Hepa1-6； Células de cáncer de hígado de ratón

I, Hepa1-6； Células de cáncer de hígado de ratónCondiciones de cultivo

En segundo lugar,Hepa1-6； Células de cáncer de hígado de ratónTratamiento posterior a la recepción

Métodos de tratamiento celular de reanimación:Llenar el medio de cultivo y sellar la boca del frasco después de cultivarlo en buenas condiciones es la mejor manera de transportar células. Para recibir célulasEl 75% de alcohol roció todoCélulasbotella，Estrictamente estérildespuésColoque el vial celular en una incubadora y deje reposar2 - 4 horas para estabilizar el Estado celular.Después de quedarse quietoEl microscopio observa el crecimiento celular y toma fotos de las células en diferentes múltiplos para conservarlas..mejor40x, 100x, 200X cada uno)，Fotos de los tres primeros díassíBase importante después de la venta, no se proporcionan fotos recibidas en buen estado por defecto.

Métodos de tratamiento de células congeladas:Después de recibir la célula, observe si hay hielo seco restante en la Caja de espuma, si el criodepósito está intacto y si hay deshielo. si encuentra que el hielo seco se evapora o el criodepósito está deshielo roto, tome una foto a tiempo y Póngase en contacto con nosotros. Si la célula no se pone en contacto con nosotros dentro de los tres días de la firma, la recepción es buena por defecto. Si hay un problema de actividad en el primer tubo de reanimación, Póngase en contacto con nosotros a tiempo, y los técnicos se comunicarán con usted para guiarlo antes de reanimar el segundo tubo.Los problemas en la recuperación del segundo tubo sin contactar con nosotros no se venderán después de la venta.

Pasos de cultivo celular

a yTransmisión celular:SiNo superadoAl 80% de confluencia, se recoge el medio embotellado en un tubo centrífuga, se deja un medio de cultivo de 5 ML y se coloca a 37 ° C y 5% de Co.₂Cultivo en incubadora;Si la densidad celularsúperEl 80% puede ser cultivado de generación en generación..

Células adherentesLos pasos son los siguientes:

1) abandonar el sobrenadante de cultivo y lavar las células 1 - 2 veces con PBS sin iones de calcio y magnesio;

2) añadir 1 ml de líquido digestivo (0,25% TRYPSIN - 0,53 mm edta) en el frasco de cultivo, colocarlo en la incubadora para digerir durante 1 minuto, y luego observar la digestión celular bajo el microscopio. si la mayoría de las células se redondean y se caen, llevarlo rápidamente de vuelta a la Mesa de operaciones. después de golpear suavemente el frasco de cultivo Varias veces, añadir 6 ML con 10% de suero.Medio de cultivoTerminar la digestión;

3) soplar suavemente las células, extraerlas en un tubo centrífuga después de caerse, centrifugarlas a 1000 RPM durante 5 - 8 minutos, descartar el sobrenadante, añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo y soplarlas bien;

4) añadir el medio de cultivo de 5 - 6 ml por botella y dividir la suspensión celular en una nueva placa de Petri de 6 cm que contiene el medio de cultivo de 5 - 6 ML o en el frasco de cultivo t25 en una proporción de 1: 2.

(es decir1 botella de t25 inoculada de generación en generación a 2 botellas de t25 o 2 placas de Petri de 6 cm)

Células suspendidasLos pasos de transmisión son los siguientes:

1. método de semicambio de líquido

Tratamiento de medio cambio de líquido, botella de cultivo vertical en la incubadoraAproximadamente una hora, se succionan suavemente unos 3 ml de medio de cultivo, y luego se reabastecen 3 ml de medio de cultivo. si el medio de cultivo cambia lentamente de color, se puede agregar directamente unos 500 ul de fbs. al pasar, se puede reabastecer directamente el medio de cultivo de 5 ML en dos botellas de cultivo. por lo general, de esta manera, alrededor de 3 veces se puede pasar por centrifugación para eliminar las células muertas.

2. método de intercambio de líquido centrífuga

Si es necesario dividir el vial, se puede recoger la suspensión celular en el tubo centrífuga.1000rpm， Centrifugar durante 5 minutos, descartar el sobrenadante, añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo y volver a suspender bien, dividir la suspensión celular en un nuevo frasco t25 en una proporción de 1: 2, añadir 6 - 8 ml de nuevo medio de cultivo configurado de acuerdo con los requisitos de las instrucciones para mantener la vitalidad del crecimiento celular, y la Transmisión posterior se lleva a cabo en una proporción de 1: 2 a 1: 5 de acuerdo con la situación real.

b yCriopreservación celular:

1. cuando las células crezcan hasta cubrir el 80% del área del frasco de cultivo, abandone el medio de cultivo en el frasco de cultivo t25 y limpie las células con PBS una vez;

2. agregue alrededor de 1 ml de líquido digestivo al 0,25% al frasco de cultivo, observe bajo un microscopio invertido, agregue 5 ml de líquido de cultivo para terminar la digestión después de que la célula se reduzca y redondee, luego sople suavemente la célula para que se desprenda, y luego transfiera la suspensión a un tubo centrífuga de 15 ml, centrifugado a 1000 RPM durante 5 minutos;

3. deseche el suero superior y agregue 1 ml de Criopreservación libre de suero biológico Yagi a las células precipitadas.Número de artículo:C7001）， Mezcle bien y agregue al congelador.

4. coloque las células congeladas directamente en-Está bien un refrigerador de 80 ° c, como en el período posterior.quererTransferir las células a un tanque de nitrógeno líquido,EntoncesNecesario en- refrigerador de 80 ° CcentroAlmacenamientoMás de 24 horasotra vezPasar al tanque de nitrógeno líquido.

C yReanimación celular:

1,Extracción del criodepósito celular del nitrógeno líquido..atenciónLlevarprotecciónMascarilla), colocarla rápidamente Descongelar en un baño de agua a 37 ° C hasta que no haya cristalización en el congelador, y luego limpiar la pared exterior del congelador con alcohol al 75%;

2,Trasladar las células del criodepósito a En un tubo centrífuga de 15 ml de medio de cultivo de 5 ml, 1000 RPM se centrifuga durante 5 minutos;

3,Abandonar la parte superior de la limpieza, precipitarSuspensión pesada del medio de cultivo de 5 ml, vacunaciónABotella de cultivo t25,soltaren37 ℃, 5% CO₂Cultivo en una caja de cultivo celular;

4,Al día siguiente, se cambió por un medio fresco para continuar el cultivo.

Precauciones:Algunas células no se adhieren firmemente a la pared y son propensas a caerse durante el transporte, lo cual es normal. Si se separa más, se puede recoger todo el medio de cultivo del frasco de cultivo en el tubo centrífuga.Centrifugación de 1000 RPM durante 5 min,Recoger shangqingHacer cultivo de transición(cultivo comparativo posterior), precipitación añadida1-2ml， Soplar suavemente, volver a colgar, digerir 1 - 2 minutos después, añadir 5 ml de medio de cultivo para detener la reacción. Centrifugar de nuevo, descartar la parte superior y agregar 1 - 2 ml de medio de cultivo para suspender. A continuación, se realiza el paso por botella (dos t25) en una proporción de 1: 2, se completa con un nuevo medio de cultivo a 5 - 8 ml / botella y finalmente se coloca a 37 ° c, 5% Co₂Cultivo en una caja de cultivo celular.