Detección inmunohistoquímica de fluorescencia múltiple

　　Detección inmunohistoquímica de fluorescencia múltipleEl principal principio técnico se deriva de la tecnología de amplificación de señal de Formamida (tsa). TSA es un método de detección enzimática que utiliza la superóxidasa de rábano picante (hrp) para etiquetar in situ de alta densidad proteínas objetivo o ácidos nucleicos. Esta técnica utiliza la reacción de la peroxidasa de la tirosamina tyramide para producir una gran cantidad de productos enzimáticos en el sitio de Unión de antígenos y anticuerpos. Estos productos se unen a los residuos de proteínas circundantes y, a su vez, a los grupos fluorescentes, lo que hace que la señal de detección sea amplificada geométricamente. Esta tecnología es compatible con tintes de alto rendimiento como Alexa flower, tintes fluorescentes tradicionales, etc., para lograr múltiples marcadores fluorescentes.

La tecnología de inmunohistoquímica de fluorescencia múltiple es ampliamente utilizada en muchos campos:

　　Análisis unicelular: capaz de detectar simultáneamente la expresión de múltiples proteínas a nivel de una sola célula.

　　Análisis de chips: detección de múltiples proteínas de alto rendimiento en biochips.

　　Análisis de la morfología y función de la organización: estudiar la distribución espacial y las relaciones entre diferentes proteínas en los tejidos.

　　Análisis del microambiente tumoral: análisis panorámico de la infiltración inmune tumoral, puntos de control inmunológico, relación espacial entre las células tumorales y las células inmunes, etc.

　　Análisis de enfermedades autoinmunes: explorar la patogénesis y el progreso del curso de la enfermedad autoinmune.

　　Evaluación de la respuesta de rechazo: seguimiento y evaluación de la respuesta de rechazo inmunológico.

Los pasos generales de la prueba inmunohistoquímica de fluorescencia múltiple son los siguientes:

　　Muestreo: para obtener muestras de tejido a detectar, generalmente se utiliza el método de Corte.

　　Tratamiento fijo: fijar muestras de tejido con sustancias como formaldehído o etanol para mantener su morfología y estructura.

　　Procesamiento de rebanadas: cortar el tejido fijo en láminas, generalmente de 4 - 5 micras de espesor.

　　Etiquetado de anticuerpos: seleccionar anticuerpos específicos para etiquetar las proteínas objetivo, que generalmente se unen a sustancias como la Luciferina o la enzima.

　　Amplificación de TSA: el uso de la tecnología TSA para amplificar la señal hace que la Luciferina se deposite en grandes cantidades en el sitio de Unión de antígenos y anticuerpos.

　　Tratamiento de teñido: Unión de anticuerpos marcados a células tisulares específicas mediante un método de Tinción fluorescente.

　　Adquisición y análisis de imágenes: tomar imágenes con un microscopio fluorescente o un Microscopio confocal y realizar análisis cuantitativos y cualitativos.

Los métodos de análisis de imágenes inmunohistoquímicos de fluorescencia múltiple incluyen:

　　Análisis cualitativo: al observar la distribución e intensidad de las señales fluorescentes, se juzga la expresión y localización de las proteínas objetivo en los tejidos.

　　Análisis cuantitativo: cuantificar las señales fluorescentes con software de procesamiento de imágenes y comparar las diferencias en la expresión de proteínas en diferentes muestras o condiciones.

　　Análisis de posicionamiento común: analizar la relación espacial entre diferentes señales fluorescentes y explorar la interacción y la co - localización entre proteínas.

A través de estos métodos de análisis,Detección inmunohistoquímica de fluorescencia múltipleLa tecnología puede proporcionar una rica información biológica y ayudar a comprender en profundidad los procesos fisiológicos y patológicos de las células.