Elispot pro: prueba humana ifn - gamma (alp) de Interferón humano

Elispot pro: prueba humana ifn - gamma (alp) de Interferón humano

Principios experimentales de mabtech elispot

El experimento elispot utilizó una placa de 96 agujeros con membrana PVDF como base (cat: msips 4510, millipore), envuelta en anticuerpos monoclonales específicos (que requieren anticuerpos no tóxicos, libres de LPS y de alta afinidad) para capturar las citocinas secretadas por las células.

A continuación, se añaden las células a detectar y los estímulos de antígenos al agujero de la placa de cultivo para el cultivo. Bajo la estimulación de un estimulante, las células T secretan las citocinas correspondientes en el período de tiempo correspondiente. En este momento, las citocinas están envueltas en anticuerpos capturados en la membrana.

Después de lavar la célula, las citocinas capturadas pueden unirse al segundo anticuerpo marcado por biotina, y luego unirse a la biotina con la avidina marcada por la enzima para realizar la coloración ligada a la enzima química, lo que permite formar manchas redondas en el local de la membrana (por supuesto, también se puede utilizar el segundo anticuerpo marcado por la luciferina, lo que elimina los métodos químicos posteriores de coloración y permite detectar múltiples citocinas a la vez), cada una de las cuales corresponde a la célula que secretaba la citoquina original.

Contando el número de manchas en la membrana, divididas por el número total de células añadidas originalmente al agujero, se puede calcular el porcentaje de células positivas.

MABTECHEsta tecnología tiene las siguientes tres ventajas principales:

Uno: alta sensibilidad. Las citocinas se pueden detectar siempre que una de cada millón de células secrete, lo que aumenta entre 2 y 3 órdenes de magnitud en comparación con los métodos tradicionales de elisa.

2: nivel unicelular, detección de la función celular viva. Elispot estimula directamente las células vivas con antígenos y detecta la función de las células vivas.

En tercer lugar: la operación es simple y económica, y se puede realizar una selección de alto rendimiento. Elispot no tiene un complejo proceso de expansión celular in vitro, no utiliza isótopos y, siguiendo una operación experimental estandarizada, un experimentador puede procesar cientos de muestras al mismo tiempo, lo que es mucho más eficiente que otros métodos de detección.

Elispot pro: prueba humana ifn - gamma (alp) de Interferón humano

Mabtech: 3420 - 2apt - 2 incluye:

Placas prerecubiertas, mAb 1-D1K (2 placas transparentes) Detección de mAb: 7-B6-1, ALP (150 μl)

Sustrato BCIP/NBT-plus (25 ml)

Control positivo: Anti-CD3 mAb (CD3-2) (100 μl)

¿‍ sí?