Control positivo de la prueba de Citotoxicidad in vitro

cuerpoControl positivo de la prueba de Citotoxicidad extracelularporInstituto de Investigación Hatano (HRI)Investigación y producción，Ampliamente utilizado en experimentos de Citotoxicidad in vitro, puede cumplir con la Farmacopea china.-Métodos de examen de citotoxicidad,norma ISO 10993yYBB 00012003Requisitos de parámetros del método de examen de citotoxicidad.

Control positivo de la prueba de Citotoxicidad in vitroSe utiliza un medio de cultivo convencional para la extracción. El método de extracción es el siguiente: operación aséptica, extracción1 gramoControl positivo de la prueba de Citotoxicidad in vitroColocar en15 mlEn el tubo centrífuga estéril, siga3 ml / gLa proporción de extracción se añade al medio de cultivo del medio de extracción, y la oscilación se coloca horizontalmente.120 rpm，37Extracción en condiciones de ℃.24 horas. mezclar bien al revés después de la inmersión10Dos veces, el extracto se utiliza para la prueba. El medio de cultivo utilizado para la extracción se utilizó como control en blanco. Preste atención a los medios de cultivo preparados en4Almacenamiento en ° C durante no más de dos semanas. Los ensayos de Citotoxicidad in vitro se realizaron conMTTMétodo de detección: tomar en buen estadoL929Las células, la digestión y la centrifugación, se preparan en suspensión celular y se inoculan en96Placa de cultivo de agujeros. Se establecen varios agujeros compuestos en cada grupo, y cada agujero se inocula.100µLSuspensión celular, en posición37℃、5%Dióxido de carbonoCO2Cultivo de incubadora24 horas. abandone el medio de cultivo original y agregue100µLExtracto, líquido de control en blanco, enCO2La incubadora continúa cultivando.24 horasDespués de eso, se observó la morfología celular bajo un microscopio. Descartar el líquido dentro del agujero y añadir por agujero50 µL 1 mg/mlEstérilMTTSolución..MTTusarMEMConfiguración del medio de cultivo, ahora disponible, no disponible para la preparación del medio de cultivo), continuar el cultivo2 horasDesechar el líquido del agujero trasero y añadir100µLAlcohol isopropílico, mezcla oscilante, en570 nmy650nmLa absorción se determina a la longitud de onda y se calcula la tasa de supervivencia celular.

Los ensayos de Citotoxicidad son métodos de cultivo celular in vitro para evaluar la Citotoxicidad potencial de biomateriales y dispositivos médicos o extractos, uno de los indicadores de determinación importantes en el sistema de evaluación biológica de biomateriales y un proyecto en el que los dispositivos médicos y biomateriales de casi diversos usos deben ser probados. Las pruebas de Citotoxicidad pueden probar los efectos de los biomateriales en la función metabólica celular a corto plazo y pueden detectar rápidamente si los materiales tienen Citotoxicidad potencial.

Como medio de detección de la toxicidad de los materiales biológicos, los ensayos de Citotoxicidad tienen las ventajas de simplicidad, alta sensibilidad, bajo costo y ciclo de prueba corto, y se utilizan ampliamente en la detección y evaluación de la biocompatibilidad de los materiales biológicos y los productos de dispositivos médicos. Los métodos de evaluación de la Citotoxicidad de los biomateriales han pasado de observar cambios morfológicos y cuantitativos en las células a evaluar la adhesión, proliferación y metabolismo de las células, utilizando el número de células vivas y la capacidad de proliferación celular como métodos de evaluación para evaluar la biocompatibilidad celular de los biomateriales. Los experimentos específicos incluyen la prueba de ingesta de rojo neutro, la prueba de formación de clones,MTTEnsayos de Citotoxicidad yXTTMétodos como los ensayos de citotoxicidad, en los queMTTyXTTLos métodos de prueba de citotoxicidad, debido a que pueden determinar cuantitativamente la Citotoxicidad de los materiales, son más aceptados y utilizados por todos.

MTTyXTTEl principio de detección de los ensayos de Citotoxicidad es que la Succinato deshidrogenasa en las mitocondrias de las células vivas puede hacer exógenoMTTReducido a armadura cristalina azul - morada insolvente en agua(Formazán)Y se deposita en las células, y las células muertas no tienen esta función. Dimetilsulfóxido(DMSO)O alcohol isopropílico o sulfato de fenazina de metileno(PMS)Puede disolver la cristalización de a en las células y se utiliza un medidor de enzima para570 nmSu valor de absorción de luz se determina en la longitud de onda, y dentro de un cierto rango de número de células, la cantidad de formación de cristalización es proporcional al número de células. Según el valor de absorción medido(OD)valor(...)Para juzgar el número de células vivas,ODCuanto mayor sea el valor, mayor será la actividad celular y menor será la toxicidad. Al calcular la tasa de proliferación celular, se puede evaluar cuantitativamente la Citotoxicidad de los materiales médicos y sus productos. También se puede calcular la supervivencia celular diluyendo las diferentes concentraciones del extractoIC50(Inhibición de la actividad celular50Porcentaje de concentración(...)Evaluar la Citotoxicidad de los biomateriales y sus productos.

Control positivo de la prueba de Citotoxicidad in vitroTiene las características de buena reproducibilidad de lotes, rendimiento estable y especificaciones ricas, que se pueden utilizar como evaluación biológica de dispositivos médicos.-Material ideal para la determinación de la citotoxicidad.