Columna de inmunoafinidad de aflatoxina M1

Instrucciones de operación de la columna de inmunoafinidad M1 de aflatoxinas (total aflatoxinas)

[resumen]

La aflatoxina, un metabolito secundario producido por hongos como la aflatoxina y la Aspergillus parasitaria, está clasificada como carcinógeno de categoría 1 por la Agencia de investigación del cáncer de la Organización Mundial de la salud y, al mismo tiempo, es una sustancia altamente tóxica que es tóxica * y está ampliamente presente en varios alimentos. El maíz, los cacahuetes, el arroz, el trigo y otros cereales y sus subproductos son las principales fuentes de aflatoxinas, mientras que la aflatoxina B1 producida en los piensos después del metabolismo animal sigue siendo altamente tóxica y cancerígena, y también está ampliamente presente en alimentos como la leche, la sangre y los tejidos. Como uno de los tres principales desencadenantes del cáncer de hígado, la aflatoxina también es la principal causa de cáncer gástrico, cáncer intestinal y otras enfermedades, lo que representa una gran amenaza para la salud humana. Los países del mundo son estrictos con las aflatoxinas en los alimentos y piensos. La detección de aflatoxina M1 en la leche y los productos lácteos se regula en las normas nacionales de Seguridad láctea, que entraron en vigor el 1 de junio de 2010. el principal método de preprocesamiento de muestras utilizado es el método de purificación de columnas de inmunoafinidad.

[ámbito de aplicación y rendimiento]

La forma de prueba del producto de la serie de columnas inmunológicas de micotoxinas de la compañía es una columna de inmunoafinidad de alto rendimiento diseñada para limpiar (purificar) o concentrar muestras antes de realizar el método de clar (cromatografía líquida de alto rendimiento), GC - Ms (espectrómetro de masas de gas), Elisa (determinación de inmunoadsorbentes enzimáticos).

Se utiliza para la detección cualitativa y cuantitativa de aflatoxina M1 en leche, leche en polvo, leche fermentada, queso, crema y otras muestras, así como el tratamiento previo a la muestra.

Capacidad de la columna: ≥ 100 ng

Tasa de recuperación: ≥ 90%

[principio de prueba]

La determinación de este producto se basa en la reacción de anticuerpos antigénicos, los anticuerpos monoclonales de aflatoxina M1 se unen al gel en la columna, la aflatoxina M1 en la muestra se extrae, filtra, diluye y luego el extracto de la muestra pasa lentamente por la columna de inmunoafinidad de aflatoxina m1, en la que la toxina se une al anticuerpo, y luego Se lava la columna de inmunoafinidad para eliminar otras sustancias que no se unen. La aflatoxina M1 se eluye con metanol y luego se inyecta en el instrumento de análisis para la detección.

[composición del embalaje]

Aflatoxina M1 estándar (opcional)

25 / caja, tubo de columna de 3ml / rama

Una descripción del producto

[equipos y reactivos necesarios pero no proporcionados]

Equipo:

¿¿ homogeneizador de alta velocidad o homogeneizador de tejido?

¿¿ la trituradora?

¿¿ medidor de 200 ml / 50 ml?

¿ la balanza: la sensibilidad 0,1g

¿¿ medidor de acidez?

¿¿ embudo de separación de líquidos?

¿¿ micropipeta: 100 ml a 1000 ML en un solo canal?

¿ papel de filtro ranurado (papel de filtro cualitativo o cuantitativo rápido plegable)

¿¿ embudo de 50 ml?

¿¿ evaporador rotativo?

¿¿ tubos de ensayo de vidrio desechables?

¿ marco de operación de flujo de la bomba (incluye bomba de aire, jeringas de vidrio de diferentes volúmenes, etc.)

¿ vasos de precipitados, aforos, botellas cónicas, etc.

Reactivos:

¿ metanol (grado cromatográfico)

¿ nitrilo (grado cromatográfico)

¿¿ éter de petróleo?

¿¿ agua destilada o desionizada?

¿¿ se pesa 2G de la solución (0,5 MOL / l) y se disuelve en 100 ml de agua?

[pasos de procesamiento de muestras]

I) leche

¿ calentar 100 ml de baño de leche a 40 ° c;

¿ 4000r / MIN centrifugado durante 15 minutos, recoger 50 ml de líquido claro para usar

Ii) leche en polvo y alimentos de fórmula infantil en polvo

¿ pesar 10 g de muestras de leche en polvo, añadir 100 ml de agua a 50 ° C en pequeñas cantidades muchas veces y mezclar para que la leche en polvo se disuelva completamente

¿ 6000r / MIN centrifugación durante 15 minutos, recogida de 50 ml de líquido claro para uso

¿ pesar 60 G de muestra mezclada y reducir el pH a 7,4 con una solución * de 0,5 MOL / L en el medidor de acidez;

¿ decirle al homogeneizador 5 minutos a 9.500 RPM con un homogeneizador de alta velocidad

¿ el baño de agua se calienta a 40 oc;

¿ 4000r / MIN centrifugado durante 15 minutos, recoger 50 ml de líquido claro para usar

(4) queso

¿ se pesa que la muestra 5g, cortada finamente y mezclada a través de un tamiz de agujeros redondos de 10 mallas, se coloca en un tubo centrífuga de 50 ml, con 2 ml de agua y 30 ml de metanol;

¿ se utiliza un homogeneizador de alta velocidad para decirle al homogeneizado 5 minutos a 9500r / min;

¿ extracción por ultrasonido durante 30 minutos;

¿ centrifugar a 6000r / MIN durante 15 minutos, recoger el líquido sobrenadante y trasladarlo al embudo de separación de 250 ML.

¿ añadir 30 ml de éter de petróleo (4,3) al embudo de separación y Sacudirlo durante 2 minutos;

Después de la estratificación, la capa inferior se mueve en un vaso de precipitados de 50 ml y se abandona la capa de éter de petróleo.

¿ extracción repetida de éter de petróleo 2 veces;.

¿ trasladar la solución inferior a un matraz de fondo redondo de 100 ml y concentrarla a unos 2 ml por descompresión; ¿ verter la solución concentrada en un tubo centrífuga, lavar El matraz en dos veces con solución de agua de nitrilo (1 + 4) 5 ML y verter el detergente en un tubo centrífuga de 50 ml juntos;

¿ añadir agua para diluir a unos 50 ml, centrifugar a 6000 RPM durante 5 minutos y suministrar el líquido superior para el tratamiento de purificación.

(5) crema

¿ pesar la muestra 5G y colocarla en un vaso de precipitados de 50 ml;

¿ disuelva y mueva 20 ml de éter de petróleo en un matraz cónico con tapón de 250 ML.

¿ añadir 20 ml de agua y 30 ml de metanol, y después de oscilar durante 30 minutos, mover todo el líquido en el embudo de separación;

Después de la estratificación, mueva toda la solución inferior al matraz de fondo redondo de 100 ml, descomprimir y concentrar en Un evaporador rotativo a unos 5 ml, añadir agua y diluirla a unos 50 ml para el tratamiento de purificación.

[pasos de purificación de la columna de afinidad]

¿ conecte la columna de inmunoafinidad bajo una jeringa de vidrio de 50,0 ML. Retire con precisión 50,0 ml de líquido claro e inyecte en una jeringa de vidrio;

¿ conecte la bomba de presión de aire a la jeringa de vidrio y ajuste la presión para que la solución pase lentamente por la columna de inmunoafinidad a una velocidad de flujo de aproximadamente 2 - 3 ml / MIN hasta que 2 - 3 ml de aire pase por la columna;

¿ reemplazar la jeringa de vidrio de 10 ml para conectarse con la columna de afinidad, añadir 10 ml de agua a la jeringa y ajustar la presión para que el agua limpie la columna de afinidad a un flujo de aproximadamente 6 ml / min.

¿ añadir con precisión 4 ml de elución de nitrilo de grado cromatográfico, con un caudal de 1 ml / MIN a 2 ml / min, recoger todo el eluido en un tubo de vidrio para la detección.

[decisión de resultados]

Después de la purificación por columna de inmunoafinidad, el eluyente de cianuro recogido se puede detectar directamente con un fluorometro o un método de clar, o con un TLC o un kit de inmunoanálisis enzimático. El contenido de aflatoxina en los eluidos de 4 ML recogidos es equivalente al contenido de aflatoxina M1 en 50 ml de muestras de leche, muestras de leche fermentada o muestras de leche en polvo 5g, muestras de queso y muestras de crema.

Si se necesitan otros disolventes para la prueba de clar, se puede secar el nitrógeno del eluyente de nitrilo y luego volver a disolverlo.

[precauciones]

La aflatoxina es extremadamente dañina y debe usarse guantes para operar.

¿ es mejor remojar los envases de vidrio usados y la solución de aflatoxina en una concentración del 5% de hipoclorito de sodio durante la noche.

¿ no use columnas de inmunoafinidad con fechas válidas.

[condiciones de almacenamiento y período de conservación]

Condiciones de almacenamiento: la columna de afinidad se conserva a 2 - 8 ° C y no se puede congelar.

Período de conservación: el producto tiene una validez de 12 meses.