Líquido de craqueo de Aladdin Ripa (fuerte) - stock permanente

Aladdin R301899-100ml RIPALíquido de craqueo (fuerte)

Líquido de craqueo de Aladdin Ripa (fuerte) - stock permanente

Número del producto:R301899-100ml

Nombre del producto:RIPALíquido de craqueo (fuerte)

Especificaciones del producto:100 ml

Perfil del producto:

Especificaciones o pureza: sin inhibidores

Nombre en inglés:Solución tamponada de lisis RIPA (fuerte)

Temperatura de almacenamiento:2-8°Calmacenar

Condiciones de transporte: transporte de bolsas de hielo

RIPAEl lisado es un lisado rápido tradicional de tejidos y células, utilizado principalmente para extraer proteínas solubles de tejidos animales y células de mamíferos, y puede usarse para romper células adherentes y suspendidas. De acuerdo con la intensidad de su lisado, se puede dividir en tres categorías: fuerte, medio y débil, y los productos correspondientes se pueden seleccionar de acuerdo con las necesidades experimentales.RIPASolución de craqueo(fuerte(...)Puede extraer eficazmente proteínas nucleares, de membrana celular y de plasma, que se pueden aplicar a la cuantificación de proteínas,Blot Occidental,IPEsperar el análisis de detección.

Los parámetros del producto específico se basan en los parámetros recibidos de las instrucciones del producto.

Líquido de craqueo de Aladdin Ripa (fuerte) - stock permanente

Modo de empleo

(uno(...)Células cultivadas adheridas a la pared

1.Tomar este producto y disolverlo a temperatura ambiente y mezclarlo bien, y añadir inhibidores enzimáticos de acuerdo con los requisitos experimentales.

2.Medio de cultivo para eliminar las células adherentes, conPBS,NSO limpieza con medio de cultivo libre de suero1Dos veces, centrifugación a baja velocidad, abandona la parte superior del líquido y deja la precipitación.

3.según 6 Se agrega cada agujero de la placa del agujero150-.250 μlProporción del lisado que contiene inhibidores enzimáticos, añadir este producto. El pipeta sopla suavemente para que el lisado y las células estén en pleno contacto. Colocar sobre hielo o4℃Lisis, generalmente el lisado actúa sobre las células 1-.3sDentro, las células se dividen. generalmente 6 Se agregan células por agujero en la placa de foramen150 μlEl lisado es suficiente, pero si la densidad celular es muy alta, se puede aumentar adecuadamente la dosis del lisado a 200-.250 μl.

4.10000-.12000g,4℃Centrifugadora 5-.10 minutos(Si no hay centrifugadora de baja temperatura, también se puede centrifugar a temperatura ambiente.(...), recoger la limpieza superior.

5.SeguimientoPágina SDS,Occidental, Inmunoprecipitación y coprecipitación inmune y otras operaciones.

(dos(...)Células cultivadas en suspensión

1.Después de tomar este producto y disolverlo a temperatura ambiente y mezclarlo bien, agregue un inhibidor de la enzima.

2.Suspensión centrífuga de células a baja velocidad, descartar el sobrenadante y recoger la precipitación.

3.Toque ligeramente la célula con los dedos para que se suelte. según 6 Se agregan células por agujero en la placa de foramen150-.250 μlProporción del lisado que contiene inhibidores enzimáticos, añadir este producto. generalmente 6 Se agregan células por agujero en la placa de foramen150 μlEl lisado es suficiente, pero si la densidad celular es muy alta, se puede aumentar adecuadamente la dosis del lisado a 200-.250 μl. utilice los dedos para romper completamente las células, y no debe haber una precipitación celular fina y obvia después de la División completa.

4.10000-.12000g,4℃Centrifugadora5-.10 minutos(Si no hay centrifugadora de baja temperatura, también se puede centrifugar a temperatura ambiente.(...), recoger la limpieza superior.

5.SeguimientoPágina SDS,Occidental, Inmunoprecipitación y coprecipitación inmune y otras operaciones.

(tres(...)Muestra de tejido

1.Después de tomar este producto y disolverlo a temperatura ambiente, agregue un inhibidor de la enzima.

2.GrupoZhiCortar en trozos pequeños, cuanto más pequeños, mejor.

3.Tomar en nitrógeno líquido o congelarlo en un refrigerador a muy baja temperatura30 minutosLos tejidos anteriores se muelen rápidamente con nitrógeno líquido, y el proceso de molienda se controla en la medida de lo posible.1-.2 minutosDentro para reducir la degradación de las proteínas.

4.De acuerdo con cada20 mgAdhesión de la organización 150-.250 μlProporción del lisado, añadir el lisado que contiene el inhibidor de la enzima. Sobre hielo o4℃Craqueo 15-.30 minutos.

5.pasos 3、4 También se puede adoptar el siguiente proceso: de acuerdo con cada20 mgAdhesión de la organización 150-.250 μlLa proporción del lisado se añade al producto que contiene el inhibidor de la enzima. Homogeneizar con un homogeneizador de vidrio o un molino de tejido hasta que se rompa completamente, el proceso se controla en la medida de lo posible. 1-.2 minutosDentro para reducir la degradación de las proteínas.

6.10000-.12000g,4℃Centrifugadora 5-.10 minutos(Si no hay centrifugadora de baja temperatura, también se puede centrifugar a temperatura ambiente.(...), recoger la limpieza superior.

7.SeguimientoPágina,Occidental, Inmunoprecipitación y coprecipitación inmune y otras operaciones.

Precauciones

1.Después de eliminar el medio de cultivo de las células adherentes, si las proteínas en el suero no interfieren, no se puede limpiar.

2.Si la lisis no es suficiente, se puede aumentar adecuadamente la cantidad de lisado, y si se necesitan muestras de proteínas de alta concentración, se puede reducir adecuadamente la cantidad de lisado.

3.Si la cantidad de células es mayor, debe dividirse en 50-.100 Diez mil células/.Tubo centrífuga y luego craqueo. Las células de las masas grandes son más difíciles de romper completamente, mientras que las pequeñas cantidades de células son relativamente más fáciles de romper completamente porque el lisado es fácil de entrar en contacto completo con las células.

4.Si la muestra de tejido en sí es muy pequeña, se puede agregar directamente al craqueo después de un corte adecuado, a través de un fuerte Corte.Vorte×Hacer que la muestra se rompa completamente. Luego, también se extrae el sobrenadante por centrifugación para experimentos posteriores. La ventaja de la craqueo directo es que es más conveniente y no es necesario usar un homogeneizador, la desventaja es que no se rompe lo suficiente como usar un homogeneizador.

5.Es posible que se produzca turbidez a bajas temperaturas, pero37℃El baño de agua promueve su disolución y no afecta el efecto de uso; El tiempo de disolución no es fácil de exceder, evitando la falla de los ingredientes activos.

6.Es normal que a menudo aparezca una pequeña masa de gelatina transparente en los productos de craqueo. El gel transparente contiene el GenomaADNCompuestos como. En ausencia de detección y genomaADNEn el caso de una unión particularmente estrecha de proteínas, el sobrenadante se puede extraer directamente por centrifugación para experimentos posteriores; Si es necesario detectar proteínas que se unen particularmente estrechamente al genoma, el gel transparente se puede romper y dispersar mediante un tratamiento ultrasónico, y luego el sobrenadante se puede extraer por centrifugación para experimentos posteriores.

7.Los pasos operativos para la lisis celular deben colocarse sobre hielo o4℃Adelante.

Alcance del uso

Adecuado para la investigación biológica y médica general

Información sobre pedidos de productos:

R301899-100ml RIPALíquido de craqueo (fuerte) 100 ml