Kit de detección de anticuerpos enzimáticos contra el virus Geta

Kit de detección de anticuerpos enzimáticos contra el virus gaita

Manual de instrucciones

Principio de detección

Este Kit está compuesto por una placa estándar de enzima, un marcador de enzima y otros reactivos de apoyo que envuelven previamente el antígeno del virus de la tapa. en el experimento, se añade suero de control y muestras a detectar a la placa estándar de enzima. si la muestra contiene anticuerpos del virus de la tapa después de la cría en caliente, se unirá al antígeno de la placa estándar de enzima y se lavará para eliminar otros ingredientes no Unidos. Se añade un marcador enzimático para la Unión específica con el complejo de antígenos y anticuerpos en la placa de etiqueta enzimática; Después de lavarse, se elimina el marcador enzimático no unido, se añade un líquido de sustrato tmb al agujero, que reacciona con el complejo enzimático para formar un producto azul, y la profundidad del color está positivamente relacionada con el contenido de anticuerpos específicos en la muestra; Después de agregar el líquido de terminación para terminar la reacción, el producto se vuelve amarillo; Se puede saber si la muestra contiene anticuerpos contra el virus gaita determinando el valor de absorción de luz en cada agujero de reacción a una longitud de onda de 450 nm con un medidor de etiqueta enzimática.

Composición del kit

Almacenamiento y período de validez

Se conserva a 2 a 8 ° C y tiene una validez de 12 meses.

Después de abrir la placa de cubierta, guarde a 2 a 8 grados Celsius para evitar la humedad. El período de uso es de 2 meses.

Instrumentos aplicables

Medidor estándar enzimático con longitud de onda de 450 nm, equipo de temperatura constante de 37 ° c, micropipeta ajustable.

Preparación de muestras

1. tomar toda la sangre del animal para preparar el suero de acuerdo con el método convencional requiere que el suero sea claro, sin Hemólisis y sin contaminación. Las muestras se pueden conservar a 2 a 8 ° C en una semana, y deben conservarse a - 20 ° C durante mucho tiempo.

2. el detergente concentrado debe recuperarse a temperatura ambiente antes de su uso para disolver la precipitación, y luego diluirse en detergente de trabajo con agua destilada o desionizada como 20 veces (por ejemplo, 19 partes de agua destilada o desionizada más 1 parte del detergente concentrado).

Método de verificación

1. deje el kit a temperatura ambiente durante 30 minutos antes de usarlo y vuelva a la temperatura ambiente.

2. tome la cantidad necesaria de tiras estándar de enzima, establezca un agujero para el control negativo y positivo, las tiras no utilizadas se sellarán lo antes posible y se conservarán a 2 a 8 grados celsius.

3. en el agujero de la muestra se añade primero la muestra a detectar de 5ul, y luego se añade el diluyente de la muestra de 95ul, que se agita completamente y se mezcla bien.

4. se añaden 100 μl de control negativo y positivo a los agujeros de control negativos y positivos, respectivamente.

5. mezcle bien, cubra la película de cubierta y coloque una incubadora a 37 ° C durante 30 minutos.

6. retire el líquido del agujero, agregue 250ul de líquido de lavado de trabajo por agujero, lave 60 segundos después de sacudir y mezclar bien, repita el lavado 5 veces, * después, tome el líquido seco.

7. añadir 100 μl de marcador enzimático por agujero y dejar a 37 ° C para evitar la luz durante 30 minutos.

8. retire el líquido del agujero, agregue 250ul de líquido de lavado de trabajo por agujero, lave 60 segundos después de sacudir y mezclar bien, repita el lavado 5 veces, * después, tome el líquido seco.

9. de acuerdo con el número de muestras, el líquido de desarrollo de color a y el líquido de desarrollo de color B se mezclan uniformemente en una proporción de volumen igual como el líquido de trabajo del sustrato, que ahora se utiliza. Agregue 100 ul por agujero y deje a 37 ° C para evitar la reacción de la luz durante 10 minutos. si la velocidad general de color es demasiado rápida, puede terminar el color con 5 minutos de antelación. el tiempo de color * no excederá de 15 minutos.

10. añadir 100 μl de líquido de terminación a cada agujero, mezclar bien y medir el valor de absorción de luz (valor de od) de cada agujero a 450 nm.

Valor de referencia

En condiciones normales del experimento, el control positivo od - control negativo od > 0,2.

Interpretación de los resultados de las pruebas

1. S / P = (muestra od - control negativo od) / (control positivo od - control negativo od).

2. cuando S / P ≥ 0,4, el resultado fue interpretado como positivo.

3. los resultados a 0,2 < S / p < 0,4 consideran que puede haber una falta de título de anticuerpos o una infección sospechosa.

4. cuando S / P es inferior a 0,2, el resultado se interpreta como negativo.

Limitaciones de los métodos de ensayo

1. este Kit solo sirve como una evaluación aproximada de los anticuerpos contra el virus gaita en las muestras de detección cualitativa.

2. este Kit es solo para investigación y no debe usarse en experimentos clínicos o humanos.

Precauciones

1. las operaciones experimentales deben llevar guantes y ropa de trabajo, mejorar y aplicar estrictamente el sistema de desinfección y aislamiento, y todo tipo de residuos experimentales deben tratarse de acuerdo con los contaminantes.

2. el líquido de terminación es corrosivo, se debe evitar el contacto con la piel y la ropa, y si se entra en contacto accidentalmente, se debe lavar inmediatamente con una gran cantidad de agua del grifo.

3. las placas estándar enzimáticas deben recuperarse a temperatura ambiente antes de abrir la bolsa cuando se extraigan del ambiente refrigerado, y las placas estándar enzimáticas no agotadas deben conservarse en bolsas selladas con desecante.

4. el detergente concentrado es fácil de cristalizar a baja temperatura y debe recuperarse a temperatura ambiente para disolverse cuando se utiliza.

5. las muestras utilizadas para la prueba deben mantenerse frescas.

6. la determinación de los resultados de la prueba debe basarse en la lectura del medidor de enzima.

7. los componentes de los reactivos de diferentes números de lote no deben mezclarse.