Kit de prueba de Ureasa del suelo (sue)

Ureasa del suelo(sue) caja de pruebas

Detalles del producto:
Importancia de la determinación:

El S - UE es capaz de hidrolizar la urea y producir amoníaco y ácido carbónico. La actividad de la Ureasa del suelo está positivamente relacionada con el número de microorganismos del suelo, el contenido de materia orgánica, el contenido de nitrógeno total y el contenido de nitrógeno disponible. La actividad de la Ureasa del suelo refleja el Estado del nitrógeno del suelo.

Principio de determinación:

Determinación de la urea producida por la Ureasa mediante el método colorimétrico azul de índigoEl NH3-N.

Instrumentos y suministros propios:

Fotómetro visible/ medidor de estándar enzimático, olla de baño de agua, pipeta ajustable, placa de Petri de cuarzo traza / 96, mortero, hielo, tolueno (no se permite mensajería) y agua destilada.
En la muestraExtracción aa:

1. de acuerdo con la masa del tejido (g): el volumen del reactivo (ml) es de 1: 5 a 10 (se recomienda pesar alrededor de 0,1 g de tejido, añadir 1 ml del reactivo 1) para homogeneizar a temperatura ambiente, luego transferirlo al tubo EP de 1,5 ml, cubrirlo bien (para evitar la pérdida de agua) y colocarlo en un baño de agua hirviendo para extraer durante 15 minutos; Después de enfriar el agua del grifo, 8000g, centrifugación a 4 ° C durante 10 minutos, y el líquido sobrenadante se coloca en hielo para su prueba.

2. bacterias o células cultivadas: primero recoger bacterias o células en un tubo centrífuga, centrifugar y luego descartar el sobrenadante; Según el número de bacterias o células (104): el volumen del reactivo (ml) es de 500 a 1000: 1 Proporción (se recomienda que 5 millones de bacterias o células agreguen 1 ml del reactivo 1), el ultrasonido rompe bacterias o células (baño de hielo, 20% o 200w de potencia, ultrasonido 3s, intervalo de 10 s, repetición 30 veces); 8000g， Centrifugar a 4 ° C durante 10 minutos, tomar y limpiar, y colocarlo en hielo para su prueba.

3. suero y otros líquidos: detección directa.

La fórmula de cálculo es la siguiente:

1. cálculo de la vitalidad de la lap sérica (pulpa):

Definición de la unidad: cadaLa P - nitroanilina, que produce 1 nmol por minuto de suero (pulpa) de ml, se define como una unidad de actividad enzimática.

LAP (nmol / MIN / ml) = [△ a × V anti - total ÷ (epsilon × d) × 109] ÷ muestra V ÷ t = 205,8 × △ a

2. cálculo de la vitalidad de la lap en tejidos, bacterias o células:

（1) calculado en función de la concentración de proteínas de la muestra:

Definición de la unidad: cadaLa proteína tisular mg produce 1 nmol de P - nitroanilina por minuto, definida como una unidad de actividad enzimática.

LAP (nmol/min/mg prot) = ΔA×V 反总 ÷(ε×d)×109]÷(V 样 ×Cpr) ÷T=205.8×ΔA÷Cpr

（2) según el peso fresco de la muestra:

Definición de la unidad: cadaEl tejido G produce 1 nmol de P - nitroanilina por minuto, lo que se define como una unidad de actividad enzimática.

LAP (nmol / MIN / g de peso fresco) = [△ a × V anti total ÷ (epsilon × d) × 109] ÷ (w × V muestras ÷ V total) ÷ t = 205,8 × △ a ÷ W

（3) por densidad bacteriana o celular:

Definición de la unidad: cada10.000 bacterias o células producen 1 nmol de P - nitroanilina por minuto, lo que se define como una unidad de actividad enzimática.

LAP (nmol / MIN / 104 cell) = [△ a × V anti total ÷ (epsilon × d) × 109] ÷ (2000 × V muestras ÷ V total) ÷ t = 0103 × △ a

V anti - total: volumen total del sistema de reacción, 2 × 10 - 4 l; epsilon: coeficiente de extinción molecular de P - nitroanilina, 9,72 × 103 L / MOL / cm; D: diámetro de la placa de petri, 1 cm; muestra v: añadir volumen de muestra, 0,05 ml; muestra V total: añadir volumen de extracción, 1 ml; t: tiempo de reacción, 2 min; Cpr: concentración de proteínas de la muestra, mg/mL； W: masa de la muestra, g; 2000: número total de bacterias o células, 20 millones.

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Precauciones:

1. los reactivos 3, 4 y los estándares del kit deben prepararse antes de su uso, y deben conservarse a la luz, conservarse a 4 ° C sin usar y usarse en 3 días.

2. para garantizar la precisión de los resultados experimentales, es necesario tomar 1 - 2 muestras para el experimento previo. si el valor de absorción de luz determinado es demasiado alto (por encima de 2,5), diluirlo con agua destilada antes de determinarlo.

3. la reacción con Ninhidrina no tiene pico de absorción a 570 nm, por lo que el resultado de la determinación a 570 nm no contiene la cantidad de estos dos aminoácidos.

4. el límite de detección es de 100 μmol / L.