Células hepáticas de carpa de hierba; L8824

Nombre del producto: células hepáticas de carpa de hierba; L8824

Categoría del producto: otras líneas celulares

Características de crecimiento: crecimiento pegado a la pared

Sistema de cultivo: dmem (alto contenido de azúcar) + 10% fbs, cultivo a 28 ° o 21 °

Método de transmisión: 1: 2 transmisión

Condiciones de criopreservación: Criopreservación de células libres de suero

Condiciones de conservación: > 85%

Especificación: botella de cultivo 1 × 10 ¿ 6cells / t25

Número de artículo: CS - c2900

Métodos para congelar y preservar las células:
Método de congelación y conservación 1: el tubo de congelación se coloca en un tanque de nitrógeno líquido de 4 ° C durante 30 a 60 minutos (- 20 ° C durante 30 minutos *) - 80 ° C durante 16 a 18 horas (o durante la noche) para el almacenamiento a largo plazo.
Método de congelación y conservación 2: el tubo de congelación se coloca en una máquina de enfriamiento programable con un programa establecido para bajar de 1 - 3 ° C a menos de - 80 ° C por minuto, y luego se coloca en un tanque de nitrógeno líquido vaper fase para su almacenamiento a largo plazo. * - 20 ° C no debe exceder de 1 hora para evitar que los cristales de hielo sean demasiado grandes y causen una gran cantidad de muertes celulares. también puede saltarse este paso y colocarlos directamente en el refrigerador - 80 ° c, pero la tasa de supervivencia se reduce ligeramente.

El tejido epidérmico se forma a partir del Ectodermo durante el período embrionario y tiene un efecto antifricción y antidaño. La tecnología corporativa proporciona ARN total de alta calidad del tejido epidérmico fetal de ratas frescas o congeladas, cadenas de cDNA preparadas por pcr, proteínas y sus subcomponentes. Todos los productos pasan por un estricto proceso de Qa / control de calidad antes de la entrega para garantizar su calidad. Estos productos se pueden utilizar directamente en la clonación genética, el análisis de mapas de expresión y la investigación de varios experimentos de biología molecular.
Preparación del ARN total:El ARN se aísla con el reactivo trizor del kit qiagen rnasy y luego se purifica con el kit qiagen RNA clean. Las muestras totales de ARN proporcionadas por la compañía están acompañadas de la concentración total de las muestras de arn, el contenido total, las fotos de fluorescencia, los resultados de la determinación del valor de od, etc.

Preparación de adnc:El ARN total purificado sintetiza la cadena cDNA y la transcripción inversa se realiza con un sistema de reacción total de 50 ul, que incluye la Transcriptasa inversa mmlv y el primer aleatorio, así como 10 mg de ARN total. La reacción de rt terminó después de 10 minutos de reacción a 68 ° c. Utilizando 1x rt Buffer para transportar cdna, 1 ul cDNA es suficiente para una reacción pcr. Todos los productos cDNA han sido estrictamente analizados por QA / QC antes de la entrega del pedido, lo que garantiza la calidad del producto.

Preparación de proteínas:Uso mejorado RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin) Se preparó un lisado de tejido epidérmico fetal de rata, se centrifugaron para eliminar fragmentos de tejido y se determinó la concentración de proteína a través de un kit de detección de proteína bio - rad. después de diluir la proteína de tejido, se agregó un 5% de beta - Mercaptoetanol y pmsf a la proteína no reductora Buffer (50 mm tris - hcl, pH 6,8, 5% glycerol, 1% sds, 0002% bromfenol blue) y se conservó a - 80 grados.

Aplicaciones potenciales: < 1 > clonación PCR de genes conocidos; < 2 > empalme selectivo del arnm; < 3 > clonación genética y secuenciación de objetivos; <4>Western and Northern Blot； < 5 > detección de proteínas y proteómica; < 6 > mapa de investigación y expresión de chips.

Tratamiento celular:

1) células de reanimación: coloque rápidamente el criostorio que contiene 1 ml de suspensión celular en un baño de agua a 37 ° c (la superficie del agua debe estar por debajo de la tapa del criostorio) para Sacudirlo y descongelarlo, y mueva al tubo centrífuga de 15 ML preparado previamente que contiene un medio de cultivo de 4 ML para mezclar uniformemente. Centrifugar durante 4 minutos a 1000 rpm, descartar el líquido sobrenadante, añadir 1 ml de medio de cultivo y soplar bien. A continuación, todas las suspensiones celulares se trasladan a un frasco de cultivo que contiene un medio de cultivo de 5 ML para el cultivo durante la noche. Al día siguiente, cambie de líquido y compruebe la densidad celular.
2) transmisión celular: si la densidad celular alcanza el 80% - 90%, se puede realizar el cultivo de transmisión.
Para las células suspendidas, la transmisión puede referirse a los siguientes métodos:
Método 1: recoger las células, 1000rpm, centrifugar a temperatura ambiente durante 5 minutos, descartar el sobrenadante, añadir 1 - 2 ml de medio de cultivo y soplar bien, y dividir la suspensión celular en una nueva placa de Petri o botella que contiene 8 ml de medio de cultivo en una proporción de 1: 2 a 1: 5.
Método 2: se puede elegir el método de cambio de medio, después de descartar la mitad del medio de cultivo, colgar las células restantes y dividir la suspensión celular en una nueva placa de Petri o botella que contiene 8 ml de medio de cultivo en una proporción de 1: 2 a 1: 3.
3) Criopreservación celular: cuando la célula está en buen estado de crecimiento, se puede congelar la célula. Al congelar las células suspendidas, se deben recoger, 1000rpm, centrifugar a temperatura ambiente durante 5 minutos, conservar el sobrenadante en pequeñas cantidades (para evitar que las células se absorban), añadir parte del medio de cultivo fresco, soplar uniformemente, añadir al congelador, añadir el 10% Dmso al congelador y agitar bien para congelarlo. Medio de cultivo congelado
Al congelar las células se debe utilizar el medio de cultivo criogénico recomendado. El medio de cultivo congelado debe contener protectores congelados como Dmso o glicerina. También se puede utilizar un medio de cultivo especialmente preparado para el almacenamiento congelado.
1) el medio de Criopreservación celular es un medio de Criopreservación listo para usar para células de mamíferos. la proporción de suero bovino fetal y suero bovino contenido en él se optimiza para mejorar la vitalidad celular y el efecto de reanimación celular después del deshielo.
2) el medio de Criopreservación es un medio de Criopreservación definido por la composición química, libre de proteínas y estéril, que contiene un 10% de Dmso y es adecuado para la Criopreservación de múltiples células madre y células primarias (excepto melanocitos).
Proceso de operación:
1.1 reactivos e instrumentos principales: microscopio de contraste de fase invertido (olympus IMT - 413, japón), incubadora de CO2 (yamato IT - 61, japón).
1.2 paso de cultivo de reanimación y Criopreservación de células hek - 293:
1.2.1 El cultivo de reanimación celular extrae el criodepósito del tanque de nitrógeno líquido, lo pone inmediatamente en un baño de agua a 37 ° C y lo sacude constantemente para que se derrita rápidamente. Extraer el criostorio celular disuelto, desinfectarlo con alcohol y abrirlo, aspirar el criostorio celular, añadir el medio de cultivo preinstalado (37 ° c precalentado, 8 a 10 veces el volumen) en el tubo centrífuga, soplar y mezclar ligeramente, luego 1000 RPM 5 min, eliminar el sobrenadante, añadir una cantidad adecuada de medio de cultivo, soplar en suspensión celular, vacunarse en un frasco de cultivo de 25 cm 2 con una densidad de 1 × 105 / ml, cultivar a 37 ° c, 5% CO 2 y humedad saturada.
1.2.2 las células hek - 293 cultivadas de generación primaria de células cambian de líquido una vez a las 48 horas. cuando las células crecen hasta el 60% al 70% de fusión, se digieren de 1 a 2 minutos con el 0,25%, y el frasco de cultivo se golpea suavemente con la palma de la mano para que las células se desprendan, suspendan y dispersen. para que las células se dispersen aún más, se pueden soplar suavemente varias veces los tubos de soplado para obtener la suspensión celular, y luego se añade el medio de cultivo duplicado, se mezcla suavemente, las pajitas se empaquetan en una mezcla y las células se expanden de generación en generación.
1.3 La observación de la morfología celular se observa y registra bajo un microscopio invertido el crecimiento celular y las características morfológicas.
1.4 El recuento de células es convencional para digerir las células, esperar a que las células se redondeen, se desprendan de la pared y floten, añadir una pequeña cantidad de medio de cultivo para centrifugar, y luego volver a colgar con PBS y soplar para hacer una suspensión celular. Añadir una pequeña suspensión celular a un lado de la vitrina de la cubierta de la placa de conteo celular, observar el número de células de celosía generosa en las cuatro esquinas de la placa de conteo con una lente de 10 × objeto, y calcular el número de células de acuerdo con la fórmula. Número de células / ml de líquido original = (suma del número de células de celosía cuadrada / 4) × 104.
Las células en el período de crecimiento del índice de tasa de adhesión de 1,5 células se digieren en suspensión unicelular al 0,25%, se inoculan en 12 frascos de cultivo de 25 cm 2 Después del conteo, se extraen aleatoriamente 3 frascos de células cada dos horas, se absorben el medio de cultivo y las células no adheridas, se agrega la Enzima digestiva pancreática para digerir y contar las células adheridas, y se toma su promedio, de acuerdo con la fórmula: tasa de adhesión (%) = (número de células adheridas / número de células vacunadas) × 100%, se calcula la tasa de adhesión.
1.6 las células en el período de crecimiento del índice de extracción de la curva de crecimiento se digeriron para hacer una suspensión unicelular, se inocularon en 24 placas de agujeros con 1 × 104 / agujero y se añadieron 1 ml de medio de cultivo por agujero. Se toman 3 agujeros al azar todos los días, se cuenta el número de células por agujero y se calcula el promedio. Contando 10 días consecutivos, se dibuja la curva de crecimiento celular.

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Oleanolic Acid olean Fruit 17 beta - hidroxi - 4 - androsteno - 3 - 17 - éster
Células hepáticas de carpa de hierba; L8824Kit de prueba Elisa de la Lipasa humana A2 ≥ 4.190% como finalizado por SDS - page 2,5 - dibenén

Kit de prueba Elisa de la enzima de modificación de glucosa humana ≥ 4191% como finalizado por SDS - page 4 - cloro - 6 - IL - 5 - fluoropirimidina

Kit de prueba Elisa de Inositol 3 humano ≥ 4192% como decidido por SDS - page L - (+) - amígdala

Kit de prueba Elisa de Proteína quinasa activada por adenosina humanizada ≥ 4.194% como finalizada por SDS - page n, N '- (4,4' - bifenilo) bimaleimida

Kit de prueba Elisa de quinasa regulada por señal extracelular humanizada ≥ 4195% como terminal por SDS - page o - Trifluoruro de benceno

Kit de prueba Alfa Elisa de la proteína inhibidora del factor nuclear humano Kappa B ≥ 4196% como terminal por SDS - page aminozinc de segunda generación

Kit de prueba de la Proteína quinasa humanizada C Elisa ≥ 4197% como finalizado por SDS - page 2,4,5 - triaciltiazol

Kit de prueba Elisa de fructokinasa humana ≥ 4198% como finalizado por SDS - page 6 - hidroxi - 2 - naftalenosulfonato de sodio

Kit de prueba Elisa de la enzima de modificación de glicerina humana 2 ≥ 4199% como finalizado por SDS - page 4 - flúor - 3 - hidroxibenzal

Kit de prueba Elisa de Linfocina humana ≥ 4200% como decidido por SDS - page 2,3 - dipiridina

Kit de prueba Elisa de quimioquina linfocitaria humana ≥ 4201% como terminal por SDS - page 3 - éster

Kit de prueba Elisa del genotipo complejo del antígeno linfoide humano 6 ≥ 4202% como decidido por SDS - page L - Sal de valerato terciario

Antígeno asociado a la función linfocitaria humana 3 kit de prueba Elisa ≥ 4203% como decidido por SDS - page 3,4,5 - triflubennitrilo

El kit de prueba Elisa del antígeno 2 relacionado con la función linfocitaria humana ≥ 4204% es decisivo por SDS - page 4 - dibenboron

Informe experimental:
I. aislamiento y cultivo:
1. en condiciones estériles, se extrae el tejido auricular de las ratas de SD de 1 - 3 días de edad, y luego se limpia este bloque de tejido dos veces con pbs, que luego se convertirá en aproximadamente 1 mm3;
2. añadir 4 ml de líquido digestivo enzimático (0,1% 0,1% colagenasa tipo i) al bloque de tejido, suspender durante 10 segundos, digerir a 37 ° C durante 10 minutos, luego soplar con un gotero para hacer una suspensión unicelular, precipitar naturalmente y recoger el suero superior, y terminar la digestión con un medio de cultivo FBS que contiene 10% y colocarlo a 4 ° c;
3. añadir 3 a 4 ml de líquido digestivo enzimático al tejido restante, suspender durante 10 segundos, digerir a 37 ° C durante 10 minutos, recoger el suero superior de acuerdo con el método anterior y terminar la digestión y colocarlo a 4 ° c. repetir este paso 2 - 3 veces hasta que el tejido * sea digerido;
4. filtrar el líquido digestivo celular con un tamiz de acero inoxidable de 200 mallas, centrifugar 1200r / MIN durante 10 minutos, descartar el sobrenadante, precipitar las células con suspensión de medio de cultivo que contiene 10% FBS dmem / f12, inocular en un frasco de cultivo de 25 cm 2, colocarlas a 37 ° C y cultivarlas en una incubadora de CO2 al 5%;
5. después de pegar la pared a una velocidad diferencial durante 1 hora, se succiona el medio de cultivo y se inocula en una placa de 6 agujeros para continuar el cultivo de acuerdo con las necesidades del experimento;
2. identificación por inmunofluorescencia:
1. cuando los miocitos auriculares crezcan hasta el 80% de fusión, abandone el medio de cultivo, lave las células 2 veces con PBS cultivados a temperatura ambiente, 10 minutos cada vez, y luego fije las células a temperatura ambiente durante 15 minutos con poliformaldehído al 4%;
2. el PBS enjuaga las células dos veces, 10 minutos cada vez, y luego penetra la película con un 0,1% de Tritón X - 100 a 4 ° C durante 15 minutos;
3. el PBS enjuaga las células dos veces, 10 minutos cada vez, y luego cierra las células con un 4% de BSA durante 30 minutos a temperatura ambiente;
4. diluir alfa - Acción un anticuerpo en una proporción de 1: 100, y luego colocarlo en un refrigerador a 4 ° C para incubar células durante la noche;
5. el PBS enjuaga las células tres veces, 10 minutos cada vez, diluye la resistencia secundaria a la alfa - Acción en una proporción de 1: 150 y las coloca durante 1 hora a 37 ° c;
6. enjuagar con PBS tres veces, 10 minutos cada vez, y luego observar la imagen bajo un microscopio fluorescente invertido y tomar fotos.