Servicio de preparación de anticuerpos monoclonales

Los anticuerpos monoclonales (mab) son anticuerpos producidos por el clúster determinante de antígenos de la aguja - específica. la tecnología monoclonal, también conocida como tecnología de hibridoma, se originó en 1975 y fue fundada por G. Kohler y millstein. El principio principal es utilizar células B que producen anticuerpos para cruzarse con células tumorales para fusionarse en células hybridoma para producir anticuerpos.

Los principales pasos para la preparación de anticuerpos monoclonales por la tecnología de hibridoma son los siguientes:

(1) preparación de antígenos,

(2) animales inmunizados,

(3) preparación de células inmunes de bazo y células de mieloma,

(4) fusión celular;

(5) cultivo selectivo de células de hibridoma,

(6) selección de células de hibridoma;

(7) clonación de células de hibridoma;

(8) verificación de anticuerpos monoclonales;

(9) establecimiento de líneas celulares de hibridoma que secretan anticuerpos monoclonales:

(10) preparación masiva de anticuerpos monoclonales.

Proceso de preparación de anticuerpos monoclonales:

1. los animales inmunizados son el proceso de inmunizar a los ratones con antígenos objetivo para que los ratones produzcan linfocitos b alérgicos. Por lo general, se seleccionan ratones balb / C femeninos de 6 a 8 semanas de edad para la inmunización de acuerdo con el programa de inmunización preestablecido. Los antígenos entran en los órganos inmunes periféricos a través de la circulación sanguínea o linfática, estimulan la clonación de los linfocitos b correspondientes, los activan, proliferan y se diferencian en linfocitos b alérgicos.

2. la fusión celular utilizó el método de extracción y liberación de sangre del globo ocular para matar a los ratones, la operación aséptica para extraer el bazo, exprimir y moler en una placa de Petri plana para preparar la suspensión de células esplénicas. Las células preparadas de mieloma de la misma línea se mezclan con las células del bazo del ratón en un cierto porcentaje y se agrega el agente promotor de la fusión peg. Con peg, varios linfocitos pueden fusionarse con células de mieloma para formar células de hibridoma.

3. el objetivo del cultivo selectivo es seleccionar células de hibridoma fusionadas, generalmente utilizando medios selectivos hat. En el medio hat, las células de mieloma no fusionadas mueren por la falta de Hipoxantina guanina fosfribotransferasa y no pueden utilizar vías correctivas para sintetizar adn. Aunque los linfocitos no fusionados tienen Hipoxantina guanina fosforribotransferasa, no pueden sobrevivir a largo plazo in vitro y mueren gradualmente. Solo las células de hibridoma fusionadas pueden sobrevivir y proliferar en el medio hat gracias a la obtención de la Hipoxantina guanina fosfotransferasa de las células del bazo y tienen las características de que las células de mieloma pueden proliferar infinitamente.

4. la detección y clonación de clones positivos de hibridoma en células de hibridoma que crecen en medios hat, solo unos pocos son células que secretan anticuerpos monoclonales específicos predeterminados, por lo que deben ser seleccionados y clonados. Por lo general, el método de dilución limitada se utiliza para el cultivo clonal de células de hibridoma. Se utilizaron métodos inmunológicos sensibles, rápidos y específicos para seleccionar células hybridoma positivas que pudieran producir los anticuerpos monoclonales necesarios y realizar la amplificación clonal.

Después de una identificación completa del tipo de inmunoglobulina, subclase, especificidad, afinidad, epítopos que identifican el antígeno y sus moléculas secretadas por el anticuerpo monoclonal, se congela a tiempo.

5,Preparación en masa de anticuerpos monoclonales la preparación en masa de anticuerpos monoclonales es importante utilizando el método de inducción in vivo animal y el cuerpo.

Método de cultivo externo.

(1) el método de inducción in vivo tomó ratones balb / c, primero inyectados en la cavidad abdominal 0. 5 ml de cera de piedra líquida o fitano para el pretratamiento. Después de 1 - 2 semanas, se inocularon células de hibridoma en la cavidad abdominal. Las células híbridas proliferan en la cavidad abdominal del ratón y producen y secretan anticuerpos monoclonales. Alrededor de 1 - 2 semanas, se puede ver que el abdomen del ratón se hincha. Se puede obtener una gran cantidad de anticuerpos monoclonales extrayendo ascite con una jeringa.

(2) el método de cultivo in vitro coloca las células de hibridoma en un frasco de cultivo para el cultivo. Durante el cultivo, las células hybridoma producen y secretan anticuerpos monoclonales, recogen el sobrenadante del cultivo y eliminan las células y sus fragmentos por centrifugación para obtener los anticuerpos monoclonales necesarios. Pero este método produce una cantidad limitada de anticuerpos. En los últimos años, han surgido diversas nuevas tecnologías y dispositivos de cultivo, lo que ha aumentado considerablemente la producción de anticuerpos. Después de la fusión de las células hybridoma, deben ser seleccionadas antes de que puedan usarse. Las células de hibridoma se dividen en dos veces: primero, se seleccionan las células de hibridoma; 2. las células de hibridoma que pueden producir anticuerpos específicos se seleccionan en las células de hibridoma seleccionadas preliminarmente, y los métodos y principios de estas dos selecciones son diferentes.

Algunos agentes experimentales hacen servicios