Introducción

La Aconitina en el aconito y el acónito, el estricnina y la estricnina en el estricno son alcaloides altamente tóxicos, y las trazas pueden causar intoxicación grave o incluso la muerte. En la edición de 2020 de la Farmacopea de china, todavía hay casi 60 medicamentos chinos patentados y variedades de hierbas medicinales chinas que utilizan Aconitina y estricnina como sustancias altamente tóxicas estrictamente controladas, y el Ministerio de seguridad pública requiere que ya no se distribuyan las sustancias de control correspondientes [1]. Para garantizar la cientificidad, racionalidad y aplicabilidad de las normas de la farmacopea, es urgente reemplazar los extractos de control de Aconitina y estricnina por alcaloides de doble éster de Aconitina y alcaloides totales de estricnina. Ya en 2016, el Instituto de investigación de verificación de alimentos y medicamentos de China comenzó el trabajo de investigación relacionado [2] [3]; Recientemente, la Comisión Nacional de Farmacopea ha completado la actualización de 57 variedades relacionadas y las ha incluido en la edición de 2025 de la Farmacopea de China [1].

Alcaloide de doble éster de Aconitum

Después de la preparación (remojo, cocción, escaldado de arena, etc.), los alcaloides de doble éster de aconitato (aconitato, subautónomo, subautónomo, etc.) se hidrolizan en la posición C - 8 para producir alcaloides de tipo monoéster de aconitato (como benzoil aconitato, benzoil neoutónomo, benzoil subautónomo, etc.), con baja toxicidad, mientras que los alcaloides de tipo aminado de aconitano (como aconitato, subautónomo, subautónomo, etc.).[4]Como se muestra en la figura 1.

Los alcaloides de doble éster de aconitato contenidos en el acónito de Sichuan (acónito de sichuan), el acónito de hierba (acónito de hierba) y el acónito son principalmente aconitato, subeaconitato, neoaconitato, etc., mientras que los alcaloides de doble éster de aconitato contenidos en el acónito de hierba amarilla (acónito de hierba amarilla) son principalmente aconitato de yunnan, acónito de hierba, etc.[5]En la actualidad, el contenido de extractos de control de alcaloides de doble éster de Aconitina vendidos en el mercado se mide en tres tipos: neoaconitina, subeaconitina y aconitina, y la determinación de alcaloides de doble éster de Aconitina en algunas variedades de Medicina China patentada se ve más gravemente perturbada por el sustrato de la muestra. El laboratorio semerfei ha establecido un nuevo método de determinación que cubre cinco alcaloides de doble éster de aconitato y tres alcaloides de monoéster de aconitato para facilitar a las empresas farmacéuticas un control más completo de la calidad de los preparados en cuestión.

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Figura 1 8 tipos de estructuras de Aconitina

Mapa de características de los apéndices vivos solución de aplicación completa de semerfei

01

Preparación de la solución de referencia y la solución de prueba

Las ocho soluciones de referencia de Aconitina se compran a proveedores de productos estándar, y los dos lotes de soluciones de productos de prueba de accesorios de jiangyousheng son proporcionados por los clientes.

Preparación de la solución de referencia:Se toma la solución adecuada de la sustancia de referencia de la nueva Aconitina de benzoilo, la sustancia de referencia de la nueva Aconitina de benzoilo, la sustancia de referencia de la nueva Aconitina de benzoilo, la sustancia de referencia de la nueva aconitina, la sustancia de referencia de la segunda aconitina, la sustancia de referencia de la Aconitina de yunnan, la sustancia de referencia de la Aconitina a de tallo grueso (caowujia), se pesa con precisión y se agrega etilnitrilo para hacer una solución mixta que contiene 10 μg cada 1 ml, que se obtiene.

Preparación de la solución de prueba:Tomar aproximadamente 1,0 g de polvo de este producto, pesarlo con precisión, colocarlo en un tubo de ensayo de vidrio con tapón de 25 ml, añadir con precisión 10 ml de solución mixta de alcohol propanol - acetato de dietilo (1: 1) (0,6 ml de solución de prueba de amoníaco), taponar, extraer por ultrasonido en baño de agua helada durante 30 minutos y precipitarse estáticamente a temperatura ambiente. Extraer 5 ml de líquido sobrenadante a un tubo centrífuga de 15 ml, centrifugar 8000 RPM a 20 ° C durante 5 minutos, tomar con precisión 4,00 ML a un tubo de soplado de nitrógeno limpio a 30 ° C de nitrógeno en baño de agua y soplar a casi seco, añadir con precisión 2,00 ml de nitrilo y resolverlo (vórtice / ultrasonido / vórtice), centrifugar 5000 RPM a 20 ° C durante 3 minutos, y la solución compuesta pasa por la película filtrante hidrofílica de PTFE de 0,2 micras (p / n: 42213 - npl), y el filtrado debe ser probado en la máquina.

Método de determinación:La solución de referencia y la solución de prueba se absorben con precisión en 5 μl cada una, se inyecta en un Cromatógrafo Líquido y se determina.

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02

Configuración del instrumento y condiciones cromatográficas

Thermo Scientific ™ Vanquish Core ™ Sistema de Cromatografía líquida de alto rendimiento, configuración: bomba quarternery Pump c (vc - P20 - a), muestreador automático Split sampler CT (vc - A12 - a), caja de temperatura de columna columna columna columna compartment c (vc - C10 - a), detector de matriz Diode CG (vc - D11 - a), procesamiento de datos chromelon ™ 7,3

色谱柱： Acclaim WCX-1 de modo mixto, 3 μm, 3,0 x 150 mm (P/N: 070092)

Fase móvil: a: agua ultrapura b: 100 mm (nh4(H)2PO4(el ácido fosfórico ajusta el pH a 3,0) c: Nitrilo

Caudal: 0,5 ml / min

Procedimiento de elución de gradiente: para más detalles, consulte la solución de aplicación del Anexo

Cantidad de muestra: 5 μl

Temperatura de la columna: 40 ℃.

Detector: dad, longitud de onda de adquisición: 230 / 260 nm; frecuencia de adquisición: 5 hz; adquisición espectral: 190 - 400 nm

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03

Mapas espectrales y datos

3.1

Espectro de la solución de referencia

Figura 2 mapa y datos del espectro de separación de soluciones de 8 tipos de referencia mixta de Aconitina (10,0 μg / ml) (haga clic para ver la imagen grande)

Figura 3 mapa del espectro de localización de ocho soluciones de referencia única de Aconitina (10,0 μg / ml) (haga clic para ver la imagen grande)

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Se puede lograr una separación efectiva de ocho tipos de Aconitina en la solución de prueba, de los cuales cinco tipos de alcaloides de doble éster de Aconitina tienen una buena forma de pico, una excelente eficiencia de columna, una precisión y cuantificación; La base de benzoilo - Aconitina y la base de benzoilo - Aconitina de tres alcaloides monoéster de Aconitina no pudieron separarse de la línea de base y se pudieron utilizar para el análisis cualitativo preliminar.

3.2

Espectro de la solución de prueba

Figura 4 espectro y datos de separación de soluciones de los accesorios crudos (s1)

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Figura 5 espectro y datos de separación de soluciones de los accesorios crudos (s2)

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Se detectaron aconitina, Aconitina y neoaconitina en los dos lotes de accesorios secundarios, y el pico objetivo pudo lograr la separación Basal y la cuantificación cuasi - definitiva, mientras que no se detectaron Aconitina ni caowujia.

3.3

Mapa de características de los apéndices vivos

Figura 6 diagrama espectral de los picos adyacentes de la nueva Aconitina en la solución de prueba de los accesorios crudos

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A 230 nm, se pueden separar dos picos desconocidos antes y después del pico objetivo de la nueva Aconitina en la solución de prueba de los accesorios crudos. a través de la identificación del espectro, se sospecha que es otro tipo de alcaloide diéster de aconitina, y se pueden llevar a cabo estudios posteriores correspondientes.

Figura 7 mapa espectral de superposición de seis soluciones de referencia de Aconitina y soluciones de prueba de accesorios crudos (haga clic para ver la imagen grande)

En el espectro de superposición de muestras continuas de la solución de prueba de los apéndices crudos, el tiempo de retención y el área de pico de cada pico objetivo son estables, RSD es inferior al 1%, y la reproducibilidad y estabilidad del método son excelentes, que se puede utilizar para establecer el mapa característico de alcaloides de doble éster de aconito en los Apéndices crudos.

04

Resultados y discusión

1)Este ensayo utiliza una columna de modo mixto aclaim mixed - mode wcx - 1 (fase inversa + intercambio de iones débiles) y una fase móvil sin reactivos de par de iones o tetrahidrofurano, junto con el sistema de Cromatografía líquida de alto rendimiento Vanquish core, que puede separar eficazmente ocho tipos de aconitina, cinco de los cuales tienen una buena forma de pico bioalcalino de doble éster de aconitina, una excelente eficiencia de columna, precisión, certeza y cuantificación, y tres alcaloides de monoéster de Aconitina se pueden utilizar para análisis cualitativos preliminares.

2)Para optimizar las condiciones cromatográficas para la separación de cinco alcaloides de doble éster de aconitato en la solución de prueba, se separaron dos picos desconocidos antes y después del pico de aconitato, y se identificaron otros alcaloides sospechosos de doble éster de aconitato a través de mapas espectrales, mientras que ni la aconitaína ni la caowujia fueron detectadas.

3)Este método no solo es adecuado para el monitoreo del grado de degradación de Aconitina en el proceso de procesamiento y procesamiento de acónito crudo, sino que también se puede utilizar para rastrear el origen de los materiales medicinales auténticos de acónito de Sichuan y acónito de yunnan.

5. referencias

[1] Li hao, Shen mingrui, Zhang peng, etc. introducción a las principales actualizaciones de la edición de 2025 de la Farmacopea China [j].normas farmacéuticas chinas, 2025,26 (01): 17 - 22.doi: 10.19778 / j.chp.2025.01.003.

[2] Zhu yue, Wang ruizhong, Zhang yumei, etc. Preparación y aplicación de extractos de control de alcaloides de aconitato de doble éster [j] normas farmacéuticas chinas, 2016,17 (04): 252 - 257.doi: 10.19778 / j.chp.2016.04.003.

[3] Faye wong, Wu shouhai, Zhang yumei, etc. Estudio del extracto de control de estricnia y su aplicación en el control de calidad de los materiales medicinales y preparaciones compuestas de estricnia [j]. Journal of Pharmaceutical analysis, 2018,38 (07): 1226 - 1230.doi: 10.16155 / j.0254 - 1793.2018.07.18.

[4] Hu jiahao, Li wenru, Shi qingxin, etc. Avances en la investigación de la composición química y el proceso de procesamiento de acónito [j] revista china de medicina tradicional china, 2025,50 (06): 1458 - 1470.doi: 10.19540 / j.cnki.cjcmm.20241214.201.

[5] Xu yi, Qin bo, Cao hongyun, etc. Determinación simultánea del contenido de dianwujina y caowujina en huangcaowu por el método de clar [j] Yunnan Journal of Chinese medicine, 2017,38 (09): 70 - 72. doi: 10.16254 / j.cnki.53 - 1120 / r.2017.09.033.

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