La detección de filtración microbiana es el proceso de enriquecer los microorganismos en las muestras por métodos físicos o químicos, y luego aislar e identificar las bacterias objetivo. Este método es ampliamente utilizado en pruebas de calidad del agua, pruebas estériles de medicamentos, análisis de contaminación microbiana de alimentos y otros campos. Los objetos comunes de detección incluyen bacterias (como E. coli, Estafilococos aureus), hongos (como moho, levadura), etc. La separación e identificación precisas es la clave para garantizar que los resultados de las pruebas sean confiables.
Métodos de filtración y separación microbiana
2.1 preprocesamiento y filtración de muestras
La filtración microbiana suele utilizar el método de filtración por membrana (membrane filtration, mf), adecuado para muestras líquidas (como agua, bebidas). Los pasos son los siguientes:
1. preparación de muestras: muestras líquidas o sólidas homogéneas (por ejemplo, los alimentos deben diluirse homogéneamente).
2. filtración: interceptación de microorganismos a través de una membrana filtrante con poros de 0,22 a 0,45 micras.
3. transferencia: pegar la membrana filtrante a un medio selectivo o no selectivo para el cultivo.
2.2 tecnología de separación selectiva
Los diferentes microorganismos deben utilizar medios de cultivo específicos y condiciones de cultivo:
bacteria
- E. coli: uso de Emb (agar azul rojiblanco) o macconkeyagar.
- Staphylococcus aureus: uso de Agar de alta sal de Manitol (msa).
- hongos:
- moho y levadura: uso de Agar de glucosa de Shadow (sda), adición de antibióticos para inhibir el crecimiento de bacterias.
Tecnología de identificación microbiana
3.1 identificación morfológica
- características de la colonia: observar la morfología de la colonia (tamaño, color, borde, textura de la superficie).
- por ejemplo, Staphylococcus aureus es dorado y tiene protuberancias lisas; Las colonias de moho son peludas.
- Observación microscópica: Tinción de gramo (distinción de bacterias g, g), Tinción de esporas, etc.
3.2 pruebas bioquímicas
Identificar la CEPA a través de las características metabólicas:
- prueba de oxigenasa: distinguir entre Pseudomonas (positiva) e Enterobacter (negativa).
- prueba imvic: identificación de E. coli (el patrón de resultados es + -).
Prueba de fermentación de azúcar: como la capacidad de fermentación de lactosa para distinguir entre E. coli y salmonela.
3.3 métodos de biología molecular
Secuenciación del ARN - 16sr: "estándar de oro" para la identificación de bacterias, que puede ser preciso a nivel de género o especie.
- técnica pcr: detección de amplificación de genes específicos, como el gen uida de E. coli.
- MALDI - tofms: identificación rápida de microorganismos a través de huellas dactilares de proteínas.
Aplicaciones y desafíos
4.1 aplicación práctica
- Monitoreo de la calidad del agua: detección de coliformes totales y bacterias patógenas en el agua (como legionella).
- Examen de la asepsia de los medicamentos: asegúrese de que las inyecciones y los productos biológicos estén libres de contaminación microbiana.
- Seguridad alimentaria: detección de salmonela, listeria, etc. en los alimentos.
4.2 desafíos técnicos
1. detección microbiana de baja abundancia: cuando el contenido de bacterias objetivo en la muestra es bajo, es necesario enriquecer el cultivo.
2. interferencia de bacterias diversas: las muestras complejas (como heces y suelo) deben optimizar el medio de cultivo selectivo.
3. necesidades de identificación rápida: los métodos tradicionales consumen mucho tiempo y es necesario promover la tecnología de biología molecular.