El analizador DSF de alto rendimiento y el analizador DSF de alto rendimiento (fluorescencia de escaneo diferencial) son instrumentos avanzados ampliamente utilizados en la investigación biomédica, análisis de estabilidad de proteínas y otros campos. Puede monitorear los cambios en la conformación de la proteína durante el calentamiento a través de tintes fluorescentes o señales fluorescentes endógenas de la proteína, y calcular su temperatura de fusión Tm (temperatura cuando la proteína plegable es igual a la proteína desdoblada).
El analizador DSF de alto rendimiento y el analizador DSF de alto rendimiento (fluorescencia de escaneo diferencial) son instrumentos avanzados ampliamente utilizados en la investigación biomédica, análisis de estabilidad de proteínas y otros campos. A continuación se detallan:
I. principios básicos
El DSF es un método para evaluar la estabilidad térmica de las proteínas calentando lentamente las muestras en un PCR cuantitativo fluorescente, detectando durante el calentamiento la cantidad en la que los tintes fluorescentes se combinan con proteínas cuya estructura ha cambiado. Puede monitorear los cambios en la conformación de la proteína durante el calentamiento a través de tintes fluorescentes o señales fluorescentes endógenas de la proteína, y calcular su temperatura de fusión Tm (temperatura cuando la proteína plegable es igual a la proteína desdoblada).
II. principales características
Alto rendimiento: el analizador DSF de alto rendimiento puede obtener la mayor cantidad de información posible en muy poco tiempo. Por ejemplo, el analizador del modelo supr - DSF puede completar el análisis de estabilidad y el cribado de 384 muestras en 60 a 80 minutos.
Bajo costo: utilizando la placa de agujero estándar 384, no se necesitan consumibles especiales ni capilares, el costo de una vez es de solo unos 100 yuanes.
Amplio rango de escaneo de temperatura: tiene un amplio rango de escaneo de temperatura de 10 ° C a 105 ° c, que puede cubrir el dominio de varias proteínas.
Alta sensibilidad: el detector CMOS de alta sensibilidad puede detectar con precisión los cambios de fluorescencia.
La dosis de la muestra es pequeña: la dosis de la muestra es de solo 1020 μl, con un rango de concentración de 0,05 mg / ML 250mg / ml, que es adecuado para el análisis de estabilidad en varias etapas.
III. composición del instrumento
El analizador DSF de alto rendimiento se compone principalmente de las siguientes partes:
Lector de placas: se utiliza para cargar 384 placas de agujero y leer la información de la muestra.
Fuente de luz de excitación: generalmente se utiliza una longitud de onda de excitación led, como 280 nm, y la Potencia de salida es de 10 mw.
Sistema de detección: incluye un espectrómetro y un sistema de detección para detectar señales fluorescentes. El rango de longitud de onda del espectrómetro suele ser de 310 a 420 nm.
Software de procesamiento de datos: se utiliza para dibujar la curva de variación de la intensidad de fluorescencia con la temperatura, y calcular el valor Tm y los parámetros relacionados de las muestras de proteína ajustando la ecuación de boltzmann.
IV. procesos operativos
El proceso de operación del analizador DSF de alto rendimiento suele incluir los siguientes pasos:
Preparación de la muestra: después de mezclar la muestra de proteína con el tinte fluorescente, se añade a la placa de 384 agujeros.
Establecer parámetros: establecer la velocidad de calentamiento del instrumento, el rango de temperatura y otros parámetros.
Inicio de la detección: coloque la placa de agujero 384 en el instrumento y comience a detectar la señal fluorescente.
Análisis de datos: el software de procesamiento de datos se utiliza para procesar y analizar los datos de detección, y se obtienen los valores de Tm y los parámetros relacionados de las muestras de proteínas.
V. Áreas de aplicación
Los analizadores DSF de alto rendimiento tienen una amplia gama de aplicaciones en muchos campos, incluyendo, pero no limitado a:
Análisis de estabilidad de proteínas: evaluación de la estabilidad de proteínas en diferentes condiciones, como temperatura, ph, intensidad iónica, etc.
Detección de medicamentos: a través de la tecnología de detección de alto rendimiento, se seleccionan rápidamente medicamentos candidatos que se unen a la proteína objetivo.
Investigación de la estructura proteica: estudiar los cambios estructurales y conformacionales de las proteínas y proporcionar un fuerte apoyo para la investigación de la cristalización de proteínas.
Estudio sobre el mecanismo de inhibición de los compuestos de moléculas pequeñas: para el cribado de inhibidores de compuestos de moléculas pequeñas y el estudio de sus mecanismos farmacológicos.
VI. mantenimiento y mantenimiento de instrumentos
Para garantizar el funcionamiento normal y prolongar la vida útil del analizador DSF de alto rendimiento, es necesario realizar un mantenimiento y mantenimiento regulares. Esto incluye limpiar la superficie del instrumento, comprobar el Estado de trabajo de la fuente de luz y el sistema de detección, calibrar el instrumento, etc. Además, es necesario prestar atención a las condiciones de procesamiento y almacenamiento de las muestras para evitar el impacto de la contaminación y el deterioro de las muestras en los resultados experimentales.
En resumen, el analizador DSF de alto rendimiento es un instrumento potente y fácil de operar, que tiene amplias perspectivas de aplicación en campos como la investigación biomédica y el análisis de estabilidad de proteínas.