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Medio de contraste de microburbujas de ultrasonido animal preclínico

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Descripción general
El agente de control de burbujas uspheetm Bubble es un medio de contraste de microburbujas de ultrasonido animal preclínico (solo para fines científicos). después de la inyección intravenosa, puede mejorar la señal de ultrasonido en la sangre para mejorar el diagnóstico de enfermedades cardiovasculares o la detección de tumores. Este medio de contraste ultrasónico utiliza el gas de perfluoroobutano (c4f10) como gas central y el material externo de fosfolipids como microburbuja de membrana única de la cáscara.
Detalles del producto
Introducción del producto del medio de contraste de microburbujas ultrasónicas uspheetm

I. introducción básica del producto
1.1 estructura física
Agente de contraste de burbujas USphereTM 系Medio de contraste de microburbujas de ultrasonido animal preclínico(solo para fines científicos), después de la inyección intravenosa, puede aumentar la señal de ultrasonido en la sangre para mejorar el diagnóstico de enfermedades cardiovasculares o la detección de tumores. Este medio de contraste por ultrasonido utiliza el gas octofluoropane (perflutren, c3f8) como gas central y el material fosfolipids como material de cáscara en el exterior. Como se muestra en la figura 1, a través de la capacidad de Autoensamblaje de fosfolípidos, la capa de Fosfolípidos puede formar una película protectora que ralentiza eficazmente la difusión de gas (diferenciación), evitando que las microburbujas se fusionen entre sí para sintetizar burbujas más grandes y estabilizando la circulación en el cuerpo, aumentando el tiempo de contraste. La cáscara de Fosfolípidos suele estar compuesta por 2 - 3 tipos de fosfolípidos; La superficie fue modificada por polietileno glicol (pet), lo que evitó la aglomeración entre las cáscaras de Fosfolípidos y mejoró su biocompatibilidad.

临床前动物超声微泡造影剂
Figura 1 diagrama esquemático de la estructura de la microburbuja
Figura 1 Estructura de las Microburbujas


1.2 Composición de la cáscara
En la actualidad, los materiales de cáscara de los principales medios de contraste ultrasónico están dominados por fosfolipidos, cuya ventaja es que los fosfolipidos pueden formar una monocapa bien elástica, protegiendo las microburbujas para producir vibraciones estables en la emisión ultrasónica, mostrando así excelentes características acústicas y mejorando el efecto de la imagen ultrasónica.
1.3 Análisis de la composición del gas
En la actualidad, la mayoría de los productos de medios de contraste por ultrasonido vendidos en el mercado utilizan perfluorocarbonos. En comparación con el aire, los perfluorocarbonos tienen un mayor peso molecular, una solubilidad muy baja en agua y una lenta tasa de difusión; Por lo tanto, la barrera de energía teórica de los perfluorocarbonos que penetran en la membrana fosfolípida es alta. Los perfluorocarbonos pueden ralentizar efectivamente la velocidad de descarga de las microburbujas, lo que a su vez mejora el tiempo de contraste de las microburbujas. La composición del gas utilizado por uspheretm también es perfluorocarburo.

2. comparación de productos competitivos y análisis de ventajas
Los medios de contraste ultrasónicos comerciales comunes son opticontm (ge healthcare), definitity en los Estados Unidos. ® (Lantheus Medical Imaging)、 Sonovuetm (braco) en el sistema europeo y sonazidm (ge healthcare) en el sistema japonés. La tabla de comparación de medios de contraste comerciales comunes se muestra en la tabla 1.
Ventaja 1. uspheretm tiene una distribución muy excelente del tamaño de las partículas en comparación con otros productos (como se muestra en la figura 2), y su frecuencia de resonancia de microburbujas es más adecuada para el alcance de los instrumentos médicos actuales, lo que mejora considerablemente la intensidad de la señal ultrasónica. En segundo lugar, una buena distribución del tamaño de las partículas puede controlar los efectos biológicos causados por la corrosión por acupuntura estable e inercial, reduciendo así su riesgo potencial en la detección de enfermedades cardiovasculares y aumentando su seguridad durante la administración de medicamentos.
Ventaja 2. los productos de la serie uspheretm tienen un tamaño de partícula más pequeño, proporcionando una calidad de imagen más detallada, manteniendo la intensidad de retrodispersión en la parte profunda del tejido.
Ventaja 3. la concentración de microburbujas en el volumen unitario de uspheretm puede alcanzar los 2,5x1010bubbles / ml, que es la concentración más alta en productos similares. Debido a su pequeño tamaño de partícula y alta concentración, la angiografía en el sitio tumoral es más obvia.
Ventaja 4. el uspheretm tiene buenas características de estabilidad y suspensión (como se muestra en la figura 3) y puede usarse tanto para algunos estudios acústicos (como el escaneo de campo ultrasónico y el análisis del Estado del fluido).
Ventaja 5. el tiempo de circulación in vivo de uspheretm es tan alto como 6 - 15 minutos (como se muestra en la figura 4), lo que favorece los experimentos in vivo. Tres días después de la activación de kaifeng, se puede mantener una alta calidad, lo que facilita los experimentos in vivo. Por su parte, sonovuetm, que actualmente tiene una alta proporción de ventas, solo tiene 6 horas de uso después de la apertura.

临床前动物超声微泡造影剂临床前动物超声微泡造影剂

Figura 2 caracterización física de uspheretm: izquierda:Microscopía electrónica (crio - tem); Derecha:Mapa de distribución del tamaño de las partículas (multisizer 3, uspcompliant)

Figura 2. Caracterización de USphereTM. Izquierda: TEM (Cryo-TEM); Derecha: distribución de tamaño (Multisizer3, conforme a USP)

Tabla 1 ecografía comercial común, angiografía y tabla de comparación
Tabla1 Comparaciones de agentes de contraste de ultrasonido comercializados
Nombre del producto fabricante Shell
Composición
Gas
Composición
Tamaño medio de las partículas
(ur)
Tamaño de partícula inferior a 10
Proporción de microburbujas de Mu m
Concentración de microburbujas
(partículas/ml)
Tiempo de uso
(mínimo)
OptisonTM GE Salud Médica
Diagnósticos
Albúmina (nota: ciudad actual
El campo ha eliminado la tecnología)
C3F8 3,0 - 4,5 95% 5.0-8.0x108 1 - 5
Definición® Imágenes médicas Lantheus Lípidos / Tensoactivos C3F8 1,1 - 3,3 98% 1.2x1010 3,4 - 7,1
SonoVueTM Diagnósticos Bracco Lípidos / Tensoactivos SF6 20 - 3,0 99% (<11μm) 0,9-6x109 3 - 6
SonazoidTM GE Salud Médica
Diagnósticos
Lípidos C4F10 2.1 99,5% 1.2x109 6 - 15
UsphereTM Confiar en Bio-sonics/United Well Lípidos / Fosfolípidos C3F8 1,1 - 1,4 > 99,9% 2.0-3.0x1010 6 - 15





临床前动物超声微泡造影剂 临床前动物超声微泡造影剂

Figura 3imagen de la suspensión de uspheretm en solución acuosaFigura 4 Comparación del tiempo de circulación in vivo entre uspheretm y sonovuetm. SonoVueTM 180s; USphereTM540s.

Figura 3 USphereTM en suspensión acuosa Figura 4. Comparación del tiempo de circulación in vivo con SonoVueTM


III. tipos y aplicaciones de productos

Producto 1. Prime
Prime es lo más básicoMedio de contraste de microburbujas de ultrasonido animal preclínicoEl tipo es un excelente medio de contraste de microburbujas diseñado para la ecografía de animales pequeños. Debido a sus características de pequeño tamaño de partícula, alta concentración y buena estabilidad, y su frecuencia de resonancia cubre 1 - 40 mhz, es adecuado para equipos de ultrasonido de alta resolución (como vevo2100, sistemas braco, etc.), así como la mayoría de los sistemas de ultrasonido médico disponibles en el mercado. Prime puede proporcionar excelentes imágenes de contraste y es ampliamente aplicable en la investigación básica.
Las aplicaciones más básicas de Prime son los procesos diagnósticos para detectar necesidades de alta sensibilidad, como la hemoinfusión (como se muestra en la figura 5), detectar la microcirculación, ayudar a calcular el flujo sanguíneo y la infusión miocárdica. El uso de medios de contraste de microburbujas puede mejorar la intensidad de la señal de retrodispersión de los tejidos profundos, lo que a su vez puede extender efectivamente la profundidad de imagen del sistema de ultrasonido.

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Figura 5 resultados de la prueba de hemoinfusión abdominal en ratones con uspheretm (ultrasonido animal pequeño vevo2100)

Figura 5. Detección de la perfusión sanguínea del abdomen de los ratones

Otras aplicaciones de extensión incluyen:
(1) diagnóstico cardiovascular
Observación asistida del Movimiento de la pared ventricular, diagnóstico de defectos diafragmáticos Auriculares o ventricular, juicio del grado de isquemia miocárdica y diagnóstico de ubicación, diagnóstico auxiliar de enfermedad coronaria, evaluación de la dilatación en globo y seguimiento de la reocclusión vascular postoperatoria.
(2) diagnóstico oncológico
El flujo sanguíneo tumoral (figura 6) se compara con el diagnóstico de metástasis tumorales y la detección de cáncer de mama.

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Figura 6 detección de flujo sanguíneo en tumores de piernas de ratones con el sistema de imágenes ultrasónicas de alta frecuencia vevo2100 combinado con Prime
Figura 6 Perfusión de sangre tumoral de ratones con Prime en Vevo 2100
(3) otros
Desarrollo de nuevos medicamentos, diagnóstico auxiliar de cirrosis hepática, detección del alcance de la cauterización por radiofrecuencia del tejido hepático y desarrollo de algoritmos de sistemas de ultrasonido. Debido a que las microburbujas pueden cooperar con la ecografía para estimular a las células a aumentar la permeabilidad y promover la liberación de medicamentos. Las microburbujas también se pueden utilizar en mediciones de campo acústico industrial (medidas de campo acústico), etc.


Producto 2. rastreador
Los productos Tracer se basan principalmente en el acoplamiento adicional de sustancias fluorescentes (agentes fluorescentes) en prime, lo que permite que las microburbujas se puedan aplicar a la detección de fluorescencia además de como medio de contraste ultrasónico. Los usos comunes incluyen:
(1) estudio farmacodinámico
La sustancia fluorescente se considera un modelo Drug y se observa la Farmacodinámica de las microburbujas bajo fluorescencia. La figura 7 muestra la observación de la hemodinámica y distribución del rastreador con el modelo de ventana de ratón.
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Figura 7 inyección de Tracer en el modelo de la Sala de ventanas para observar la Farmacodinámica
Figura 7 Análisis farmacocinético del trazador en el modelo de cámara de ventana de ratones

(2) monitoreo de Liberación de medicamentos impulsado por ultrasonido
También se considera que la sustancia fluorescente es un modelo de drug, junto con el impulso de la ecografía, para observar la liberación de medicamentos dentro de la microburbuja por la ecografía, y también se puede evaluar preliminarmente el tratamiento farmacológico. La figura 8 muestra que después de que el ratón fue impulsado por ultrasonido para liberar sustancias fluorescentes, el sistema ivis (perkinelmer) mostró que las piernas del ratón con ultrasonido en el lado derecho tenían acumulación de señales fluorescentes.
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Figura 8 Seguimiento de la liberación de fármacos impulsados por ultrasonido con ivis
Figura 8 Entrega y liberación de fármaco (trazador) impulsado por ultrasonido in vivo

(3) investigación sobre la liberación de fármacos celulares
Estudiar la liberación de medicamentos impulsados por ultrasonido en experimentos celulares (figura 9).
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Figura 9 El rastreador impulsado por ultrasonido en las células libera sustancias fluorescentes
Figura 9 Entrega y liberación in vitro de fármaco (trazador) impulsado por ultrasonido

Producto 3. Deliver
Los productos Deliver cargan principalmente microburbujas cargadas clínicamente en prime con el medicamento doxolubicin (dox), lo que permite que las microburbujas, además de servir como medio de contraste por ultrasonido, logren el propósito de liberar medicamentos impulsados por ultrasonido y tratar tumores. La mayor ventaja de Deliver es que después de inyectarse en el cuerpo vivo, primero puede utilizar la función de desarrollo de microburbujas para presentar la posición del tumor en la imagen ultrasónica, y luego fortalecer la ecografía en la posición objetivo puede impulsar la liberación masiva de medicamentos en Deliver en el lugar objetivo para lograr la eficacia de la localización tumoral *. La figura 10 muestra los resultados del tratamiento con Deliver en el osteosarcoma: la necrosis tumoral (necrósis) se puede observar con un desarrollador ultrasónico el quinto día después del tratamiento.

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La imagen de la izquierda de la figura 10 muestra una imagen del microscopio fluorescente de deliver; La imagen de la derecha muestra la liberación de Dox por Deliver impulsado por ultrasonido para el tratamiento, donde se puede observar necrosis interna del tumor el quinto día después del tratamiento.

Figura 10 Izquierda: imagen de microscopía de fluorescencia de entrega; Derecha: Necrosis tumoral al día 5 después de la inyección de Deliver.

Producto 4. labeler
Los productos labeler, por su parte, modifican las moléculas biológicas * o la ovoalbúmina en la cáscara del prime, y los usuarios pueden unir anticuerpos para que las microburbujas tengan la capacidad de adsorción específica y puedan realizar una ecografía específica para lugares especiales. La figura 11 muestra la modificación de anti - vegfr2 anti - Body en labeler, donde se puede observar la adsorción específica de microburbujas en un gran número de células cancerosas que expresan este anticuerpo.

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Figura 11 Modificación de anti - vegfr2 antisimody en labeler para que las microburbujas puedan adsorberse de manera masiva y específica a células cancerosas que expresan este receptor de anticuerpos

Figura 11 Marcador marcado con anticuerpo anti-VEGFR2 aplicado para dirigirse a células cancerosas positivas a VEGF

Producto 5.trans
El producto Trans + consiste en agregar un material Fosfolípido con carga positiva al material de la cáscara del Prime para que la cáscara de la microburbuja tenga carga positiva, y el usuario puede absorber fragmentos genéticos con carga negativa (adn / arn) en la cáscara de la microburbuja con un simple principio de adsorción eléctrica; Luego, impulsado por ultrasonido, se logra la eficacia de la entrega genética y la transferencia genética.

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Figura 12 adsorción de ADN que puede expresar fluorescencia en Trans +, utilizando ultrasonido para impulsar la liberación de genes y la transfección, se puede ver que las células de Glioma cerebral c 6 después de la transfección expresan fluorescencia de manera uniforme.

Figura 12 Tamaño completo Turbo Verde absorbedo Trans+ dirigido a células de glioma C6 seguido de la expresión de turbo verde


IV. estudios de aplicación realizados hasta la fecha
Descripción del uso
Después de la prótesis del pie izquierdo del cerdo, el Estado del flujo sanguíneo se observó con imágenes ultrasónicas y medios de contraste ultrasónicos para determinar si la prótesis fue exitosa.
1. inyectar un medio de contraste ultrasónico fluorescente Label en el músculo de la pierna del ratón para observar el tiempo de retención y el alcance de la retención de las microburbujas en el tejido muscular. 2. experimentos con células transgénicas para observar la actividad de los medios de contraste por ultrasonido y ultrasonido.
En el modelo animal tumoral, se inyecta un medio de contraste por ultrasonido intravenoso para observar el Estado tumoral con ultrasonido.
Después de la quemadura eléctrica en las extremidades del cerdo, se inyectó un medio de contraste ultrasónico por vía intravenosa para observar el éxito de la quemadura eléctrica con ultrasonido.
Recubrir el medicamento con microburbujas y cooperar con la ecografía para la entrega del medicamento.
En ratas obesas, se inyectó un medio de contraste por ultrasonido intravenoso para cooperar con el ultrasonido para la detección de la obesidad.
El medio de contraste por ultrasonido intravenoso, combinado con ultrasonido, se analizó en un modelo de cáncer de hígado con patrón de cáncer típico.
Conecte la fluorescencia a la microburbuja como modelo Drug y gotee la solución de remojo de agua de la microburbuja del canal auditivo sobre el tímpano, con una ecografía especial, para la entrega del medicamento (desde el tímpano hasta el oído medio).
La transferencia genética se realiza en las células con medio de contraste ultrasónico combinado con ultrasonido.
Se desarrolló un algoritmo de imagen ultrasónica de alta frecuencia con medio de contraste ultrasónico y ultrasonido de alta frecuencia.
BBB - open, junto con la hifu, se realiza con medios de contraste ultrasónicos, así como la posterior entrega de medicamentos y entrega genética.
Recubrir el medicamento con microburbujas y cooperar con la ecografía para la entrega del medicamento.
1. BBB - open, así como la posterior entrega de medicamentos y entrega genética, se realiza con medio de contraste ultrasónico combinado con ultrasonido enfocado. 2. la evaluación de lesiones se realizó en el modelo de ventana - Cámara con medio de contraste ultrasónico combinado con hifu. 3. evaluación de parámetros físicos y efectos biológicos con medio de contraste ultrasónico y ultrasonido enfocado. 4. utilice directamente las microburbujas como medio de contraste de resonancia magnética. 5. observar la acción de las microburbujas y la hifu con resonancia magnética.
Reference standard, desarrollado como desarrollador.
El algoritmo de imagen se desarrolla con medios de contraste ultrasónicos y ultrasonido.
En el modelo de cáncer de hígado de ratón, se inyectó un medio de contraste por ultrasonido intravenoso para observar el Estado del flujo sanguíneo tumoral con ultrasonido y desarrollar nuevos medicamentos.
La observación dinámica de la sonocirugía celular se realizó con medio de contraste ultrasónico combinado con ultrasonido.
Recubrir el medicamento con microburbujas y cooperar con la ecografía para la entrega del medicamento.
El uso de microburbujas con ultrasonido para mejorar el transporte de medicamentos.

V. lista de documentos
1.S.T. Kang et al., 'Un modelo in vitro basado en maleimida para la imagen dirigida por ultrasonidos', Sonoquímica de Ultrasonidos, vol. 18, 2011.
2.C.H.Wang et al., 'Nanobumbullas Conjugadas con Aptamer para Imágenes Moleculares de Ultrasonido Dirigidas', Langmuir, vol. 27, 2011.
3. S.T. Kang et al., 'Vaporización de gotas acústicas intracelulares en un único macrofago peritoneal para aplicaciones de administración de fármacos,' Langmuir, vol.27, 2011.
4.C.H.Wang et al., 'Aptamer-conjugado y Droga-cargado de gotas acústicas para la teranosis por ultrasonido,' Biomateriales, vol.33, 2012.
5.S.T.Kang et al., 'Agentes de contraste de microburbujas de ultrasonido para aplicaciones diagnósticas y terapéuticas: estado actual y diseño futuro', Chang Gung Medical Journal, vol. 35, 2012.
6.C.Y.Ting et al., 'La apertura simultánea de la barrera sangre-cerebro y la administración local de fármacos utilizando microburbujas portadoras de fármacos y ultrasonidos enfocados para el tratamiento del glioma cerebral', Biomateriales, vol. 33, 2012.
7.P. Chonpathompikunlert et al., 'El tratamiento de nanopartículas redox protege contra el déficit neurológico en la hemorragia intracerebral inducida por ultrasonido enfocada', Nanomedicine, vol. 7, 2012.
8. C. H. Fan et al., 'Detección de la hemorragia intracerebral y la escasez transitoria de suministro sanguíneo en la perturbación de la barrera sanguínea-cerebral inducida por ultrasonido enfocada mediante imágenes por ultrasonido', Ultrasonido en Medicina y Biología, vol. 38, 2012.
9.C.H.Wang et al., 'Superparamagnetic Iron Oxide and Drug Complex-Embedded Acoustic Drops for Ultrasound Targeted Theranosis', Biomaterials, vol. 34, 2013.
10. C.H. Fan et al., 'Antiangiogenic-Targeting Drug-Loaded Microbubbles Combined With Focused Ultrasound for Glioma Treatment', Biomaterials, vol.34, 2013.
11.C.H.Fan et al., 'Microburbujas cargadas con doxorubicina conjugadas con SPIO para la MRI concurrente y la entrega de fármacos para tumores cerebrales mejoradas por ultrasonido enfocado', Biomaterials, vol. 34, 2013.
12.S.L.Peng et al., 'Utilizando Microburbujas como Agente de Contraste de RMN para la Medición del Volumen de Sangre Cerebral', RMN en BioMedicina, doi: 10.1002/nbm.2988.NUEVO!