Marca de células epiteliales alveolares humanas tipo II

Células epiteliales tubulares humanas

I. atributos básicos de la célula

Medios de cultivo: contiene fbs, aditivos para el crecimiento, pencilina, streptomicina, etc.

Frecuencia de cambio de líquido: cambio de líquido cada 2 - 3 días

Características de la transmisión: se puede transmitir de 2 a 3 generaciones

Líquido digestivo: 0,25% enzima blanca dan pancreática

Condiciones de cultivo: fase gaseosa: aire, 95%; CO2，5%

Introducción celular: las células epiteliales del tubo humano se aislan del tejido traqueal; Trachea, parte de los órganos respiratorios; Es un tubo cilíndrico con una pared trasera ligeramente plana. El extremo superior es plano en el borde inferior de la sexta columna cervical y está conectado con el cartílago circular; Hacia abajo hasta la Unión del cuarto y quinto Cuerpo vertebral torácico (equivalente al plano angular del esternón), se divide en los bronquios principales izquierdo y derecho, y la bifurcación se llama bifurcación traqueal. La tráquea está compuesta principalmente por 14 - 16 cartílagos semicirculares, elásticos, cartílagos en forma de "c", con brechas hacia atrás, cada anillo cartílagos Unido por ligamentos, y la brecha detrás del anillo está conectada por un Músculo liso y un tejido conjuntivo denso, manteniendo un Estado de apertura continua. El Lumen está forrado con mucosa, la superficie cubre el epitelio ciliado, el moco Secretado por la mucosa puede adherirse a las partículas de polvo en el aire, y los cilios se balancean constantemente hacia la faringe para expulsar el moco y el polvo para purificar el gas inhalado. El epitelio traqueal es la primera línea de defensa para que las vías respiratorias entren en contacto con el entorno externo, no solo las células Diana que actúan como diversos patógenos y mediadores inflamatorios, sino también como células efectoras para sintetizar y liberar una variedad de mediadores inflamatorios y citocinas, participando así en la inflamación de las vías aéreas y la respuesta inmune. Las células epiteliales traqueales primarias cultivadas in vitro son extremadamente importantes en la investigación básica y clínica debido a sus grandes similitudes con los tejidos in vivo en términos de estructura morfológica y actividad funcional.

Ideas para el aislamiento y cultivo de células primarias:

Extracción de materiales - separación - cultivo - Identificación

En primer lugar, el tejido se extrae del cuerpo y se dispersa en células individuales después del tratamiento con danbai / colagenasa pancreática, y luego se cultiva en un medio de cultivo adecuado para que las células se reproduzcan a un cierto coeficiente para la identificación celular.

Pasos experimentales:

I. se extrajeron ratas macho de SD de 7 - 10 días, se dislocaron las Vértebras cervicales y se remojaron en etanol al 75% para desinfectar durante 3 - 5 minutos.

2. en la Mesa de trabajo súper limpia, la cabeza rota de la rata se colocó en una placa de Petri de vidrio, se abrió la cavidad craneal y se extrajo todo el cerebro, se colocó en una placa de Petri de vidrio PBS con preconfriamiento para eliminar el cerebelo y el cerebro intermedio.

3. rodar lentamente el hemisferio cerebral sobre el papel de filtro seco para eliminar los grandes vasos sanguíneos de las meninges y las meninges, y luego colocarlo en una nueva placa de Petri de vidrio PBS con preconfriamiento.

4. eliminar la materia blanca del cerebro, los grandes vasos sanguíneos residuales y las meninges blandas con pinzas anatómicas finas y conservar la corteza cerebral.

V. la corteza cerebral se colocó en el dmem, se cortó en aproximadamente 1 mm3, se colocó en un tubo centrífuga de 50 ml, se agregó una mezcla de enzima I (0,05 - 0,1% colagenasa tipo ii, 0025 - 0,05% colagenasa tipo iv, 200 - 400u dnasei), y se digirió en un baño de agua a 37 ° C después de la mezcla durante 1 - 1,5h.

6. centrifugar 1.000 × G a temperatura ambiente durante 8 minutos y eliminar el líquido sobrenadante.

7. añadir una suspensión pesada de BSA del 20% a la precipitación, mezclar completamente, 1.000 × g, 20 minutos, centrifugar a 4 ° c, ir al líquido superior.

8. añadir 4 ml de enzima mixta II (0,05 - 0,1% colagenasa / enzima dispersa, 0,05 - 0,1% colagenasa tipo i, 100 - 300u dnasai) a la precipitación, mezclar bien, digerir en baño de agua a 37 ° C durante 0,5 - 1h, centrifugar 700 × G a temperatura ambiente durante 6 minutos, eliminar el líquido claro.

9. añadir 2 ml de líquido de cultivo dmem a la precipitación para suspender y mezclar bien, extender sobre 12ml 50% percoll (25.000 × g, 60 min, 4 ° c) que forma un gradiente continuo a través de la centrifugación, 1000 × g, 4 ° C centrifugación durante 10 min.

10. la capa blanca y amarilla por encima de la capa de glóbulos rojos cerca de la parte inferior es el segmento microvascular purificado. después de la inhalación, el dmem se enjuaga dos veces (centrifugación 1000 × rpm, 6 minutos, temperatura ambiente) y se va al líquido sobrenadante.

Añadir el medio de cultivo dmem (20% fbs, 4ug / ml de vitamina) en suspensión pesada, inocularlo en una placa de Petri celular preparada durante la noche por incubación a 37 ° C de suero de rata que contiene 5%, colocarlo en una incubadora de 37 ° C y 5% de CO2 durante 24 horas para reemplazar el medio mixto sin vitamina, y luego cambiar el Medio al día siguiente.

Precauciones:

1. el cultivo se puede conservar durante 3 - 6 meses a 4 ° c.

2. durante el cultivo celular, preste atención a mantener la operación estéril.

3. durante el cultivo de paso, el tiempo de digestión de la enzima Yi no debe ser demasiado largo, de lo contrario afectará la adhesión celular a la pared y su estado de crecimiento.

4. se recomienda que los clientes tomen varias fotos celulares de cada múltiplo los primeros tres días después de recibir la célula para registrar el Estado de la célula y facilitar la comunicación con el Departamento técnico; Debido al transporte, las células sensibles individuales experimentarán inestabilidad, por favor póngase en contacto con nosotros a tiempo para informarnos detalladamente de la situación específica de las células, para que nuestros técnicos puedan rastrear, visitar de nuevo hasta que se resuelva el problema.

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