Kit de detección de potencial de membrana mitocondrial JC - 1

Introducción del producto

JC-1Kit de detección de potencial de membrana mitocondrial()Kit de ensayo del potencial de la membrana mitocondrial JC-1) es una especie deJC-1Es una sonda fluorescente, un kit rápido y sensible para detectar cambios en el potencial de la membrana mitocondrial celular, tisular o purificada. Debido a la disminución del potencial de la membrana mitocondrial, es un evento emblemático en las primeras etapas de la apoptosis celular. Por lo tanto, este kit se puede utilizar para la detección temprana de la apoptosis celular.

JC-1Es un método ampliamente utilizado para detectar potenciales de membrana mitocondrial.△PsmSonda fluorescente ideal en posición.JC-1Los tintes se acumulan en las mitocondrias de forma dependiente del potencial eléctrico y pueden utilizarse para detectar potenciales de membrana mitocondrial celulares, tisulares o purificados. Dentro de las mitocondrias normales,JC-1Se agrega a la matriz mitocondrial para formar un polímero que emite una fuerte fluorescencia roja..Ex = 585 nm, Em = 590 nm); Mitocondrias poco saludables debido a la disminución o pérdida del potencial de membrana,JC-1Solo puede existir en forma de monómeros en el plasma y producir fluorescencia verde..Ex = 514 nm, Em = 529 nm).JC-1No solo se puede utilizar para la detección cualitativa, sino que debido a los cambios de color, los cambios en el potencial de la membrana mitocondrial pueden reflejar muy directamente los cambios. También se puede utilizar para la detección cuantitativa, ya que el grado de despolarización de las mitocondrias puede pasar por el rojo/.La intensidad de la fluorescencia verde se mide en proporción.

Composición del producto

guardarY transporte:-20Conservar en seco protegido de la luz, al menos1Válido por año. Transporte:Bolsa de hielotransporte

Modo de empleo Kit de detección de potencial de membrana mitocondrial JC - 1

1. JC-1Preparación de la solución de trabajo de teñido

Para las placas de seis agujeros, este kit se puede detectar100Una muestra. Necesario por agujeroJC-1La cantidad de líquido de trabajo de teñido es1 ml, de otros utensilios de cultivo JC-1La cantidad de líquido de trabajo de teñido y así sucesivamente; Para cada suspensión celular 50-.100Diez mil células necesitan 0,5 ml JC-1Líquido de trabajo de teñido. Tomar la cantidad adecuada JC-1（200 ×), de acuerdo con cada50 μL JC-1（200 ×) adhesión 8 mlDilución proporcional del agua ultrapura JC-1. Los choques violentos se disuelven completamente y se mezclan bien JC-1. y luego unirse JC-1 de 2 mlAmortiguador de teñido..5 ×) después de mezclar bien JC-1Líquido de trabajo de teñido.

[nota]:Primero hay que poner JC-1（200 ×(se puede agregar después de disolver y mezclar completamente con agua ultrapura (proporcionada por el kit) JC-1Amortiguador de teñido..5 ×). No se puede preparar primero JC-1Amortiguador de teñido..1 ×) volver a unirse JC-1（200 ×) de esta manera JC-1Será difícil disolverse completamente y afectará seriamente las pruebas posteriores.

2. Configuración del control positivo

CCCP()10 mM) recomendado por 1:1000 La proporción se añade al medio de cultivo celular y se diluye hasta 10 μM, procesando células 20 minutos. Posteriormente cargar de la siguiente manera JC-1, se realiza la detección del potencial de membrana mitocondrial. Para la mayoría de las células, generalmente CCCP de 10 μMprocesar 20 minutosPotencial de membrana de las mitocondrias posterioresWanquanPérdida,JC-1Después de teñir, la observación debe ser fluorescente verde; Y el meridiano celular normal JC-1Después de teñir, se debe mostrar fluorescencia roja. Para células específicas,CCCPLa concentración de acción y el tiempo de acción pueden

Es diferente y debe decidirse por sí mismo con referencia a la literatura y los materiales pertinentes.

3. Para las células suspendidas

1）取10-.60 Diez mil células, pesadas en suspensión 0,5 mlEn el medio de cultivo celular, el medio de cultivo celular puede contener suero y rojo fenol.

2) adhesión0,5 ml JC-1El líquido de trabajo de teñido se invierte varias veces y se mezcla bien. En la Caja de cultivo celular 37Incubación a ° C20 minutos.

3Durante la incubación, de acuerdo con cada 1 ml JC-1Amortiguador de teñido..5 ×) adhesión 4 mlProporción de agua destilada, preparar la cantidad adecuada JC-1Amortiguador de teñido..1 ×) y colocado en un baño de Hielo.

4(...)37Después de la incubación a ° c,600×g4℃ centrífuga3-.4 minutosPrecipitar células. Abandona la parte superior del líquido claro y ten cuidado de no aspirar las células tanto como sea posible.

5) con JC-1Amortiguador de teñido..1 ×) lavado 2 Segunda: adhesión 1 ml JC-1Amortiguador de teñido..1 ×) células en suspensión pesada,600×g4℃ centrífuga3-.4 minutosPrecipitar las células y abandonar el suero superior. Volver a unirse 1 ml JC-1Amortiguador de teñido..1 ×) células en suspensión pesada,600×g4℃ centrífuga3-.4 minutosPrecipitar las células y abandonar el suero superior.

6) y luego usar la cantidad adecuada JC-1Amortiguador de teñido..1 ×Después de la suspensión pesada, se observa con un microscopio fluorescente o un Microscopio confocal láser, y también se puede usar un espectrómetro de fluorescencia. Detección por fotómetro o análisis por citometro de flujo.

4. Para las células adherentes

[atención]: para las células adherentes, si se desea detectar con un fotómetro fluorescente o un citometro de flujo, se pueden recoger las células primero y luego colgarlas de nuevo con referencia al método de suspensión de las células.

1) para un agujero de la placa de seis agujeros, se absorbe el medio de cultivo y se puede utilizar si es necesario de acuerdo con el experimento específico. PBSU otra solución adecuada para lavar las células una vez y añadir 1 mlMedio de cultivo celular. El medio de cultivo celular puede contener suero y rojo fenol.

2) adhesión 1 ml JC-1El líquido de trabajo de teñido se mezcla bien. En la Caja de cultivo celular 37Incubación a ° C20 minutos.

3Durante la incubación, de acuerdo con cada 1 ml JC-1Amortiguador de teñido..5 ×) adhesión 4 mlProporción de agua destilada, preparar la cantidad adecuada JC-1Amortiguador de teñido..1 ×) y colocado en un baño de Hielo.

4(...)37Después de la incubación, retire la parte superior de la solución y useJC-1Amortiguador de teñido..1 ×) lavado 2 Veces.

5) adhesión 2 mlMedio de cultivo celular, que puede contener suero y rojo fenol.

6) Observación bajo un microscopio fluorescente o un Microscopio confocal láser.

5. Para las mitocondrias purificadas

1) se preparará JC-1Se reutiliza el líquido de trabajo de teñido JC-1Amortiguador de teñido..1 ×) Dilución 5 Veces.

2(...)0.9mL 5Doblemente diluido JC-1Añadir en el líquido de trabajo de teñido 0,1 mlLa cantidad total de proteínas es 10-.100 microgramosMitocondrias purificadas.

3) prueba con un fotómetro de fluorescencia o un medidor de fluorescencia: después de mezclar bien, se utiliza directamente un fotómetro de fluorescencia para el escaneo de tiempo..hora escaneo), la longitud de onda de excitación es485 nm, la longitud de onda de emisión es 590 nm. Si se utiliza un medidor de fluorescencia, la longitud de onda de excitación no se puede establecer en 485 nmEn el momento, se puede475-.520 nmSe establece la longitud de onda de excitación en el rango. Además, también se pueden consultar los siguientes pasos 6 La configuración de la longitud de onda en es para la detección de fluorescencia.

4) Observar con un microscopio fluorescente o un Microscopio confocal láser: el método es el mismo que los siguientes pasos 6.

6. Observación de fluorescencia y análisis de resultados

detección JC-1La luminiscencia se puede configurar a 490 nm, la luz emitida se establece en 530 nm; detección JC-1Cuando se trata de polímeros, se puede establecer la luminiscencia a 525 nm, la luz emitida se establece en 590 nm.

[nota1);: al determinar la fluorescencia aquí, no es necesario establecer la luminiscencia y la luz emitida en la longitud máxima de onda de excitación y la longitud máxima de onda de emisión. Si se utiliza un microscopio fluorescente para observar, detectar JC-1Los polímeros se pueden utilizar a menudo para detectar yoduro de propidina o Cy3Filtro de paso de banda estándar utilizado. detección JC-1Los monómeros se pueden usar para detectar con frecuencia. FITCO GFPFiltro de paso de banda estándar. La aparición de fluorescencia Verde indica una disminución del potencial de la membrana mitocondrial y es probable que la célula esté en las primeras etapas de la apoptosis. La aparición de fluorescencia roja indica que el potencial de la membrana mitocondrial es relativamente normal y el Estado de la célula es relativamente normal.

Precauciones

1(...)JC-1（200 ×) en4A temperaturas más bajas, como ° C y baño de hielo, se solidificará y se pegará en el fondo, la pared o la tapa del tubo centrífuga, lo que puede20-.25℃ baño de agua para calentar y criar por un momento hasta que se disuelva por completo.

2) cargado JC-1Después de usar JC-1Amortiguador de teñido..1 ×) al lavarse, hacer JC-1Amortiguador de teñido..1 ×) mantener 4Alrededor de ℃, el efecto de lavado es mejor en este momento.

3(...)JC-1Después de cargar y lavar la sonda, trate de estar en 30 minutosLas pruebas de seguimiento se completan internamente. Se necesita un baño de hielo para conservarlo antes de la prueba.

4) no pongaJC-1Amortiguador de teñido..5 ×(todos preparados enJC-1Amortiguador de teñido..1 ×(...)，Este Kit debe usarse directamente durante su uso.JC-1Amortiguador de teñido..5 ×).

5) Si se descubre JC-1Amortiguador de teñido..5 ×(hay precipitación en él, que debe disolverse por completo antes de que pueda usarse, se puede usar en 37El calentamiento a ° C promueve la disolución.

6(...)CCCPEs un inhibidor de la cadena de transmisión electrónica mitocondrial, tóxico, preste atención a la protección.

7) para su seguridad y salud, Use ropa experimental y guantes desechables.

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Referencias en la parte JC - 1jc - 1Kit de detección de potencial de membrana mitocondrial JC - 1

(1) [IF=9.7]Contribución de la ferroptosis y las funciones duales de GPX4 a la progresión de la osteoartritisEBioMedicina Publicado:27 de enero de 2022 DOI: https://doi.org/10.1016/j.ebiom.2022.103847

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(2) [IF=11.4]La VDR regula la función mitocondrial como mecanismo protector contra la lesión de células tubulares renales en ratas diabéticas. -Biología Redox -Volumen 70, abril de 2024, 103062.V

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(3)[IF=11.1]LONP1 se dirige a HMGCS2 para proteger la función mitocondrial y atenuar la enfermedad renal crónica.EMBO Mol Med(2023)15: e16581https://doi.org/10.15252/emmm.202216581

Análisis de co - localización por inmunofluorescencia de lonp1, hmgcs2 y mitocondrias en el PTC (arriba, escala: 20um) y el tejido renal humano (abajo, escala: 200um).

Los datos originales de esta imagen provienen de la literatura (3).