta resistencia depende del número de células, el tamaño y la forma de las células y la calidad de la adhesión de las células al estroma. Es importante que ni la superficie del microelectrodo de oro ni el potencial aplicado (22 mv) afecten la salud o el comportamiento de las células.

Electrodos de Resistencia

En cada agujero de la placa de microtitulación electrónica (e - plates) de agient, los biosensores de microelectrodo de oro cubren entre el 70% y el 80% de la superficie (dependiendo de si existe o no un área de observación). A diferencia de los pares de electrodos simplificados mostrados en la figura 1, los electrodos en cada agujero de e - plates se conectan en "tiras" para formar una Matriz escalonada (figura 2). Esta disposición permite monitorizar simultáneamente la población celular, lo que permite detectar con extrema sensibilidad los siguientes indicadores: el número de células adheridas a la placa, el tamaño / morfología de las células y la calidad de la adhesión de las células a la matriz.

Análisis de la curva de resistencia en tiempo real

La resistencia al flujo de electrones causada por la adherencia celular se expresa a través de un índice celular de parámetros adimensionales (ic), en el que Ci = (resistencia en el punto de tiempo n - resistencia cuando no hay células) / valor nominal de resistencia. La figura 3 proporciona un ejemplo general de la curva de resistencia en tiempo real durante la configuración y operación del experimento de apoptosis.

La resistencia aumenta rápidamente en las primeras horas después de que la célula se agrega al agujero de cultivo. Esto se debe a que las células caen del Estado de suspensión, se depositan en los electrodos y forman una adherencia de enfoque. Si el número de células añadidas inicialmente es menor y hay espacio libre en la parte inferior del agujero de cultivo, las células proliferarán, lo que provocará un aumento gradual y constante del índice celular (ic). Cuando las células alcanzan el Estado de confluencia, los valores de IC tienden a estabilizarse, lo que refleja que la parte de la superficie del electrodo que puede ser contactada por un gran número de medios de cultivo ya no cambia. En este momento, la adición de un inductor de la apoptosis hará que el valor de IC disminuya a cero. Esto se debe a que las células se redondean y se desprenden de la parte inferior del agujero de cultivo. Aunque este ejemplo genérico se refiere a la adición de fármacos cuando las células se unen, el método de determinación basado en la resistencia es muy flexible y también permite evaluar la velocidad y el grado en que las células se adhieren inicialmente a los electrodos, o la velocidad y el grado en que las células proliferan.

La correlación entre la resistencia y los fenómenos celulares

La tecnología de análisis celular en tiempo real (rtca) proporciona un medio para detectar cuantitativamente el número de células, la tasa de proliferación, el tamaño / morfología celular y la calidad de la adhesión celular a la matriz. Debido a que estas propiedades físicas son una manifestación integral de miles de productos genéticos / proteicos diferentes, la tecnología rtca puede reflejar el Estado de salud y el comportamiento de las células de manera extremadamente amplia. Desde la función de barrera endoteliales, la quimiotaxia hasta la citolítica mediada por pseudopodos filamentosos e inmunocitos, el instrumento xceligence ha analizado con éxito muchos aspectos de los fenómenos celulares. A pesar de su amplia gama de aplicaciones, las pruebas de xcelligence pueden explorar fenómenos bioquímicos y celulares muy específicos. Al utilizar racionalmente las técnicas de control y / o ortodoncia, podemos asociar las características de la curva de resistencia con fenómenos celulares / moleculares específicos. Para profundizar en la forma en que se establece esta asociación y presenciar la sensibilidad y versatilidad de la tecnología rcca de xcell leigh, navegue por las numerosas aplicaciones específicas que se destacan aquí.

Principio de funcionamiento

Detección del comportamiento celular en tiempo real en condiciones fisiológicas

RTCA TP de xCELLigenceAnalizador de células sin etiqueta en tiempo realLa tecnología basada en la resistencia permite detectar automáticamente continuamente la salud y el comportamiento de las células en una incubadora celular estándar de CO2 en segundos a días. Basta con añadir la célula a la e - placa para iniciar el monitoreo en tiempo real del número de células, la tasa de proliferación celular, el tamaño de la célula, la morfología celular y la intensidad de la adhesión celular - estroma.

Descripción de la técnica de resistencia celular

Este análisis de resistencia celular en tiempo real de alta sensibilidad utiliza un microelectrodo de oro fundido en la parte inferior de la placa e, que puede detectar las características celulares de manera no invasiva. Las células adherentes presentes en la Unión del electrodo con la solución obstaculizan el flujo de electrones. La fuerza de la resistencia depende del número, tamaño, forma de la célula y la fuerza de adhesión de la matriz celular. Ni la superficie del electrodo de oro micro ni el potencial eléctrico utilizado (22 mv) afectarán la vitalidad celular y el comportamiento celular.

Flujo de trabajo de detección simple y estable

El flujo de trabajo xcelligence rtca puede ayudar a los usuarios a obtener datos de análisis cuantitativo de alta sensibilidad y alta reproducibilidad, al tiempo que reduce considerablemente el tiempo de procesamiento manual. Con solo agregar las células a la placa de agujero e - plate, se puede comenzar a detectar el número de células, la tasa de proliferación celular, el tamaño de las células, la morfología celular y la intensidad de la adhesión celular - estroma en tiempo real. Se utiliza el índice celular, un parámetro sin unidad, para informar sobre la resistencia de la corriente celular causada por las células adheridas.

aplicación

Detección de destrucción de células inmunes

Las pruebas convencionales de destrucción de células inmunes son largas y laboriosas, y requieren que los usuarios utilicen una variedad de combinaciones tecnológicas para recopilar datos de múltiples puntos de tiempo. Por el contrario, el instrumento rtca sin etiqueta xceligence proporciona información completa sobre la matanza de células inmunes y simula aproximadamente la actividad in vivo. La eficacia letal de las células inmunes se detecta directamente en tiempo real con alta sensibilidad y alta reproducibilidad. Este simple flujo de trabajo de alto rendimiento puede estudiar en profundidad el mecanismo de Acción celular, la destrucción continua y la insuficiencia.

Detección del efecto de la lesión viral

Utilice el instrumento Agilent xceligence rtca para detectar con precisión los efectos citopatológicos (cpe) del virus en tiempo real, avanzando en su investigación de tratamiento antiviral o desarrollo de vacunas, sin necesidad de realizar experimentos de manchas aéreas que requieran mucho tiempo y esfuerzo. Monitorear automáticamente el CPE viral en minutos a días reduce drásticamente la carga de trabajo y el procesamiento manual de muestras. Detectar la dinámica de proliferación celular, determinar el mejor momento para la infección viral bajo diferentes densidades de vacunación celular y evaluar las lesiones celulares mediada por virus en el flujo de trabajo.

Análisis de Citotoxicidad

Los efectos citotóxicos de los fármacos o compuestos se determinan mediante el monitoreo en tiempo real de la proliferación celular, el tamaño o la morfología celular y la intensidad de la adhesión celular - estroma. Monitorear la dinámica de las reacciones celulares a largo plazo utilizando este análisis de Citotoxicidad simple y de alto rendimiento. Sin aumentar la carga de trabajo, se toman decisiones inteligentes sobre el tiempo de procesamiento celular y se genera fácilmente una curva de respuesta a la dosis en varios puntos de tiempo.

Detección de adherencia celular

El cáncer primario cae millones de células en el sistema circulatorio durante la formación del tumor, conocido como células tumorales circulantes (ctc). Los CTC pueden volver a adherirse, propagarse y trasladarse a órganos remotos. Con xcelligence rtca, se monitorea de manera sostenible la dinámica de adhesión de diferentes tipos de células y se entiende más profundamente la complejidad de la metástasis. Evaluar cuantitativamente la adhesión y extensión de las células en tiempo real sin el uso de reactivos fluorescentes o tintes.

Detección de señalización celular

Receptor de acoplamiento de Proteína G (gpcr), receptortirosina quinasaLa señalización mediada por (rtk) o las hormonas nucleares a menudo conduce a cambios bioquímicos que afectan el número de células presentes, el tamaño / morfología de las células y la cercanía con la que las células interactúan con la superficie de la placa. Con xceligence rtca, puede captar sensiblemente los cambios en el tamaño, morfología y tasa de proliferación de las células con los eventos de señalización celular. Este monitoreo continuo sin etiqueta permite una evaluación cuantitativa de la respuesta celular durante los primeros minutos y días después del tratamiento.

Detección de células madre

La investigación con células madre ayuda a comprender los mecanismos de la enfermedad, ayuda al desarrollo de la medicina regenerativa y proporciona una alternativa para probar la fiabilidad y eficacia de los nuevos medicamentos. Predecir el funcionamiento de los productos de células madre y evaluar la variabilidad de las células madre mesenquimales (mscs) utilizando xcelligence rtca para superar los desafíos en la producción de productos de terapia celular. Mejorar sustancialmente la eficiencia del análisis con menos células, detectar continuamente cambios combinados en el número de células, la intensidad de adhesión y la morfología, y garantizar la consistencia en todas las etapas.

Análisis de la función de barrera celular

La función de barrera celular es proporcionada por células endoteliales y epiteliales y puede verse comprometida en muchos Estados de enfermedad. Las células endoteliales están dispuestas en la superficie interior de los vasos sanguíneos y linfoides. Las células epiteliales forman la superficie de nuestro cuerpo como una barrera que protege al cuerpo de moléculas exóticas. El método de detección rtca de xceligence basado en la resistencia es un método cuantitativo sensible que puede reemplazar métodos tradicionales como la detección de permeabilidad solutosa y la detección de resistencia celular transendotelial (teer) para detectar daños en la barrera.