Cuentas magnéticas quimioluminiscentesDurante el proceso de detección, es fácil verse afectado por el rendimiento de las cuentas magnéticas, las condiciones de funcionamiento y el sistema de reacción, y hay problemas como la aglomeración de cuentas magnéticas, la señal luminosa anormal y la mala repetibilidad de la detección. Para los problemas centrales, se puede resolver de manera eficiente optimizando la selección de materiales, ajustando los parámetros de operación y estandarizando los métodos de almacenamiento.

1. pregunta 1: las cuentas magnéticas se reúnen y no se pueden dispersar uniformemente

La aglomeración de cuentas magnéticas puede reducir el área de contacto de la reacción y afectar directamente la sensibilidad de la detección.

- * causas comunes * *

1. la densidad de los grupos modificados en la superficie de las cuentas magnéticas (como el Grupo carboxílico y el Grupo aminoácidos) es insuficiente y el rechazo mutuo es débil.

2. la volatilización de la solución de conservación o los cambios en la concentración de iones destruyen la estabilidad del coloide.

3. la congelación y el deshielo repetidos durante la operación conducen a la aglomeración secundaria de cuentas magnéticas.

- * solución * *

1. elija perlas magnéticas de alta densidad modificada (como la densidad del Grupo carboxílico ≥ 20 μmol / g) para garantizar la dispersión.

2. sellar y evitar la luz durante la conservación, añadir un líquido de conservación especial (como PBS que contiene Azida de sodio al 0,02%) para evitar fluctuaciones de concentración.

3. después del deshielo, mezcle completamente con un Oscilador de vórtice (1000 - 1500rpm, 30 segundos) y prohíba los choques violentos.

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2. pregunta 2: la señal luminosa es débil y el límite inferior de detección no cumple con los estándares.

La intensidad de la señal luminosa determina directamente la sensibilidad de detección, y la señal débil generalmente se asocia con la baja eficiencia de respuesta.

- * causas comunes * *

1. las cuentas magnéticas tienen una baja eficiencia de acoplamiento con anticuerpos / antígenos y sitios de unión insuficientes.

2. la actividad de los sustratos luminosos (como luminol, acridinato) disminuye o la cantidad de adición es insuficiente.

3. la temperatura de reacción se desvía del rango óptimo (generalmente 25 - 37 ° c) y la actividad enzimática se inhibe.

- * solución * *

1. optimizar las condiciones de acoplamiento: ajustar el pH (por ejemplo, pH = 5,0 - 6,0 durante el acoplamiento de cuentas magnéticas carbonatadas), añadir el activación EDC / NHS y mejorar la eficiencia de acoplamiento a más del 80%.

2. utilice un sustrato luminoso recién preparado para controlar con precisión la cantidad (como 100 μl / agujero) de acuerdo con las instrucciones para evitar la congelación y descongelación repetidas.

3. utilice un Incubador de temperatura constante (+ 0,5 ° C de precisión) para garantizar la estabilidad de la temperatura de reacción y evitar que las fluctuaciones de la temperatura ambiente afecten la actividad enzimática.

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3. pregunta 3: mala repetibilidad de la detección y valor de CVS demasiado alto

La mala repetibilidad (valor de CVS superior al 10%) puede hacer que los resultados no sean confiables, en su mayoría relacionados con la coherencia operativa o del sistema.

- * causas comunes * *

1. el error de volumen es grande al agregar muestras de cuentas magnéticas (por ejemplo, la precisión del pipeta es insuficiente).

2. el tiempo de separación magnética es inconsistente, lo que resulta en diferentes residuos de cuentas magnéticas sin unión.

3. los pasos de lavado no están estandarizados y las impurezas residuales interfieren con la reacción luminosa.

- * solución * *

1. utilice una pipeta de alta precisión (como 10 - 1000 μl, error ≤ 1%) y calibrar antes de agregar la muestra para garantizar que el volumen de cada agujero sea consistente.

2. establezca el tiempo de separación magnética fija (por ejemplo, 5 minutos) y use un soporte magnético con función de tiempo para evitar fluctuaciones de tiempo.

3. al lavarse, se utiliza el paso de "inmersión - secado" (como agregar 200 μl de líquido de lavado por agujero, remojar durante 30 segundos y secar), repetir 3 veces para garantizar que el líquido residual sea inferior a 5 μl.

4. pregunta 4: las cuentas magnéticas se depositan rápidamente y se estratifican durante la reacción

La precipitación excesiva de las cuentas magnéticas puede causar una respuesta inadecuada, especialmente en la etapa de incubación, lo que afecta la uniformidad de los resultados.

- * causas comunes * *

1. el tamaño de las partículas de las cuentas magnéticas es demasiado grande (por ejemplo, > 500nm), y la acción de gravedad es mayor que la fuerza de dispersión.

2. la viscosidad del sistema de reacción es baja y no puede soportar la suspensión de partículas magnéticas.

- * solución * *

1. elija perlas magnéticas adaptadas al tamaño de las partículas (las pruebas de rutina recomiendan 100 - 300nm) para equilibrar la dispersión y la velocidad de respuesta magnética.

2. añadir una pequeña cantidad de espesante (como 0,1% bsa) al líquido de reacción para mejorar la viscosidad del sistema y ralentizar la velocidad de asentamiento; Mezclar suavemente cada 10 minutos durante la incubación (500rpm, 10 segundos).