I. antes del muestreo: aclarar las necesidades y hacer los preparativos básicos

La planificación previa al muestreo es un requisito previo para garantizar el efecto, y es necesario formular programas específicos en combinación con el propósito de la prueba (como monitoreo ambiental, evaluación del efecto de desinfección, análisis de investigación científica, etc.).

1. selección racional del tipo de muestreador

Los muestreadores de diferentes principios son adecuados para diferentes escenarios y características microbianas, y la selección del tipo de coincidencia es la base:

Muestreador de impacto (como el muestreador de impacto en cascada anderson, el muestreador de impacto en fisuras): el impacto de microorganismos en medios de cultivo o membranas de captura a través de flujos de aire de alta velocidad es adecuado para la detección de bacterias vivas que deben cultivarse (como la determinación del número total de colonias), especialmente adecuado para la captura de microorganismos de diferentes tamaños de partículas (el impacto en cascada puede distinguir la distribución del tamaño de las partículas de aerosoles).

Muestreador filtrante (por ejemplo, muestreador filtrante de membrana): el uso de membranas filtrantes (por ejemplo, membranas de policarbonato, membranas de celulosa mixtas) para interceptar microorganismos, adecuado para pruebas de alta sensibilidad (por ejemplo, cuantificación qpcr, detección de virus), o análisis simultáneos de escenarios en los que los microorganismos están relacionados con partículas, pero debe prestar atención al impacto del material de membrana filtrante en La actividad microbiana (por ejemplo, la selección de membranas filtrantes de baja absorción).

Muestreador de sedimentación (como el método de sedimentación de placa de petri): fácil de operar pero ineficiente, solo adecuado para la detección microbiana ambiental aproximada (como el monitoreo diario de la Sala limpia), no se recomienda para el muestreo de microorganismos de baja concentración o tamaño de partícula pequeño.

Muestreador centrífuga: separación de microorganismos por fuerza centrífuga, adecuado para el muestreo de escenarios de flujo (como talleres, lugares públicos), la ventaja es que es pequeño y portátil, pero la eficiencia de captura se ve muy afectada por la estabilidad del flujo de aire.

2. optimizar la selección de medios de captura

Los medios de captura (medios de cultivo, membranas filtrantes, líquidos absorbentes) determinan directamente la eficiencia de captura y la viabilidad de los microorganismos:

Selección del medio de cultivo: seleccionar un medio de cultivo especial de acuerdo con las características microbianas objetivo (como el Agar nutricional para la detección de bacterias, el Agar de glucosa de papa PDA para hongos y el medio de cultivo selectivo para bacterias patógenas); Asegúrese de que el medio de cultivo sea fresco (no más de 7 días después de la preparación a 4 ° c) y de que el espesor sea uniforme (unos 3 - 5 mm), evitando grietas secas o contaminación.

Selección de membranas filtrantes: priorizar las membranas filtrantes de baja adsorción y alta permeabilidad (como las membranas de PTFE de politetrafluoroetano y las membranas de nitrato de celulosa) para reducir las pérdidas microbianas causadas por la electricidad estática o la adsorción; El tamaño del agujero de la membrana filtrante debe coincidir con el tamaño del microorganismo (generalmente se seleccionan 0,22 micras o 0,45 micras, y el muestreo del virus se puede seleccionar 0,1 micras de membrana filtrante).

Selección de la solución absorbente: cuando se utiliza en un muestreador de absorción líquida, la solución absorbente debe tener en cuenta la "eficiencia de captura" y el "mantenimiento de la actividad microbiana" (por ejemplo, con solución salina o tampón que contiene entre el 0,05% y el 0,1% de tween 80, reducir la sedimentación y adsorción microbiana; el muestreo viral puede agregar seroalbúmina bovina BSA para proteger la estructura viral).

3. evitar la contaminación antes del muestreo

El muestreo microbiano es vulnerable a la contaminación externa y requiere un control estricto del "entorno estéril" antes del muestreo:

El muestreador (como el aspersor del muestreador de impacto, el clip de película filtrante, el tubo de muestreo) debe ser esterilizado con antelación (esterilización a vapor de alta presión 121 ° C / 20min, o esterilización en caliente seca 160 ° C / 2h; las piezas de plástico se pueden limpiar con 75% de alcohol y esterilizar ultravioleta durante 30 minutos).

Los medios de captura, como los medios de cultivo y las membranas filtrantes, deben cargarse en condiciones estériles (como operar en una mesa de trabajo súper limpia) para evitar el contacto con las manos o la exposición a la contaminación del aire.

Realizar un "preequilibrio" del área de muestreo antes del muestreo (por ejemplo, cerrar las puertas y ventanas durante 30 minutos antes del muestreo en la Sala limpia para evitar perturbaciones en el flujo de aire causadas por el Movimiento de personas).

2. en el muestreo: optimizar la configuración de parámetros y las especificaciones de operación

El control de parámetros y los detalles de operación en el proceso de muestreo son el núcleo para mejorar la eficiencia de la captura, que debe ajustarse dinámicamente de acuerdo con el principio del muestreador y las condiciones ambientales.

Optimizar los parámetros de muestreo del núcleo

De acuerdo con el tipo de muestreador y los requisitos de detección, ajuste los parámetros clave para maximizar la eficiencia de la captura:

Caudal de muestreo: el caudal debe coincidir con el diseño del muestreador (por ejemplo, el caudal recomendado del muestreador Anderson es de 28,3 L / min, y el muestreador de fisuras se puede configurar en 10 - 30l / min). Un flujo demasiado bajo puede causar una captura insuficiente de microorganismos de pequeño tamaño ( < 5 μm); El exceso de flujo puede causar inactivación microbiana o salpicaduras de medios debido al impacto del flujo de aire. Se recomienda calibrar el flujo antes del muestreo a través del "calibrador de flujo" (el error se controla dentro de ± 5%).

Tiempo de muestreo: es necesario equilibrar la "cantidad de captura" con la "actividad microbiana". El muestreo a corto plazo (5 - 15 min) es adecuado para entornos de alta concentración (como talleres contaminantes) para evitar la humedad excesiva de los medios de cultivo o la acumulación excesiva de microorganismos; El muestreo a largo plazo (30 - 60 minutos) es adecuado para ambientes de baja concentración (como salas limpias, quirófanos), pero hay que tener en cuenta que el tiempo de muestreo del muestreador de impacto no debe exceder los 60 minutos (evitar el secado del medio de cultivo), y el muestreador filtrante debe evitar el bloqueo de la película filtrante (las partículas grandes se pueden eliminar mediante prefiltración).

Altura y ubicación del muestreo: determinar el punto de muestreo de acuerdo con el propósito de la detección:

Monitoreo ambiental: la altura de muestreo es de 1,2 - 1,5 m (igual que el cinturón de succión humana), y cada área tiene 3 - 5 puntos de muestreo (distribuidos uniformemente, evitando esquinas, respiraderos y fuentes de contaminación directamente por encima).

Evaluación del efecto de desinfección: es necesario tomar muestras en el mismo lugar antes y después de la desinfección para garantizar la consistencia de la comparación.

Trazabilidad de aerosoles: se pueden establecer puntos de muestreo a diferentes alturas (como 0,5 m, 1,5 m, 3 m) para analizar la distribución vertical de microorganismos.

Control de la estabilidad del flujo de aire: al tomar muestras, evite que el muestreador se enfrente directamente a la ventilación, el ventilador o la dirección de movimiento del personal; Cerrar el equipo de ventilación local si es necesario o fijar el muestreador con una cubierta de viento para reducir la desviación de muestreo causada por la perturbación del flujo de aire.