Kit Elisa de factor de crecimiento fibroblástico bovino 2 (fgf - 2)

Kit Elisa de factor de crecimiento fibroblástico bovino 2 (fgf - 2)

Condiciones de conservación y período de validez

1. conservación del kit: 2 - 8 ° c.

2. validez: 6 meses

Principios experimentales

Este Kit utiliza el método de sándwich de doble anticuerpo para determinar los niveles de factor de crecimiento de fibrocitos bovinos 2 (fgf - 2) en las muestras. El anticuerpo del factor de crecimiento fibroblástico bovino 2 (fgf - 2) purificado se envuelve en microporos para hacer anticuerpos sólidos, se añade FGF - 2 a los microporos del Anticuerpo monoclonal encapsulado a su vez, y luego se une al anticuerpo FGF - 2 etiquetado por HRP para formar un complejo de anticuerpos - antígenos - anticuerpos estándar enzimáticos, y se añade un sustrato tmb para colorear después de un lavado a fondo profundo. El tmb se convierte en azul catalizado por la enzima HRP y en amarillo final bajo la acción del ácido. La profundidad del color se relacionó positivamente con el factor de crecimiento fibroblástico 2 (fgf - 2) en la muestra. La Absorbancia (valor de od) se determinó a una longitud de onda de 450 nm con un medidor de estándar enzimático y la concentración de factor de crecimiento fibroblástico bovino 2 (fgf - 2) en la muestra se calculó a través de la curva estándar.

Composición del kit

130 veces detergente concentrado20ml × 1 vial7Líquido de terminación6 ML × 1 vial

2Reactivos estándar enzimáticos6 ML × 1 vial8Estándar (3200pg / ml)0,5 ML × 1 vial

3Placa de cubierta de etiqueta enzimática12 agujeros x 8 artículos9Diluyente estándar1,5 ML × 1 vial

4Diluyente de muestra6 ML × 1 vial10Manual de instrucciones1 copia

5Agente de color a líquido6 ML × 1 vial11Película de sellado2 hojas

6Agente de color B líquido6 ML × 1 / botella12Bolsa sellada1

Pasos de operación

1.Dilución del estándar: este Kit proporciona un estándar original, y el usuario puede diluirlo en un tubo de ensayo pequeño de acuerdo con el siguiente gráfico.

1600pg/mlNorma No. 5150 μl de estándar original se añade 150 μl de diluyente de estándar

800 pg / mlNorma No. 4150 μl de la norma 5 se añade 150 μl de dilución de la norma

400 pg / mlNorma No. 3150 μl de la norma 4 se añade 150 μl de dilución de la norma

200 pg / mlNorma No. 2150 μl de la norma 3 se añade 150 μl de dilución de la norma

100 pg / mlNorma No. 1150 μl de la norma 2 se añade 150 μl de dilución de la norma

2.Añadir muestra: se establecen agujeros en blanco (los agujeros de control en blanco no agregan muestras y reactivos estándar enzimáticos, y el resto de los pasos funcionan de la misma manera), agujeros estándar y agujeros de muestra a medir. Añadir con precisión 50 μl de muestra al estándar en la placa de cubierta del paquete estándar enzimático, primero añadir 40 μl de dilución de muestra al agujero de la muestra a medir, y luego agregar 10 μl de muestra a medir (la dilución final de la muestra es 5 veces). Añadir la muestra a la parte inferior del agujero de la placa estándar de la enzima, tratar de no tocar la pared del agujero, sacudir suavemente y mezclar bien.

3.Wen yu: sellar la placa con película de sellado y colocarla a 37 ° C durante 30 minutos.

4.Distribución de líquidos: diluir 30 veces el detergente concentrado con agua destilada 30 veces y reservarlo

5.Lavado: quitar cuidadosamente la película de sellado, descartar el líquido, secar, llenar cada agujero con líquido de lavado, Dejar reposar durante 30 segundos y descartarlo, repetir esto 5 veces, palmaditas secas.

6.Adición de enzima: añadir 50 μl de reactivo estándar de enzima a cada agujero, excepto el agujero en blanco.

7.Wen yu: la operación es la misma que 3.

8.Lavado: operación 5.

9.Color: añadir el agente de color A50 μl por agujero, luego añadir el agente de color b50 μl, sacudir suavemente y mezclar bien, y evitar la luz y el color a 37 ℃ durante 10 minutos.

10.Terminación: 50 μl de líquido de terminación por agujero para detener la reacción (en este momento, el azul se convierte en amarillo).

11.Determinación: la Absorbancia (valor de od) de cada agujero se mide secuencialmente con una longitud de onda de 450 nm ajustada a cero por un agujero en blanco. La determinación debe realizarse dentro de los 15 minutos posteriores a la adición del líquido de terminación.

Cálculo

Tomando la concentración del estándar como Coordenadas horizontales y el valor de od como coordenadas longitudinales, se dibuja la curva estándar en el papel de coordenadas, y la concentración correspondiente se detecta a partir de la curva estándar de acuerdo con el valor de od de la muestra; Multiplicar por el múltiplo de dilución; O calcular la ecuación de regresión lineal de la curva estándar con la concentración del estándar y el valor de od, reemplazar el valor de od de la muestra en la ecuación, calcular la concentración de la muestra y multiplicarlo por el múltiplo de dilución, es decir, la concentración real de la muestra.

Precauciones

1. el kit debe extraerse del ambiente refrigerado y debe equilibrarse a temperatura ambiente durante 15 - 30 minutos antes de que pueda usarse. si el paquete estándar enzimático no se agota después de la apertura de la placa, la placa debe cargarse en una bolsa sellada para su conservación.

2. el detergente concentrado puede tener precipitación cristalina, que se puede calentar y ayudar a la disolución en un baño de agua cuando se diluye, sin afectar el resultado cuando se lava.

3. el muestreador debe utilizarse en cada paso de la muestra y su precisión debe corregirse con frecuencia para evitar errores de prueba. Es mejor controlar el tiempo de muestra a la vez dentro de los 5 minutos, si el número de especímenes es grande, se recomienda usar la pistola de pelotón para agregar muestras.

4. por favor, haga la curva estándar al mismo tiempo que cada determinación, lo mejor es hacer agujeros compuestos. Si el contenido de la sustancia a medir en la muestra es demasiado alto (el valor de od de la muestra es mayor que el valor de od del primer agujero del agujero estándar), primero diluya un cierto múltiplo (n veces) con la dilución de la muestra antes de determinarlo, y finalmente multiplique por el múltiplo de dilución total (× n × 5) al calcular.

5. la película de sellado se limita al uso único para evitar la contaminación cruzada.

6. el sustrato debe conservarse protegido de la luz.

7. siga estrictamente el funcionamiento de las instrucciones, y los resultados de la prueba deben basarse en la lectura del medidor de enzima.

8. todas las muestras, detergentes y diversos residuos deben tratarse como contagios.

9.Kit Elisa de factor de crecimiento fibroblástico bovino 2 (fgf - 2)Los diferentes grupos de números de lote no se pueden mezclar.