Kit Elisa de melatonina de rata (mt)

Kit Elisa de melatonina de rata (mt)

lEste kit se utiliza para pruebas cuantitativas in vitroMuestras de suero, plasma, homogeneización de tejidos y líquidos relacionadoscentroMelatonina en ratas()MT) contenido.

lValidez: 6 meses

lCondiciones de conservación:2-8℃

lEste Kit es solo para investigación científica y no debe usarse para diagnóstico clínico.

Principios experimentales

El kit utilizó el método de sándwich de doble anticuerpo en un solo paso prueba de inmunoabsorción enzimática (elisa). En los microporos de la envoltura que preenvasan los anticuerpos capturados por la melatonina (mt) de las ratas, se añaden sucesivamente especímenes, estándares y anticuerpos de detección marcados con hrp, que se crían a temperatura y se lavan. Con el sustrato tmb para colorear, tmb se convierte en azul catalizado por peróxido y amarillo final bajo la acción del ácido. La oscuridad del color se relacionó positivamente con la melatonina de rata (mt) en la muestra. La Absorbancia (valor de do) se determina a una longitud de onda de 450 nm con un medidor estándar enzimático y se calcula la concentración de la muestra.

Manejo de muestras y requisitos

1. Suero:Las muestras de sangre entera recogidas en el tubo de separación de suero se dejan a temperatura ambiente durante 2 horas o 4 ° C durante la noche, y luego se centrifuga 1000 × G durante 20 minutos, se puede extraer el líquido superior o se puede conservar a - 20 ° c o - 80 ° c, pero se debe evitar la congelación y descongelación repetidas.
2. Plasma:Las muestras se recogen con EDTA o Heparina como anticoagulante y se centrifugan durante 15 minutos a 2 - 8 ° C 1000 × g en los 30 minutos posteriores a la recolección, se puede detectar con el sobrenadante o se conservan a - 20 ° c o - 80 ° c, pero se debe evitar la congelación y descongelación repetidas.
3. homogeneización de tejidos:Enjuagar los tejidos con PBS preconfriados (0,01m, pH = 7,4) para eliminar la sangre residual (los glóbulos rojos agrietados en el homogeneizado afectan los resultados de la medición) y cortar los tejidos después del pesaje. El tejido cortado se compara con el volumen correspondiente de PBS (generalmente en una relación peso - volumen de 1: 9, como una muestra de tejido de 1G que corresponde a 9 ml de pbs, el volumen específico se puede ajustar adecuadamente de acuerdo con las necesidades experimentales y hacer un buen registro. Se recomienda agregar inhibidores de proteasa al pbs) en un homogeneizador de vidrio y moler completamente sobre Hielo. Para romper aún más los tejidos y las células, el homogeneizado se puede triturar por ultrasonido o congelar y descongelar repetidamente. Después de eso, el homogeneizado se centrifuga en 5000 × G durante 5 a 10 minutos y se extrae para su detección.

4. sobrenadante de cultivos celulares u otros especímenes biológicos:Centrifugar 1000 × G durante 20 minutos, tomar el líquido superior para detectarlo, o guardarlo a - 20 ° c o - 80 ° c, pero se debe evitar la congelación y descongelación repetidas.

Nota: la Hemólisis de la muestra puede afectar los resultados de la prueba posterior, por lo que la Hemólisis de la muestra no es adecuada para esta prueba.

Reactivos y equipos necesarios pero no proporcionados

• Medidor de estándar enzimático (450 nm)

• Muestreador de alta precisión y cabeza de pistola: 0,5 - 10ul, 2 - 20ul, 20 - 200ul, 200 - 1000ul

• Incubadora de 37 ° C

• Agua destilada o desionizada

Composición del kit

Kit Elisa de melatonina de rata (mt)PreparaciónNota:

1. la concentración estándar es: 80, 40, 20, 10, 5, 2,5 pg / ML.

2. después de un gran número de pruebas de especímenes normales, los valores normales de concentración de los especímenes están dentro del rango de detección proporcionado por el kit, y se puede tomar directamente una muestra de 50 μl durante el experimento. Cuando algunos valores de la muestra superan la concentración del gran estándar de zui, la muestra se puede diluir adecuadamente con una dilución de muestra antes de realizar el experimento.

Precauciones

• Educar estrictamente de acuerdo con el tiempo y la temperatura prescritos para garantizar resultados precisos. Todos los reactivos deben alcanzar una temperatura ambiente de 20 - 25 ° c Antes de su uso. Refrigerar y conservar el reactivo inmediatamente después de su uso.

• El lavado incorrecto de la placa puede conducir a resultados inexactos. Asegúrese de secar el líquido en el agujero tanto como sea posible antes de agregar el sustrato. No deje que los microporos se sequen durante el proceso de calentamiento.

• Eliminar el líquido residual en el Fondo de la placa y las huellas dactilares, de lo contrario afectará el valor de od.

• La solución de color del sustrato debe ser incolora o de color muy claro, y la solución del sustrato que se ha vuelto azul no se puede usar.

• Evitar la contaminación cruzada de reactivos y especímenes para evitar resultados erróneos.

• Evite la exposición directa a la luz fuerte durante el almacenamiento y el calentamiento.

• Después de equilibrar a temperatura ambiente, abra la bolsa de sellado para condensar las gotas de agua en la placa fría.

• Ningún reactivo de reacción puede entrar en contacto con el disolvente de blanqueamiento o el gas fuerte emitido por el disolvente de blanqueamiento. Cualquier ingrediente blanqueador destruye la actividad biológica de los reactivos de reacción en el kit.

• No se pueden usar productos caducados.

• Si es posible transmitir la enfermedad, todas las muestras deben manejarse bien y las muestras y los dispositivos de detección deben procesarse de acuerdo con los procedimientos prescritos.

Preparación del reactivo

El kit debe extraerse del ambiente refrigerado y debe equilibrarse a temperatura ambiente antes de que pueda usarse.

Dilución de 20 × amortiguador de lavado: el agua destilada se diluye a 1: 20, es decir, 1 porción de 20 × amortiguador de lavado más 19 partes de agua destilada.

Pasos de operación

1. Retire las tiras necesarias de la bolsa de papel de aluminio después de equilibrar la temperatura ambiente durante 20 minutos, y las tiras restantes se sellan y devuelven a 4 ° c con una bolsa selfie.

2. Establecer agujeros estándar y agujeros de muestra, y los agujeros estándar se añaden con diferentes concentraciones de productos estándar 50 μl cada uno;

3. Añadir 50 μl de muestra a probar en el agujero de la muestra; No se agregan agujeros en blanco.

4. Además de los agujeros en blanco, se añaden 100 μl de anticuerpos de detección marcados con peróxido de rábano picante (hrp) a cada agujero del agujero estándar y el agujero de muestra, se sellan los agujeros de reacción con una película de sellado y se incuban en una olla de baño de agua a 37 ° c o en una incubadora durante 60 minutos.

5. Descartar el líquido, secar el papel absorbente de agua, llenar el detergente (350 μl) en cada agujero, Dejar reposar durante 1 minuto, eliminar el detergente, secar el papel absorbente de agua, lavar la placa cinco veces así (también se puede lavar la placa con una lavadora).

6. Cada agujero se añade 50 μl de sustratos a y b, y se incuba a 37 ° C para evitar la luz durante 15 minutos.

7. Se añade 50 μl de líquido de terminación a cada agujero, y el valor de od de cada agujero se determina a una longitud de onda de 450 nm en 15 minutos.

Cálculo de los resultados experimentales

Tomando el valor de od del estándar medido como coordenada horizontal y el valor de concentración del estándar como coordenada vertical, dibuja la curva estándar en el papel de coordenada o con el software relevante, y obtiene la ecuación de regresión lineal, reemplaza el valor de od de la muestra en la ecuación y calcula la concentración de la muestra.

Rendimiento del kit

• Rango de detección: 2,5 pg / ML – 80 pg / ML.

• Sensibilidad: baja concentración de detección inferior a 0,1 pg / ML.

• Especificidad: no reacciona cruzadamente con otros análogos estructurales solubles.

• Repetibilidad: el coeficiente de variación dentro de la placa es inferior al 10% y el coeficiente de variación entre las placas es inferior al 15%.

explicación

Debido a que las condiciones existentes y el nivel científico y tecnológico aún no pueden identificar y analizar completamente todas las materias primas proporcionadas por todos los proveedores, este producto puede tener ciertos riesgos técnicos de calidad.

• Los resultados finales del experimento están estrechamente relacionados con la efectividad del reactivo, el funcionamiento relevante del experimentador y el entorno experimental en ese momento. asegúrese de preparar suficientes copias de Seguridad de especímenes.

• Puede haber algunas diferencias en el mismo producto en diferentes lotes, como: límite de detección, sensibilidad y tiempo de desarrollo de color, por favor, realice la operación experimental de acuerdo con las instrucciones en el kit, y la versión electrónica del Manual del sitio web solo se utiliza como referencia.

• Solo el uso total de los reactivos de apoyo de este kit puede garantizar el efecto de la prueba y no se puede mezclar con productos de otros comerciantes. Los resultados de la prueba de * solo se obtendrán siguiendo estrictamente las instrucciones experimentales de este kit.

• La compañía solo es responsable del propio kit y no del consumo de muestras causado por el uso del kit. se pide a los usuarios que reserven muestras suficientes teniendo plenamente en cuenta el posible uso de las muestras antes de usarlos.

• Los homogeneizados de tejidos o extractos celulares preparados con lisados químicos pueden desviar los resultados de los experimentos de Elisa debido a la introducción de ciertos productos químicos.

• Si la muestra es el sobrenadante del cultivo celular, puede haber situaciones que no se pueden detectar porque hay muchos factores de interferencia en este tipo de muestras, como: Estado celular, número de células, tiempo de muestreo, etc.

• Ciertas proteínas naturales o recombinantes, incluidas las proteínas recombinantes procarióticas y eucariotas, pueden no ser detectadas porque no coinciden con los anticuerpos de detección y captura utilizados en este producto.