1、Uso:

La columna de inmunoafinidad puede absorber selectivamente la Ocratoxina a en el líquido de muestra de hierbas medicinales chinas, desempeñando así un papel de purificación muy específico en la muestra, y el líquido de muestra purificado a través de la columna se puede utilizar directamente para el análisis de clar o la detección con LC - MS / MS después de la resolución por soplado de nitrógeno.

2、Visión general:

La Ocratoxina a (ohratoxina, ota), un metabolito tóxico producido por ciertas cepas de los géneros Aspergillus y penicillium, es una micotoxina con nefrotoxina fuerte y hepatotoxicidad y tiene efectos teratogénicos, mutágenos y cancerígenos.

3、Principio:

La base de la determinación es la reacción de antígenos y anticuerpos, que se unen al cuerpo de la columna. después de la extracción y filtración de la muestra, pasa lentamente por la columna de inmunoafinidad Ocratoxina A. la LPS de la columna de inmunoafinidad se une al anticuerpo, y luego se lava la columna de inmunoafinidad para eliminar otras sustancias no relacionadas que No se unen. La Ocratoxina a se eluye con metanol y luego se inyecta en el instrumento de análisis para la detección.

4、Composición del embalaje:

Cada caja contiene una columna de inmunoafinidad de Ocratoxina a de varias especificaciones y un prospecto.

5、Material necesario pero no incluido en la caja:

5.1 equipos y consumibles

--- HPLC / LC-MS / MS

- - soporte de operación de control de gas

- - bomba de aire

- - balanza

- - homogeneizador de alta velocidad (velocidad ≥ 10000 / min) o sacudidor

- - trituradora

- - tamiz de muestreo

- - cilindro medidor: 100 ml / 10 ml

- - jeringa: 20 ml

- - Pipeta o pipeta: 1 ml

- - taza homogénea (o botella en forma de cono con tapón de 250 ml)

- - botella de muestra

- - botella medida

5.2 reactivos

- - metanol (ch₃Oh): pureza analítica para el proceso de extracción / pureza cromatográfica para el proceso de elución

- - cloruro de sodio (nacl): análisis puro

- - ácido clorhídrico (hcl): análisis puro

- - hidróxido de sodio (naoh): puro analítico

- - fosfato disódico de hidrógeno (nah)₂PO₄): análisis puro

- - fosfato de dihidrógeno de potasio (kh₂PO₄): análisis puro

- - kcl: análisis puro

- - Twain - 20 (c₅₈H₁₁₄El O₂₆): análisis puro

- - agua (h₂O): agua destilada o desionización

6、Precauciones:

- - antes de su uso, la columna de inmunoafinidad debe volver a la temperatura ambiente (22 a 25 grados celsius).

- - la columna de afinidad se almacena a 2 a 8 ° C y no se puede congelar.

- - Use la columna de inmunoafinidad dentro de la fecha efectiva.

- - es necesario vaciar el líquido en la columna de afinidad antes de realizar la operación de muestra.

- - volumen de muestreo: el volumen de muestreo se puede aumentar o disminuir adecuadamente según sea necesario, prestando atención a que el volumen de extracción debe cambiarse en consecuencia.

- - capacidad de la columna: la capacidad de la columna es de 200 ng. cuando el contenido de la toxina a detectar en la muestra se divide por un múltiplo de dilución superior a la capacidad de la columna, es necesario reducir adecuadamente el volumen de la solución de muestra y volver a probar.

- - ph: el pH de la solución de muestra superior de la columna de afinidad debe estar entre 6 y 8, y si se desvía de este rango, es necesario ajustar el pH con ácido clorhídrico o hidróxido de sodio.

- - la consistencia entre el disolvente y la fase móvil durante la prueba en la máquina puede eliminar el impacto del efecto disolvente.

- - la Ocratoxina puede causar cáncer y debe usarse herramientas de protección como guantes y máscaras para operar.

- - los envases usados y las soluciones estándar se remojaron en solución de hipoclorito de sodio (5% V / v) durante la noche.

7、Preparación de la solución de prueba:

7.1 extracto

Solución de metanol - agua al 70% (metanol v: agua v = 70: 30): tome 700ml de metanol y agregue agua desionizada para fijar la capacidad a 1l.

7.2 solución tampón fosfórico (abreviada: pbs)

Pesar 8,00g de cloruro de sodio, 1,20g de fosfato disódico de hidrógeno (o 2,92g de fosfato disódico de hidrógeno dodecilo), 0,20g de fosfato dihidrógeno de potasio, 0,20g de kcl, disolver en 900ml de agua, ajustar el pH a 7,0 ± 0,1 con ácido clorhídrico y diluirlo a 1000ml con agua.

7.3 amortiguador de fosfato de tween (abreviado: pbst)

Tomar 1 ml de tween - 20 y diluir el tampón PBS a 1000 ML.

8,Tratamiento de muestras:

- - muestra 3G ± 0,01g (la muestra sólida debe triturarse y pasar por un tamiz de muestra de 2 mm), 3G de cloruro de sodio en un frasco homogéneo y añadir 60 ml de extracto (ver 7.1);

- - homogeneización de alta velocidad (≥ 10000r / min) 2 min;

- - centrifugación 10 min (8000r / min);

- - tomar 5 ml de líquido sobrenadante y colocarlo en una botella métrica de 50 ml, diluirlo a la escala con un tampón pbs, mezclar bien y centrifugar durante 15 minutos (8000r / min);

- - tomar 20 ml de líquido sobrenadante para purificarlo por columna de inmunoafinidad.

Múltiplo de dilución: 10

9、Procedimientos operativos:

9.1 muestra

- - retire la columna de inmunoafinidad y penetre directamente el extremo inferior del cilindro de la jeringa en la columna de inmunoafinidad.

El tapón cuadrado completa la conexión del cilindro de la jeringa con la columna de afinidad y lo coloca en el soporte de control de gas para su fijación;

- - después de vaciar el líquido en la columna de afinidad, tome la muestra en el paso 8 e inyecte en el cilindro de la jeringa;

- - hacer que el líquido fluya a una velocidad de 1 a 2 gotas por segundo;

9.2 lavado

- - esperar a que el líquido se seque;

- - lavar la columna de inmunoafinidad con 10 ml de tampón lpbst (ver 7.3) y 10 ml de agua a su vez, con una velocidad de flujo de 2 a 3 gotas por segundo;

9.3 elución

- - después de drenar el líquido, retire la jeringa, sople el líquido seco y en la columna, eluya con metanol de 1,5 ml, recoja el líquido de elución en el frasco de muestra de 2 ml, diluya con agua a la escala y mezcle bien;

- - filtrar con un filtro microporoso de 0,22 micras y transferirlo al vial de muestra para el análisis por clar.

* drenar el último líquido antes de cada muestra.

10、Interpretación de los resultados:

Contenido de Ocratoxina a = concentración detectada × múltiplo de dilución

11,Condiciones de almacenamiento y período de validez:

Condiciones de almacenamiento: 2 a 8 ° c.

Validez: el producto tiene una validez de 18 meses.