Todo en uno RT SuperMix para qPCR 试剂

Condiciones de almacenamiento y transporte

-20℃

Composición del producto

Todo en uno RT SuperMix para qPCR 试剂

Introducción del producto

All - in - One RT supermix para qpcr (con dsdnase) es un kit de síntesis de adnc de cadena única de alta calidad, eficiente, conveniente y menos contaminante, que contiene todos los componentes necesarios para la síntesis de adnc de cadena única, como M - mlv giirireverse transcriptase y su reactor buffer, inhibidor de la enzima arn, dntps, oligo (dt) 20vn y Primers aleatorios, y la reacción se puede iniciar con la adición de una plantilla de ARN y agua. All - in - One RT supermix for qpcr (withdsdnase) como kit de síntesis de adnc de cadena actualizada, puede obtener hasta 12 kb de adnc en 15 minutos, y el producto se puede utilizar en experimentos como qpcr y PCR ordinario. El ARN extraído de tejidos o células a menudo queda contaminado por el ADN genómico, que se amplifica al mismo tiempo que el adnc cuando se realiza una reacción qpcr aguas abajo, si no se realiza un tratamiento de eliminación antes de la transcripción inversa, especialmente cuando el primer está diseñado sobre el mismo exon, lo que afecta la precisión cuantitativa. La dsdnase utilizada en este Kit es capaz de digerir específicamente el ADN de doble cadena o el ADN en la doble cadena híbrida de dnarna, y tiene sensibilidad térmica, que puede inactivarse rápida e irreversiblemente a la temperatura de reacción de transcripción inversa. En comparación con los métodos tradicionales para eliminar la contaminación del ADN genómico por dnase i, dsdnase no necesita agregar EDTA adicional para inactivar, lo que no solo ahorra tiempo experimental, sino que también reduce la inhibición de la respuesta retrotranscripcional. Dependiendo de la gravedad de la contaminación del ADN genómico, se puede seleccionar un método de operación para separar la contaminación del ADN genómico de la transcripción inversa, o para separar la contaminación del ADN genómico de la transcripción inversa en un solo paso.

Modo de empleo

Para muestras de ARN con bajo contenido de ADN genómico (esquema recomendado)

Todo en uno RT SuperMix para qPCR 试剂

① preparar el siguiente sistema de reacción sobre hielo:

Se recomienda el uso de ARN de alta calidad extraído de kits como plantilla.

② succión suave y mezcla bien, salida instantánea;

③ criar a 37 ℃ durante 2 minutos para eliminar la contaminación del ADN genómico;

④ temperatura de 55 ℃ durante 15 minutos;

⑤ después de la reacción, la reacción se termina con una temperatura de 85 ° C durante 2 minutos;

Colocar rápidamente el cDNA obtenido sobre hielo para experimentos posteriores; O conservar inmediatamente a - 20 ° c.

Para muestras de ARN con alto contenido de ADN genómico

1. eliminación de la contaminación del ADN genómico

① preparar el siguiente sistema de reacción sobre hielo:

Se recomienda el uso de ARN extraído del kit como plantilla.

② succión suave y mezcla bien, salida instantánea;

③ criar a 37 ℃ durante 2 minutos para eliminar la contaminación del ADN genómico;

Nota: si la contaminación del ADN genómico en el ARN es grave, el tiempo de incubación a 37 ° C puede alargarse adecuadamente a 5 minutos.

④ incubar a 65 ° C durante 2 minutos para inactivar dsdnase y luego colocarlo sobre Hielo.

2. síntesis de cDNA de primera cadena

① preparar el siguiente sistema de reacción sobre hielo:

② succión suave y mezcla bien, salida instantánea;

③ incubar a 50 ℃ durante 15 minutos;

Nota: si el ARN objetivo no contiene la estructura Poly (a), se puede criar a 25 ° C durante 10 minutos por adelantado.

④ después del final de la reacción, se crió a 85 ° C durante 2 minutos para detener la reacción;

⑤ colocar la solución de cDNA obtenida sobre hielo para experimentos posteriores.

Nota: la solución de cDNA se almacena a - 20 ℃, se recomienda no más de 1 semana; Se puede almacenar durante mucho tiempo a - 80 ℃.

Precauciones

La premezcla ya contiene oligo (dt) 20vn y Primers aleatorios, no solo para arnm eucariota que contiene la estructura Poly (a), sino también para plantillas como ARN procariótico, ARN eucariota y ARNt que no contienen la estructura Poly (a), pero no para plantillas de ARN pequeño como mirna.

Fundada en 2004, azaood es una empresa estadounidense que desarrolla y produce kits de purificación de alta calidad de enzimas, proteínas, ácidos nucleicos y aislamiento celular, suero fetal bovino para aplicaciones de investigación, diagnóstico y biotecnología en Ciencias de la vida; Azood es el principal fabricante certificado por ISO9001 y puede cumplir con desde la investigación hasta el procesamiento biológico por lotes a gran escala y las aplicaciones y requisitos oem.