La preparación de columnas cromatográficas por Cromatografía líquida de alto rendimiento es una herramienta importante para la separación y purificación de compuestos en la tecnología de Cromatografía líquida de alto rendimiento.

- tubos cilíndricos: generalmente de acero inoxidable o vidrio, con buena resistencia a la presión y estabilidad química. El diámetro interior del tubo determina el volumen de llenado y la escala de separación de la columna, y el diámetro interior de la columna generalmente preparada está dentro del rango de 50 - 200 mm.

Rellenos: es la parte central de la columna cromatográfica, y los rellenos comunes son silicona, alúmina, microesferas de polímeros orgánicos, etc. El relleno de la matriz de silicona tiene una buena resistencia mecánica y estabilidad química, y la separación de diferentes compuestos polares se puede lograr mediante la Unión de diferentes grupos funcionales (como c18, c8, c4, etc.).

- placa de tamiz: situada en ambos extremos del tubo de la columna para apoyar el relleno y evitar fugas del relleno, garantizando al mismo tiempo que la fase móvil pueda pasar uniformemente por la columna.

Pasos de uso para la preparación de columnas cromatográficas por clar:

1. preparativos

- Controles de seguridad: garantizar la seguridad de las zonas de laboratorio, llevar equipo de protección personal, como ropa de laboratorio, guantes y gafas protectoras.

Inspección instrumental: comprobar el Estado del equipo de clar para garantizar el funcionamiento normal de columnas, detectores, bombas y otros componentes. Abra el sistema de clar y establezca la temperatura adecuada, la velocidad de flujo y otros parámetros para que el sistema alcance un Estado estable.

Preparación de la fase móvil: preparar la fase móvil de acuerdo con los requisitos experimentales, filtrar el disolvente o la fase móvil con un papel filtrante de 0,2 micras y realizar una desgasificación ultrasónica para eliminar las burbujas e impurezas en ella.

Preparación de la muestra: disolver y diluir la muestra a medir con un disolvente adecuado a la concentración adecuada, también filtrando con una membrana filtrante de 0,2 micras para garantizar que la solución de la muestra se aclare sin impurezas.

2. instalación de columnas cromatográficas: instale las columnas cromatográficas preparadas en el sistema clar, preste atención a la conexión estrecha para evitar fugas. Antes de la instalación, se puede comprobar si la apariencia de la columna cromatográfica está dañada, etc.

3. equilibrio del sistema: lavar la columna con fase móvil, generalmente durante 15 - 30 minutos, hasta que la línea de base sea estable, para garantizar que la columna esté llena de fase móvil y alcance el Estado de equilibrio.

4. determinación de la inyección de muestra: elija el método de inyección adecuado y la cantidad de inyección de muestra e inyecte la muestra en el sistema de clar. Comenzó a recopilar datos para registrar el tiempo de retención, el ancho del pico y la altura del pico del espectro.

5. procesamiento y análisis de datos: de acuerdo con los datos registrados, se calculan los parámetros relevantes de la columna, como el número teórico de placas de columna, el factor de asimetría, el grado de separación, etc., para evaluar el rendimiento de la columna. Los métodos comunes de procesamiento de datos incluyen la determinación del área del pico, la determinación de la altura del pico, el análisis cuantitativo y el análisis cualitativo.

6. columna de limpieza y conservación: después de completar la determinación, limpie la columna con un disolvente adecuado para eliminar las muestras residuales y las fases móviles. Para las columnas de fase inversa, generalmente se enjuagan primero con metanol o nitrilo y luego con agua pura; Para las columnas de fase positiva, se pueden lavar con disolventes orgánicos como el n - hexano. Después de la limpieza, la columna se conserva adecuadamente para evitar el secado y la contaminación.