Dominar el uso correcto del tubo centrífuga de ultrafiltración es la clave para garantizar el éxito del experimento.

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Fecha:2025-12-01Leer:2

El tubo centrífuga de ultrafiltración es un Consumible de laboratorio que integra la tecnología de centrifugación y separación de membranas, y es ampliamente utilizado en operaciones bioquímicas como concentración de proteínas, desalación, reemplazo de amortiguadores, purificación de ácidos nucleicos y eliminación de moléculas pequeñas. Su núcleo es una membrana de ultrafiltración con un peso molecular interceptado específico incorporado, que impulsa la muestra a través del agujero de la membrana a través de la fuerza centrífuga para lograr una separación eficiente de las moléculas objetivo. Sin embargo, si no se opera adecuadamente, puede causar fácilmente obstrucción de la película, pérdida de muestras, baja tasa de recuperación e incluso ruptura del cuerpo del tubo. Dominar su uso correcto es la clave para garantizar el éxito del experimento.

I. preparación antes de su uso

Selección precisa de películas por peso molecular: las macromoléculas objetivo deben ser 2 - 3 veces mayores que las mwco, y las impurezas de moléculas pequeñas deben ser inferiores a 1 / 2mwco para garantizar una interceptación y transmisión efectivas;

Superficie de la película húmeda (si es necesario): para las películas hidrofóbicas (como pvdf), primero agregue una pequeña cantidad de amortiguador o etanol para humedecer durante 5 minutos, y luego retire por centrifugación para evitar que la resistencia al gas afecte el flujo;

Comprobar la integridad del cuerpo del tubo: confirmar que la película filtrante no está rota y que el anillo de sellado de la tapa del tubo está intacto para evitar fugas centrífugas.

II. especificaciones de carga de muestras

Controlar el volumen de la muestra superior: por lo general, no excede el 75% de la capacidad máxima de la tubería centrífuga (por ejemplo, 15 ml de muestra de tubería ≤ 11 ml), reservando espacio de concentración;

Tratamiento de aclaración previa: las muestras que contengan partículas o fragmentos celulares deben centrifugarse o filtrarse a baja velocidad (por ejemplo, 3000 × g, 5 min) para evitar el bloqueo de los poros de la membrana;

Evitar la aplicación directa de alta viscosidad o alta concentración: se puede diluir adecuadamente para aumentar el flujo inicial.

III. configuración de los parámetros de centrifugación

Con referencia a la velocidad de rotación recomendada por el fabricante: por lo general, 3000 - 5000 × g, está estrictamente prohibido exceso de velocidad (ver el valor máximo RCF marcado en la pared del tubo);

Establecer el momento adecuado: centrifugar por etapas (por ejemplo, 10 - 15 minutos cada vez), observar el volumen del concentrado y evitar la película seca;

Operación a baja temperatura: para las proteínas sensibles al calor, use una centrifugadora congelada a 4 ° C para evitar la desnaturalización.

IV. técnicas de operación de concentración y lavado

Reemplazo de tampón: cuando se concentra a unos 100 - 200 μl, se agrega un nuevo tampón de volumen igual, se mezcla bien y luego se centrifuga, y se puede eliminar más del 95% de las impurezas moleculares pequeñas repitiendo 2 - 3 veces;

Evitar el secado de la película: conservar al menos 50 μl de líquido en el punto final de concentración, y la película seca reducirá irreversiblemente la tasa de recuperación;

Mezclar suavemente: soplar lentamente con un pipeta y no dañar las moléculas grandes con choques violentos.

V. reciclaje y limpieza (si es reutilizable)

La mayoría de los tubos centrífuga de ultrafiltración están diseñados de una sola vez, pero algunos modelos se pueden reutilizar;

Enjuagar con agua desionizada inmediatamente después de su uso y remojarlo con 0,1mnoh o líquido de limpieza especial para eliminar los residuos;

Está estrictamente prohibido esterilizar o secar a alta presión para evitar la deformación de la estructura de la película.

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