I. errores relacionados con el equipo de síntesis genética de 48 canales:

1. error del sistema de adición de muestras

Fluctuación de la precisión de la pipeta:

Las bombas o válvulas de pipeta de diferentes canales pueden variar, lo que resulta en cantidades inconsistentes de muestra (como la distribución desigual de monómeros de base).

Después de un uso prolongado, los componentes de la pipeta se desgastan o se bloquean, lo que resulta en una desviación de volumen.

Contaminación cruzada:

La falta de estanqueidad entre los canales conduce a la difusión de residuos líquidos o volátiles, causando contaminación de bases o enzimas.

2. error de control de temperatura

Diferencia de temperatura del sistema de reacción:

La uniformidad de la temperatura del módulo de calentamiento de 48 canales es insuficiente, y la temperatura de algunos agujeros es alta o baja, lo que afecta la eficiencia de extensión.

Las tasas de calentamiento / enfriamiento son inconsistentes, lo que resulta en reacciones PCR o de conexión no sincronizadas.

La presión de la tapa térmica es desigual:

La tapa térmica no está en estrecho contacto con la placa de reacción, y algunos agujeros se evaporan gravemente, lo que cambia el volumen del sistema de reacción.

3. error del sistema de detección

Desviación de la detección de fluorescencia / absorbancia:

Las diferencias en la sensibilidad de los detectores ópticos de diferentes canales conducen a errores en el juicio de la eficiencia de la síntesis.

La interferencia del ruido de fondo (como el endurecimiento fluorescente o la dispersión) afecta la precisión del monitoreo en tiempo real.

4. averías mecánicas

Separación de cuentas magnéticas o mezcla desigual de oscilaciones:

Las diferencias en la intensidad del campo magnético del módulo magnético hacen que la eficiencia de recuperación de las cuentas magnéticas sea diferente, lo que afecta el efecto de lavado o purificación.

La frecuencia de oscilación o el tiempo son inconsistentes, lo que resulta en una mezcla insuficiente de reacciones.

2. error de operación y proceso del sintético genético de 48 canales:

1. configuración incorrecta del programa

Desviación de entrada del parámetro:

El ciclo sintético (como el tiempo de extensión y la temperatura de desnaturalización) no se establece adecuadamente, lo que resulta en un aumento de la longitud del fragmento o la tasa de desajuste.

Los parámetros no se ajustan en función del tipo de plantilla (como el alto contenido de GC y la estructura secundaria).

Vulnerabilidades de guiones automatizados:

Los procedimientos de varios pasos (como corte, conexión, purificación) no están bien conectados, lo que resulta en una interrupción de la reacción o un tratamiento excesivo.

2. problemas de carga de muestras

Orden de adición de muestra o ubicación incorrecta:

Al agregar muestras manualmente, no se opera de acuerdo con las especificaciones (si no se cambia la cabeza de la pistola), introduciendo contaminación de ADN exógena.

Las diferencias en la cantidad de material de partida de diferentes canales (como las diferentes concentraciones de primer) conducen a una eficiencia sintética desigual.

3. baja eficiencia de purificación y recuperación

Pérdida de purificación de cuentas magnéticas o membranas de silicona:

La pérdida de adsorción de ADN de fragmentos pequeños y medianos (como oligonucleótidos cortos) durante el proceso de purificación reduce la producción.

No se puede lavar a fondo, y la sal residual o las impurezas inhiben las reacciones posteriores.