Fluo - 8 am, sonda fluorescente de iones de calcio Cell permeant

Fluo - 8 am, sonda fluorescente de iones de calcio Cell permeant

Introducción del producto

Fluo-8（Fluo-2 Medium Affinity）， Es actualmente la sonda fluorescente ca2 +, la longitud de onda de excitación de luz visible más brillante, y su intensidad de fluorescencia es el doble que la de fluo - 4 y cuatro veces la de fluo - 3. Fluo - 8 con afinidad moderada por ca2 +, casi cercana Fluo-3，Fluo-4（Fluo-3: Kd=0.4μM、Fluo-4: Kd=0.36μM、Fluo-4: Kd= 0.389μM）， Casi lo mismo que fluo - 3 y fluo - 4 en uso. Fluo - 8 no solo mantiene las características de detección espectral convenientes de fluo - 3, fluo - 4, con una longitud máxima de onda de excitación de 490 nm y una longitud máxima de onda de emisión de 514 nm después de unirse a ca2 +. también tiene una capacidad mejorada de carga celular y respuesta de ca2 +. La carga fluo - 8 tiene una dependencia débil de la temperatura y se tiñe bien a temperatura ambiente o a 37 ° c. A diferencia de fluo - 3, fluo - 4 requiere estrictamente la incubación a 37 ° c, lo que lo hace más adecuado para experimentos de cribado de alto rendimiento hts. Fluo - 8 es ampliamente utilizado, compatible con muchas líneas celulares y muestras dirigidas, y no es perturbado por la señal del ligando o el propio objetivo.

Fluo - 8 puede detectar cambios en los niveles de iones de calcio en las células a través de microscopía confocal láser, citometro de flujo, medidor de fluorescencia, microscopía de fluorescencia, etc. Fluo - 8, am es un derivado del metilacetato del fluo - 8, que tiene permeabilidad a la membrana celular y puede entrar fácilmente en la célula con solo un simple cultivo. Una vez dentro de la célula, es cortada por su Lactasa para producir un fluo - 8 no permeable a la membrana, permaneciendo así en la célula para desempeñar las funciones fisiológicas correspondientes.

Este producto se utiliza en forma de polvo liofilizado en envases pequeños de 50 ug, y la concentración recomendada es de 1 - 5 um cuando se utiliza para la detección de niveles de ca2 + en las células.

Fluo - 8 am, sonda fluorescente de iones de calcio Cell permeant

Características básicas

SinónimoFluo-8, AM

Fórmula molecular:: C50H50N2O23

Peso molecular: 1046.9316

Disolución: soluble en Dmso (1 - 5 mm)

Ex/Em: 490 / 514 nm (combinación ca2 +);

Condiciones de almacenamiento: secar y conservar a - 20 ° c, con una vida útil de 1 año.

Fluo - 8 am, sonda fluorescente de iones de calcio Cell permeant

Modo de empleo

Preparación del reactivo a

1) preparación del líquido madre plurónico F - 127: pesar 100 mg del polvo plurónico F - 127 (número de artículo: CAT no. fs0432) y añadir 500 ul Dmso para preparar el líquido madre del 20% (w / v). El proceso de disolución debe calentarse a 40 - 50 ° C durante 20 - 30 minutos. la solución se conserva a temperatura ambiente sin refrigeración. Si hay precipitación cristalina, se puede volver a calentar y disolver sin afectar el uso.

2）HHBS BUFFER(1X Hank’s Balanced Salt Solution with 20mM HEPES buffer,pH7.3) U otros amortiguadores fisiológicos

Pasos de operación B

1) disolver fluo - 8 con Dmso anhidro, preparar am en un líquido de almacenamiento de 1 - 5 mm, o tomar el fluo - 8 preparado, el líquido de almacenamiento am se toma a temperatura ambiente para volver a calentar. (por ejemplo: si se prepara como líquido madre de 4mm, es necesario agregar 11,9ul Dmso anhidro a 50ugfluo - 8 y am).

2) diluir el líquido de trabajo de 1 - 10 um con hbbs u otros amortiguadores fisiológicos fluo - 8, el líquido de almacenamiento am + dmso, y añadir con antelación una cantidad adecuada de solución de pluronic F - 127 al 20%, con una concentración final del 0,02%.

[nota (1): fluo - 8, la concentración de carga recomendada para aplicaciones am en la mayoría de las células es de 4 - 5 um, y la concentración de uso específica debe optimizarse de acuerdo con los requisitos experimentales. Para evitar la Citotoxicidad causada por la carga excesiva, se recomienda utilizar la concentración baja de la sonda Zui en la medida de lo posible sobre la base de los resultados obtenidos.

[nota (2): fluo - 8, el líquido de trabajo am debe usarse ahora para evitar la congelación repetida.

[nota (3): el pluronic F - 127 puede prevenir el fluo - 8, y la fusión de Am en la solución promueve que la sonda entre mejor en la célula. Sin embargo, el pluronic F - 127 puede reducir la estabilidad del fluo - 8, am, por lo que solo se recomienda agregar al preparar el líquido de trabajo y no se recomienda agregar el líquido de almacenamiento para su conservación a largo plazo.

3) [opcional] si la célula contiene un transportador de anión orgánico, el sulfosulfonato (probenecid, 1 - 2,5 mm) o, la sulfametasona (sulfinpirazona, 0,1 - 0,25 mm) puede necesitar unirse a un medio de cultivo celular para reducir la filtración de la sonda de desesperificación.

[nota (1): el líquido de almacenamiento de sulfosulfonato o sulfametasona es bastante alcalino, por lo que es necesario reajustar el pH después de agregar el medio de cultivo.

4) añadir el fluo - 8 preparado, el líquido de trabajo am a la célula, y la cantidad de adición se basa en cubrir la célula. Incubar a 37 ° c o a temperatura ambiente durante 20 - 60 minutos.

[nota (1): en cuanto al tiempo de incubación, si no se puede determinar el primer experimento de ic, se recomienda incubar durante 30 minutos para ver el efecto de fluorescencia; Si la célula muere más, acortar adecuadamente el tiempo; Si la intensidad de la fluorescencia es demasiado débil, extienda el tiempo adecuadamente.

[nota (2): reducir la temperatura de carga de la sonda puede reducir el fenómeno de la Cámara Regional de la sonda.

5) aspirar el líquido de trabajo de teñido y reemplazarlo por hbbs u otros amortiguadores fisiológicos (si es necesario, con un inhibidor del transportista como el ácido 2,5 mmm de ácido sulfónico propiónico) para eliminar el exceso de sonda.

6) la detección se realiza con instrumentos adecuados, como confocalización láser, citometro de flujo, medidor de fluorescencia, etc., con una longitud de onda EX / EM = 490 / 520 nm.

[nota (1): fluo - 8, después de que am entra en el célula, se degrada por esterasa para formar fluo - 8, que no se queda en el Citosol en forma de Unión de oferta y precio. Por lo tanto, las células vivas cargadas con tintes no se pueden fijar y luego entrar en la detección del nivel de ca2 +.

Precauciones

1) los tintes fluorescentes se están apagando uniformemente, por favor, preste atención a evitar la luz en la medida de lo posible para ralentizar el endurecimiento fluorescente.

2) el metilacetaldehído (am) es fácil de absorber la humedad, y después de sacarlo del refrigerador, Póngalo en un ambiente seco a temperatura ambiente y kaifeng. Debido a la trazabilidad del reactivo, centrifugarlo brevemente antes de abrirlo para garantizar que el polvo caiga en el Fondo del tubo.

3) fluo - 8, am se solidifica y se adhiere al Fondo del tubo centrífuga, o a la pared o tapa del tubo a temperaturas más bajas como 4 ° C y baño de hielo, y se puede usar después de un momento de incubación a 20 - 25 ° C hasta que se disuelva por completo.

4) fluo - 8, el primer uso de am, se recomienda que el líquido de almacenamiento se distribuya ahora, se empaque en una sola dosis y se seque y congele estrictamente a ≤ - 20 ℃ para evitar la humedad. Para garantizar buenos resultados experimentales, trate de usarlos en poco tiempo.

5) para su seguridad y salud, Use ropa experimental y guantes desechables.