Marca de anticuerpos contra la proteína lipídica 2

Detalles:

Nombre en inglés:PLP2

Alias en inglés:A4; proteína dependiente de la diferenciación A4; A4-LSB; A4LSB; proteína A4 dependiente de la diferenciación; Proteína A4 dependiente de la diferenciación; proteína A4 de la membrana intestinal; MGC126187; PLP2; PLP2_HUMAN; proteolípidoproteína2 (enriquecida en colonicepitelio); Proteolípido2.

Reacción cruzadaHumano, Ratón, Rata, Cerdo, Caballo, Conejo

marca: No conjugado

Fuente de anticuerpos: Conejo

Tipo de anticuerpos: policlonal

Inmunógeno: KLH conjugado péptido sintético derivado de PLP2 humano

Localización de células proteicas: membrana celular

Método de purificación:afinidadpurificadapor ProteinA

SubtipoIgG

Rasgos: líquido

Concentración: 1 mg / ml

Líquido de almacenamiento0,01 MTBS (pH7,4) con 1% BSA, 0,03% Proclin300 y 50% Glicerol.

Condiciones de conservación: Enviado4 ℃. Almacenar a -20°C por año. Evite ciclos de congelación/descongelación repetidos.
Los productos de la compañía solo se utilizan para la investigación científica.

Proceso de preparación de anticuerpos:

1. materiales y reactivos

A. IG animal extraído

B. adyuvantes de Freund y adyuvantes de Freund

D. conejos de animales de experimentación

Otros materiales y reactivos

2. elija el cuerpo vivo del experimento.

3. realizar experimentos de inmunidad animal.

4. pruebe una muestra de sangre para probar para ver el efecto inmunológico.

5. si la inmunidad es exitosa, matar al cuerpo vivo del experimento y recoger todo el suero.

6. purificar los anticuerpos.

7. identificación de anticuerpos. Suero de vaca fetal (recolección estéril)
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Pasos de operación:

1. desparafinado e hidratación. Remoje la Sección de parafina en xileno fresco durante 15 minutos y repita tres veces. Después de eliminar el exceso de líquido, se coloca sucesivamente en etanol anhidro, etanol 95%, etanol 90%, etanol 80% y etanol 70%, remojando cada uno durante 5 minutos y enjuagando con agua destilada (o agua del grifo) durante 5 minutos. Enjuagar las rebanadas durante 5 minutos con un tampón PBS (reactivo 1, disolver el polvo seco en 1l de agua desionizada) y repetirlas tres veces.

2. reparación de antígenos. Coloque la Sección de tejido desparafinada e hidratada en el estante de la Sección de plástico resistente a altas temperaturas en el vaso de precipitados (o caja de reparación), agregue una cantidad adecuada de líquido de reparación 1 × líquido de reparación del antígeno de citrato de sodio (reactivo 2, diluya 100 × líquido de reparación del antígeno de citrato de sodio más agua desionizada en 1 × líquido de reparación del antígeno de citrato de sodio), la superficie del líquido debe sumergirse a cierta altura del tejido de la sección, coloque la Caja de reparación en agua hirviendo durante 15 minutos para hervir y reparar, retire la placa de vidrio y enfríe naturalmente a temperatura ambiente. Enjuagar las rebanadas con un amortiguador PBS durante 5 minutos y repetirlas tres veces.

atención: al reparar el antígeno, el líquido de reparación debe garantizar que la sección siempre esté empapada en el líquido. en general: la cantidad del líquido de reparación es de aproximadamente 800ml / 1 estante.
3. bloquear la peroxidasa endógena. Secar las láminas de vidrio con papel absorbente de agua, dibujar un círculo alrededor del tejido con una pluma inmunohistoquímica, gotear 50 μl de bloqueador endógeno de peroxidasa (reactivo 3) en el tejido de la sección para bloquear la peroxidasa endógena, incubar a temperatura ambiente durante 30 minutos, lavar la sección con un amortiguador PBS durante 5 minutos y repetir tres veces.

4. bloqueo serológico. Secar las láminas de vidrio con papel absorbente de agua, gotear 50 μl de líquido de trabajo de suero de cabra normal (reactivo 5) y cerrar a 37 ° C durante 20 minutos para reducir el no

Mancha específica.

5. una resistencia a la incubación. Diluir una solución antigénica en una solución de trabajo con una diluyente de anticuerpos (reactivo 4), limpiar el líquido alrededor del tejido de vidrio con papel absorbente de agua, añadir una cantidad adecuada de solución de trabajo de anticuerpos y colocarla en una caja húmeda a 4 ° C para incubar durante la noche o a 37 ° C para incubar durante 1H - 2h.

6. recuperación. Después de pasar la noche a 4 ° c, se toman muestras del refrigerador y se incuban a temperatura ambiente durante 15 minutos para volver a calentar (la incubación de anticuerpos es de 4 ° C durante la noche para seleccionar este paso, como la incubación a temperatura ambiente entra directamente en el siguiente paso de limpieza). Enjuagar las rebanadas con un amortiguador PBS durante 5 minutos y repetirlas tres veces.

7. incubación de Resistencia secundaria. Después de secar el corte con papel absorbente de agua, gotear 50 μl de IgG anticonejo de oveja (reactivo 6), incubar a 37 ° C durante 20 minutos y usar PBS

Enjuagar las rebanadas con tampónCinco minutos, tres repeticiones.

8. tres resistencias a la incubación. Después de secar el corte con papel absorbente de agua, se incuba con 50 μl de proteína blanca de la enzima de la cadena marcada por la rábano picante (reactivo 7), se incuba a 37 ° C durante 20 minutos, se enjuaga el corte con un amortiguador PBS durante 5 minutos y se repite tres veces.

9. color. Eliminar el amortiguador PBS y secar las rebanadas con papel absorbente de agua; Cada rebanada se gotea con 50 μl de líquido de trabajo DAB recién preparado (reactivo 8: reactivo 9: reactivo 1 = 1: 1: 18), se incuba durante 3 - 5 minutos, se observan los resultados de la tinción bajo un microscopio óptico y no se debe mostrar demasiado oscuro; Después del desarrollo del color, enjuague las rebanadas con agua del grifo para terminar el desarrollo del color.

10. volver a teñir. Añadir una cantidad adecuada de solución de teñido de suculenta (reactivo 10) para volver a teñir, incubar durante 1 - 5 minutos, enjuagar con agua del grifo durante 5 minutos, añadir ácido clorhídrico para diferenciar el alcohol

Diferenciación líquida30 segundos, lavado con agua corriente.

11. sello deshidratado. Coloque las láminas de vidrio en etanol al 70%, etanol al 80%, etanol al 90%, etanol al 95% y etanol anhidro a su vez, remoje durante 5 minutos cada una, y luego remoje las láminas de vidrio en xileno durante 15 minutos, repita tres veces. Sacar las rodajas de vidrio y secarlas ligeramente y sellarlas con goma de mascar neutral.

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