Kit de detección del virus del herpes felino

Kit de detección del virus del herpes felinoEspecificaciones de embalaje 25t / Caja & 50t / Caja

[principio de inspección]

Kit de detección del virus del herpes felinoEste Kit diseña un primer específico y una sonda de baliza molecular para este gen, y cuando la muestra a detectar contiene este adn, la respuesta PCR se puede realizar y liberar señales fluorescentes. El instrumento se utiliza para monitorear y exportar las señales fluorescentes correspondientes en el proceso PCR en tiempo real para realizar el análisis cualitativo de los resultados de la prueba.

[condiciones de almacenamiento y fecha de caducidad] conservar por debajo de - 20 ° C para evitar la congelación y el deshielo repetidos, con una fecha de caducidad de 12 meses.

serie abi, serie bio - rad, serie Agilent Stratagene mx, Roche lightcycler r480, cepheid smartcycler, serie rotor - gene, serie Hangzhou bori y otros PCR cuantitativos fluorescentes en tiempo real multicanal.

[requisitos de la muestra]

1. si se utiliza el espécimen original para la prueba. Los especímenes (líquido cefalorraquídeo del paciente, sangre venosa, líquido articular; sangre venosa del animal enfermo, leche; colonias, musgo, etc.) deben ser especímenes originales recogidos y suspendidos con agua esterilizada al doble vapor o solución salina esterilizada.

2. si es necesario realizar una prueba PCR después de la inoculación, se debe utilizar un líquido de inoculación selectiva para la inoculación de la muestra original.

3. si los especímenes no se pueden detectar inmediatamente después de la recolección, se pueden refrigerar a 2 a 8 ° C durante la noche para su conservación; Si se necesita conservación a largo plazo, los especímenes deben congelarse a - 20 ℃ ~ - 80 ℃.

[método de inspección]

1. preparación de reactivos (área de preparación de reactivos)

(1) retire el kit del refrigerador, retire el kit necesario para el experimento del kit, derrita completamente y mezcle y centrifuga instantáneamente para eliminar el líquido adherido a la pared del tubo.

(2) contabilizar el número de reacciones necesarias para el experimento (n) y calcular la cantidad de varios reactivos necesarios para el experimento de acuerdo con el sistema de reacción mostrado en la siguiente tabla.

N = número de controles negativos (1t) + número de controles positivos (1t) + reserva de error (1t) + número de muestras

(3) añadir los reactivos anteriores en un tubo centrífuga estéril y centrifugar instantáneamente después de mezclar completamente. Los reactivos se dividen en tubos de reacción PCR de acuerdo con la cantidad de 20 μl / tubo.

(4) después de cubrir la tapa del tubo de reacción pcr, el tubo de reacción PCR se transfiere a la zona de procesamiento de muestras. Los reactivos restantes se devuelven al refrigerador por debajo de - 20 ° C y se congelan.

2. preparación de la muestra (área de procesamiento de la muestra)

Se puede extraer el ácido nucleico con un kit de extracción de ADN / arn, y la operación específica se opera de acuerdo con las instrucciones de su kit.

3. añadir muestras

En los tubos de muestra de reacción PCR preparados anteriormente, se añaden 5 μl de ADN y 25 μl de volumen final de las muestras procesadas a medir, respectivamente, y se centrifuga instantáneamente a baja velocidad después de cubrir la tapa de reacción PCR y mezclar bien, y se transfiere al instrumento pcr. El control negativo y el cuidado positivo se añaden al control negativo o al control positivo traído por el kit de 5 μl cada uno, con un volumen final de 25 μl por tubo, y se centrifuga instantáneamente a baja velocidad después de cubrir la tapa de reacción PCR y mezclar bien, y se transfiere al instrumento pcr.

4. PCR (zona de amplificación pcr)

(1) tomar el tubo de reacción PCR preparado en el área de procesamiento de muestras, colocarlo en la posición correspondiente de la ranura de muestra del PCR cuantitativo fluorescente en tiempo real y registrar el orden de colocación.

(2) la siguiente tabla establece los parámetros relacionados con la amplificación de ácido nucleico del instrumento para la amplificación pcr.

Nota: el PCR fluorescente de la serie Abi no selecciona la corrección de rox cuando se establece, y el Grupo de enfriamiento se establece para seleccionar ninguno.

[valor de referencia (rango de referencia)]

1. determinación de la validez del kit:

(1) control positivo: hay una curva de amplificación típica en forma de s o un valor de CT ≤ 35.

(2) control negativo: valor CT superior a 38 o sin valor ct, la línea es recta o ligeramente oblicua, y no hay período de crecimiento exponencial.

2. determinación de los resultados de los especímenes:

(1) positivo: el valor CT del resultado de la prueba de la muestra es ≤ 35 o tiene un período de crecimiento exponencial obvio.

(2) sospechoso: el valor CT de los resultados de la prueba de la muestra está dentro del rango de 35 a 38. En este momento, las muestras deben someterse a pruebas repetidas, si el valor CT de los resultados experimentales repetidos todavía está dentro del rango de 35 a 38, y hay un período de crecimiento exponencial obvio, se determina que es positivo, de lo contrario es negativo.

(3) negativo: el valor CT del resultado de la prueba de la muestra es superior a 38 o no hay valor Ct.

[explicación de los resultados de la inspección]

[limitaciones del método de inspección]

1. cuando la concentración de ácido nucleico detectado en la muestra detectada es inferior a la detección de este kit, puede ocurrir un resultado falso negativo.

2. la manipulación inadecuada de las muestras detectadas durante la recolección, el transporte, el almacenamiento y el tratamiento puede causar fácilmente degradación del ADN y producir resultados falsos negativos.

3. la contaminación cruzada de las muestras durante la recolección, el transporte, el almacenamiento y el tratamiento es fácil de obtener resultados falsos positivos.

[indicador de rendimiento del producto] el límite de detección del producto es de 103 copies / ml, y el valor de CVS del producto es ≤ 3%.

[precauciones]

1. los laboratorios que utilicen este Kit deben gestionarse estrictamente de conformidad con las normas de gestión de los laboratorios de pruebas de amplificación genética pertinentes promulgadas por las partes pertinentes del estado;

2. para evitar la degradación del arn, el proceso de procesamiento de la muestra debe funcionar a 0 - 4 ° C y se debe poner en la máquina para la detección inmediatamente después de completar el experimento; Los consumibles de los utensilios utilizados en el proceso de tratamiento de la muestra deben ser tratados sin ribozima;

3. los artículos de cada área son especiales y no deben cruzarse para evitar la contaminación; Inmediatamente después de la prueba, la Mesa de trabajo debe limpiarse;

4. al absorber el líquido de reacción, se deben tratar de evitar burbujas de aire; Antes de subir al pcr, se debe prestar atención a comprobar si cada tubo de reacción está bien cubierto para evitar que la evaporación del líquido cause resultados inexactos;

5. todos los reactivos del kit deben derretirse y mezclarse completamente a temperatura ambiente antes de su uso, y deben centrifugarse instantáneamente;

6. todos los controles negativos y positivos en el kit deben transferirse a la zona de preparación de la muestra antes de su primer uso y almacenarse por separado;

7. para evitar interferencias fluorescentes, se debe evitar el contacto directo con las manos desnudas con el tubo de reacción PCR y se debe evitar cualquier marca en el tubo de reacción pcr;

8. la cabeza de succión utilizada durante la prueba debe golpearse directamente en el tanque de residuos con un 10% de ácido hipocloroso, y el tubo de reacción PCR al final de la prueba no debe abrirse la tapa y desecharse después de la esterilización con otros artículos desechados; Las mesas de trabajo y diversos suministros experimentales deben desinfectarse regularmente con un 10% de ácido hipocloroso, un 75% de alcohol o lámparas ultravioleta;

Los parámetros relacionados con la amplificación del instrumento deben establecerse de acuerdo con los requisitos pertinentes de este manual; Los reactivos de diferentes lotes no se pueden mezclar; Y se utiliza durante el período de validez. Los productos solo se utilizan para la investigación científica.