Extractor de ácido nucleico

Reactivo de extracción de ARN total de trifol

Número del producto:R1000

Condiciones de almacenamiento:Reactivo de extracción de ARN total de trifolSe puede conservar de manera estable a temperatura ambiente durante 12 meses.Recomendamos conservarlo enEn un ambiente de 2 a 8 ° c.

Consejos importantes:

Este producto contiene fenoles, que son tóxicos y corrosivos. Si se inhala en el cuerpo, se entra en contacto con la piel, se ingiere, etc., puede causar intoxicación, quemaduras y otras lesiones físicas. Al usar este producto, debe usar artículos de protección, como guantes, vendas para los ojos, máscaras faciales, etc. En caso de contacto accidental, se debe lavar inmediatamente con una gran cantidad de agua y acudir al hospital para recibir tratamiento.

Introducción del producto:

Reactivo de extracción de ARN total de trifolEs un reactivo de extracción de ARN total de amplio espectro. La operación experimental es rápida y conveniente, el color es claro y la estratificación es conveniente. Este reactivo tiene una amplia gama de aplicaciones y puede extraer ARN total de tejidos animales, materiales vegetales, diversos microorganismos y células cultivadas. Este método tiene un mejor efecto de aislamiento en pequeñas cantidades de tejido (50 - 100 mg) y células (5 × 106), así como en grandes cantidades de tejido (≥ 1g) y células (> 107). Las muestras se rompen completamente en el reactivo de extracción de ARN total de trifol, lo que garantiza la integridad del ARN en la medida de lo posible. Después de agregar la centrifugación de cloroformo, la solución se dividirá en tres capas: fase de agua incolora superior, capa intermedia y fase orgánica Roja inferior, y el ARN se distribuirá en la capa superior. Después de recoger la capa superior de limpieza, el ARN total se puede recuperar después de la precipitación de alcohol isopropílico. El ARN total extraído es bueno en integridad, libre de contaminación por proteínas y adn, y se puede utilizar en varios experimentos convencionales de biología molecular, como RT-PCR、Real-time RT-PCR、Northern blot、Dot Blot、 Traducción in vitro, etc.

El reactivo de extracción de ARN total de trifol puede promover la precipitación de una variedad de ARN de diferentes especies y géneros con diferentes pesos moleculares. Por ejemplo, la página en gel de agarosa de ARN extraída del hígado de la rata y teñida con bromuro de etidio mostró muchas bandas de alto peso molecular discontinuas entre 7 y 15 kb (componentes de arnm y hnrna), dos ribosomas dominantes a 5 kb (28s) y a 2 kb (18s), y ARN de bajo peso molecular entre 0,1 y 0,3 kb (arnt, 5s). Cuando el ARN extraído se diluye con te, su relación a260 / A280 es ≥ 1,8. Tenga en cuenta que si se trata de gel de agarosa ordinario, la posición de 28S es de aproximadamente 2 kb, y la posición de 18s es de aproximadamente 1 kb, y la posición de gel de diferentes concentraciones cambia mucho.

Precauciones:

1.Para muestrasDespués de homogeneizar el reactivo de extracción de ARN total de trifol, se puede colocar a - 70 ° C durante más de un mes si no se agrega inmediatamente el cloroformo. Precipitación de ARN conservada en un 75% de etanol, 2 - 8 ° C se puede conservar durante una semana y - 20 ° C durante un año. La semivida del ARN es relativamente corta y fácil de degradar, por lo que se recomienda realizar experimentos posteriores lo antes posible después de la extracción, como la transcripción inversa en adnc, Northern blot, etc.

2. si los experimentos aguas abajo son muy sensibles al adn, se recomienda procesar el ARN con rnase Free dnase I.

3.Reactivos propios: cloroformo, alcohol isopropílico..Nueva apertura o extracciónARN dedicado), etanol al 75% (preparado con agua tratada con depc), agua libre de rnase o agua tratada con depc.

4. la compañía produce el reactivo de extracción de ARN total de trizor, reagent, que tiene una excelente calidad y puede reemplazar al reactivo de extracción de ARN total de trizor de invitrogen. La calidad de extracción es la misma que la del experimento aguas abajo *.

Pasos de la operación de extracción de arn: (lea las precauciones antes del experimento)

Consejos:

usarLos reactivos de extracción de ARN total de trifol deben usar guantes y vendajes oculares al extraer arn. Evite el contacto con la piel y la ropa. Complete la operación en el Gabinete de ventilación química. Evite la inhalación respiratoria. Sin instrucciones especiales, todas las operaciones deben realizarse a temperatura ambiente de 15 a 30 ° c.

1. homogeneización

Tejidos vegetales:

Tomar el tejido vegetal fresco y moler completamente en nitrógeno líquido o triturar el tejido vegetal directamente enReactivo de extracción de ARN total de trifolSe muele rápidamente en el Medio y se agrega 1 ml de reactivo de extracción de ARN total de trifol por cada 50 - 100 mg de tejido y se mezcla bien. Nota: el volumen de la muestra generalmente no debe exceder el 10% del volumen del reactivo de extracción de ARN total de trifol.

Tejidos animales:

Tomar fresco oLos tejidos animales congelados a - 70 ° C se cortan en la medida de lo posible, se agregan 1 ml de reactivo de extracción de ARN total trifol por cada 30 - 100 mg de tejido, y el homogeneizador se trata con homogeneizador. O añadir el reactivo de extracción de ARN total de trizol 1 ML para mezclar bien después de moler en nitrógeno líquido. Nota: el volumen de la muestra generalmente no debe exceder el 10% del volumen del reactivo de extracción de ARN total de trifol.

C. células cultivadas de una sola capa:

Trate de eliminar el medio de cultivo residual limpio y vaya directamente al diámetro.En la placa de cultivo de 3,5 cm, se agregó 1 ml de reactivo de extracción de ARN total de trifol para cubrir y soplar repetidamente las células lisas. La cantidad de reactivos de extracción de ARN total de trifol necesarios (más 1 ML cada 10 cm2) se determina en función del área de la placa de cultivo y no del número de células. Cuando la cantidad de reactivos de extracción de ARN total de trifol es insuficiente, puede causar contaminación del ADN en el ARN extraído.

Atención:

Las células de cultivo adheridas a la pared a menudo no pueden desprenderse del frasco de cultivo (placa de petri), lo que no significa que la lisis no *, cuando la membrana celular se ha roto y se ha liberado todoRNA， Solo sigue haciéndolo.

D. suspensión celular:

Recolección centrífuga de células. EnEl reactivo de extracción de ARN total de trifol sopla repetidamente las células lisas con una pipeta. Cada 5 a 10 ×10⁶Células animales, vegetales o de levadura o 1 ml por cada 1 × 107 bacteriasReactivo de extracción de ARN total de trifol. Se debe evitar lavar las células antes de agregar el reactivo de extracción de ARN total de trifol, ya que eso aumenta la posibilidad de degradación del arnm. Romper ciertas levaduras y bacterias puede requerir el uso de un homogeneizador.

Sangre:

usarReactivo de extracción de ARN total de trifolReactivo LS.

2.Colocar la muestra de homogeneización a temperatura ambiente después de un fuerte shock5 minutos para que el cuerpo de proteína nuclear * se disuelva.

3. pasos opcionales:

EnFuerza centrífuga a 12.000 RPM a 4 ° CCentrifugar durante 10 minutos y despejar.

Por ejemplo, las muestras contienen más proteínas, grasas, Polisacáridos o músculos, y los nódulos de tubérculos de las plantas se pueden eliminar por centrifugación. La precipitación después de la centrifugación contiene membrana extracelular, Polisacáridos y alto peso molecular.DNA， El suero superior contiene arn. Al manipular muestras de tejido adiposo, la capa superior es una gran cantidad de grasa que debe eliminarse. Tome el líquido de homogeneización aclarado para el siguiente paso.

4.Cada1 mlReactivo de extracción de ARN total de trifolAgregue 0,2 ml de cloroformo. Cubrir la tapa del tubo, sacudirla violentamente durante 15 segundos y dejarla a temperatura ambiente durante 2 a 3 minutos.

5.EnLa fuerza centrífuga a 4 ° C 12000 RPM congeló la centrifugación a alta velocidad durante 10 - 15 minutos. Después de la centrifugación, la mezcla se divide en tres capas: la capa inferior de cloroformo de fenol orgánico rojo, la capa intermedia y la capa superior de muestra de agua incolora. El ARN existe sin excepción en la capa de muestra de agua. La capacidad de la capa de muestra de agua es aproximadamente del 50 - 60% de la capacidad del reactivo de extracción de ARN total trifol añadido. (las capas orgánicas e intermedias son proteínas y adn, y si necesita ser extraído, Póngase en contacto con nosotros para obtener el método de extracción).

6.Transfiera la capa de muestra de agua a un tubo centrífuga limpio y agregue un volumen igual de alcohol propanol. Mezclar al revés y colocarlo a temperatura ambiente10 minutos.

La precipitación del ARN suele ser invisible antes de la centrifugación, y después de la centrifugación, se forma una precipitación gelatinosa en el lado y el Fondo del tubo.

7.A temperatura ambiente oCentrifugación a 4 ° C 12000 RPM durante 10 minutos, abandonando el líquido superior.

8.unirseLavado y precipitación de etanol al 75%. Cada ml de reactivo de extracción de ARN total de trifol se utiliza para lavar la precipitación con 1 ml de etanol al 75%.

9.A temperatura ambiente oCentrifugar a 4 ° C 12000 RPM durante 3 minutos, descartar el líquido superior y tener cuidado de no perder la precipitación de arn.

Nota: la pequeña cantidad de líquido restante se puede centrifugar brevemente y luego aspirar con la cabeza de la pistola, tenga cuidado de no aspirar y descartar la precipitación.

10.Colocación a temperatura ambiente2 - 3 minutos, secar. Añadir 30 - 100 μl de agua libre de rnase, disolver completamente el arn, y el ARN obtenido se conserva a - 70 ℃ para evitar la degradación.

Nota: la pequeña cantidad de líquido restante se puede centrifugar brevemente y luego aspirar con la cabeza de la pistola, tenga cuidado de no aspirar y descartar la precipitación.