Sintético de ADN / ARNEl método de uso (tomando el ADN como ejemplo) cubre muchos enlaces, como la preparación del reactivo, la entrada de secuencia, la configuración de parámetros, la inspección de la columna sintética, la limpieza de tuberías, el monitoreo del proceso sintético y el tratamiento del producto. la siguiente es una introducción detallada:
Preparación del reactivo:
Compruebe cuidadosamente la cantidad de reactivos en todos los frascos de reactivos en el sintético, reemplace los frascos de reactivos si es necesario, y preste especial atención a los disolventes con grandes cantidades como el nitrilo.
Asegúrese de que el Grupo de botellas de reactivos y el Grupo de botellas de base estén bien sellados, mantenga una cierta presión y evite que la entrada de aire externo afecte el efecto sintético.
Entrada de secuencia:
La secuencia de ADN que se sintetizará se puede introducir en el sintético a través de un software de diseño asistido por computadora, teniendo en cuenta factores como la preferencia del codón, la estructura secundaria y los sitios enzimáticos de restricción.
Compruebe si los pasos de síntesis seleccionados son correctos y asegúrese de que el proceso de síntesis se lleve a cabo de acuerdo con el proceso preestablecido.
Configuración de parámetros:
Al seleccionar el método de fin, el estado original del instrumento suele ser trityloffauto, que se convierte en el estado final de trityloonauto si se pretende conectar el oligonucleótido purificado con el Grupo 5 '- dmt.
Bajo el nombre de usuario de cada Monitor de columna, introduzca el nombre de ahorro deseado para facilitar la gestión y el seguimiento posteriores.
Marcar cada botella de recolección con un código en lugar de la secuencia de ADN correspondiente facilita la identificación y clasificación.
Inspección de columnas sintéticas:
Ejecutar el paso startcolumn para comprobar la posición de cada columna, asegurarse de que la columna sintética en el sintético esté en la posición correcta y evitar el fracaso de la síntesis debido a la desviación de posición.
Comprobar si los residuos de disolvente (botellas de residuos líquidos) conectados al sintético están llenos para evitar que el líquido se desborde debido al exceso de botellas de residuos líquidos y afecte el entorno sintético.
Limpieza de tuberías:
Si el recolector de segmentos se utiliza para recoger los flujos de cada paso de desprotección dmt, asegúrese de que el tubo de ensayo esté completamente limpio y abra el recolector de segmentos para asegurarse de que la línea de residuos líquidos DMT conduce al recolector de segmentos.
Iniciar el ciclo, ejecutar el programa de inicio para limpiar la línea del reactivo, eliminar el reactivo original y evitar que el reactivo antiguo interfiera con la nueva reacción sintética.
Monitoreo del proceso sintético:
Durante el proceso de síntesis, la conductividad total de cada catión DMT liberado en el ciclo de síntesis de ADN se puede determinar a través de una piscina de flujo de conducción para monitorear el progreso de la reacción de síntesis.
Compruebe regularmente el Estado de funcionamiento del sintético para asegurarse de que los parámetros (como temperatura, presión, tiempo, etc.) estén dentro del rango normal.
Sintético de ADN / ARNFinalización de la síntesis y tratamiento del producto:
Después de la síntesis, se extrae el vector para cortar y desproteger. por lo general, los fragmentos de ADN dentro de 40 BP tardan al menos 2 horas, y cuanto más larga sea la cadena, más tiempo tomará.
Eliminar fragmentos cortos e iones de sal mediante métodos de purificación adecuados (como purificación opc, purificación de página, purificación de desalación, purificación de clar, etc.) y mejorar la pureza del producto.
El ADN purificado fue secuenciado para verificar que su secuencia coincidía con las expectativas.