Factor de crecimiento epidérmico humano (egf) kit de Elisa

Factor de crecimiento epidérmico humano (egf) kit de Elisa

Principios experimentales
Este Kit utiliza el método de sándwich de doble anticuerpo para determinar los niveles del factor de crecimiento epidérmico humano (egf) en las muestras. Los anticuerpos del factor de crecimiento epidérmico humano (egf) purificados se envuelven en microporos para hacer anticuerpos sólidos, se añade el factor de crecimiento epidérmico (egf) a los microporos del Anticuerpo monoclonal encapsulado a su vez, y luego se une a los anticuerpos del factor de crecimiento epidérmico (egf) marcados por HRP para formar un complejo de anticuerpos - antígenos - anticuerpos estándar enzimáticos, que se lava con fondo che y se añade un sustrato tmb para colorear. El tmb se convierte en azul catalizado por la enzima HRP y en amarillo final bajo la acción del ácido. La oscuridad del color está positivamente relacionada con el factor de crecimiento epidérmico (egf) en la muestra. La Absorbancia (valor de od) se determina a una longitud de onda de 450 nm con un medidor estándar enzimático y la concentración del factor de crecimiento epidérmico humano (egf) en la muestra se calcula a través de la curva estándar.

Requisitos para especímenes
1. tratamiento de especímenes: (1) después de la recolección de muestras de agua, se congelan y descongelan repetidamente tres veces a - 20 ℃, y luego se filtran por fibra de vidrio para referencia.
(2) butanol para muestras de tejido: metanol: extracción de agua (5: 25: 70 v: v: v) o fase
La extracción de documentos relevantes se lleva a cabo, y el experimento debe llevarse a cabo lo antes posible después de la extracción. Si no se puede realizar la prueba de inmediato,
Los especímenes se pueden conservar a - 20 ° C para referencia.
2. no se pueden detectar muestras que contengan nan3, ya que nan3 inhibe la actividad de la peroxidasa de rábano picante (hrp).

Factor de crecimiento epidérmico humano (egf) kit de ElisaPasos de operación
1. añadir muestras: establecer agujeros estándar, agujeros en blanco (agujeros de control en blanco sin muestras y reactivos estándar enzimáticos, el resto de los pasos son los mismos),
Agujeros de muestra a medir. Añadir 50 microlitros al agujero estándar en la placa de cubierta del paquete de enzima, y añadir 40 μl de diluyente de muestra al agujero de la muestra a medir.
Luego se añade la muestra a medir 10 μl (la dilución final de la muestra es 5 veces). Añadir la muestra y añadir la muestra en la parte inferior del agujero de la placa estándar de la enzima.
Medir sin tocar la pared del agujero, sacudir suavemente y mezclar bien.
2. adición de enzima: añadir 50 μl de reactivo estándar de enzima a cada agujero, excepto el agujero en blanco.
3. educación caliente: sellar la placa con película de sellado y colocarla a 37 ° C durante 60 minutos.
4. dispensación: diluir 30 veces el detergente concentrado con agua destilada 30 veces y reservarlo
5. lavado: quitar cuidadosamente la película de sellado, descartar el líquido, secar, llenar cada agujero con detergente, Dejar reposar durante 30 segundos y descartarlo, de esta manera
Repite 5 veces y dispara seco.
6. color: primero agregue el agente de color A50 μl por agujero, luego agregue el agente de color b50 μl, agite suavemente y mezcle bien, evite la luz y el color a 37 ℃.
15 minutos.
2
7. terminación: 50 μl de líquido de terminación por agujero para terminar la reacción (en este momento, el azul se convierte en amarillo).
8. determinación: ajustar a cero el agujero en blanco y medir la Absorbancia (valor de od) de cada agujero en orden con una longitud de onda de 450 nm. La determinación debe terminar en Canadá
Se realiza dentro de los 15 minutos posteriores al líquido.

cálculo
Tomando la concentración del estándar como coordenada horizontal y el valor de od como coordenada vertical, se dibuja la curva estándar en el papel de coordenada, de acuerdo con la
El valor de od se detecta por la curva estándar para la concentración correspondiente; Multiplicar por el múltiplo de dilución; O calcular el estándar con la concentración y el valor de od del estándar
La ecuación de regresión lineal de la cuasi - curva, que sustituye el valor de do de la muestra por la ecuación, calcula la concentración de la muestra y luego la multiplica por el múltiplo de dilución,
Es decir, la concentración real de la muestra.

Precauciones
1. el kit debe extraerse del ambiente refrigerado y debe equilibrarse a temperatura ambiente durante 15 - 30 minutos antes de que pueda usarse. si el kit de enzima no está abierto después de la apertura de la placa.
Después de usarlo, las tiras deben conservarse en bolsas selladas.
2. el detergente concentrado puede tener precipitación cristalina, que se puede calentar y ayudar a la disolución en un baño de agua cuando se diluye, sin afectar el resultado cuando se lava.
3. el muestreador debe utilizarse en cada paso de la muestra y su precisión debe corregirse con frecuencia para evitar errores de prueba. Es mejor agregar muestras a la vez.
Controlado en 5 minutos, si el número de especímenes es grande, se recomienda usar pistolas de drenaje para agregar muestras.
4. por favor, haga la curva estándar al mismo tiempo que cada determinación, lo mejor es hacer agujeros compuestos. Si el contenido de la sustancia a medir en la muestra es demasiado alto (valor de od de la muestra)
Si es mayor que el valor de od del primer agujero del agujero estándar, diluya un cierto múltiplo (n veces) con una dilución de muestra antes de medirlo.
Al calcular, por favor, multiplique finalmente por el múltiplo de dilución total (× n × 5).
5. la película de sellado se limita al uso único para evitar la contaminación cruzada.
6. el sustrato debe conservarse protegido de la luz.
7. siga estrictamente el funcionamiento de las instrucciones, y los resultados de la prueba deben basarse en la lectura del medidor de enzima. 8. todas las muestras, detergentes y diversos residuos deben tratarse como contagios.
9. los diferentes componentes del número de lote de este reactivo no se pueden mezclar.

Especificaciones:
96 copias / Caja

Condiciones de conservación y período de validez
1. conservación del kit:; 2 - 8 ° c.
2. validez: 6 meses