El sistema de impresión de proteínas totalmente automático (westernblotting system) es un equipo automatizado para la detección y análisis de proteínas, que se utiliza ampliamente en la investigación en Ciencias de la vida, diagnóstico clínico y desarrollo de medicamentos. Puede completar automáticamente los pasos de separación de proteínas, digestión, membrana giratoria, cierre, incubación de anticuerpos y desarrollo de color, mejorando la eficiencia experimental y reduciendo los errores de operación manual. El siguiente es el principio técnico del sistema.
1. separación de proteínas (sds - page)
Principio: las proteínas se separan en el campo eléctrico en función de su peso molecular. Las proteínas de la muestra fueron tratadas por SDS (laurilsulfonato de sodio) para que llevaran cargas negativas y se desnaturalizaran, perdieran su estructura original y se convirtieran en moléculas lineales. Luego, la muestra se carga en el gel, y después de aplicar el campo eléctrico, las proteínas migran en el gel en función del tamaño molecular, las proteínas más pequeñas migran más rápido y las proteínas más grandes migran más lentamente.
Automatización: en el sistema de impresión de proteínas totalmente automático, este proceso se completa con un módulo automático de ce, que puede agregar muestras automáticamente, ajustar las condiciones de ce, terminar el experimento regularmente, etc.
2. membrana de transferencia (transferencia de proteínas)
Principio: las proteínas después de la separación por electrolisis deben transferirse a membranas sólidas (como la membrana PVDF o la membrana de nitrato de celulosa) para pruebas posteriores. El proceso de Transición de membrana suele ser la transferencia de proteínas del gel a la membrana a través de un método de transferencia eléctrica. La eficiencia de la transferencia está estrechamente relacionada con factores como la selección de la membrana, la corriente y el tiempo.
Automatización: el sistema de impresión de proteínas totalmente automático controlará automáticamente el voltaje y el tiempo de transferencia de membrana y monitoreará el efecto de la transferencia en tiempo real durante el experimento para garantizar la transferencia completa de proteínas.
3. cierre
Principio: después de la conversión de la membrana, para evitar la Unión no específica, la membrana debe cerrarse. Los pasos de cierre suelen utilizar un 5% de leche desnatada en polvo o solución BSA para cerrar los huecos de la película y evitar que los anticuerpos se unan inespecíficamente a la película.
Automatización: el sistema puede agregar automáticamente el líquido de cierre, controlar el tiempo y la temperatura de incubación y garantizar la uniformidad del proceso de cierre.
4. incubación de anticuerpos
Principio: este paso implica el uso de anticuerpos específicos para detectar proteínas objetivo. Primero se incuba con un anticuerpo primario dirigido a la proteína objetivo y luego con un anticuerpo secundario capaz de identificar el anticuerpo primario con un marcador detectable (como una enzima o un grupo fluorescente).
Automatización: el sistema de impresión de proteínas totalmente automático puede agregar automáticamente soluciones de anticuerpos, ajustar el tiempo de incubación, la temperatura y lavar automáticamente la superficie de la película para eliminar los anticuerpos no Unidos y reducir el ruido de fondo.
5. lavado
Principio: después de la incubación de anticuerpos, generalmente hay algunos residuos de anticuerpos no Unidos en la membrana. El paso de lavado elimina estos anticuerpos e impurezas no Unidos a través de un amortiguador para reducir la señal de fondo y mejorar la especificidad de la detección.
Automatización: el sistema de automatización puede agregar automáticamente el detergente y realizar múltiples lavados según sea necesario para garantizar que la superficie de la película esté limpia y reducir la interferencia de fondo.
6. detección de color o fluorescencia
Principio: después de la incubación de anticuerpos, la detección de la proteína objetivo generalmente depende de la generación de señales de color o fluorescencia. Los métodos de detección comunes incluyen:
Método de Quimioluminiscencia (ecl): los anticuerpos secundarios suelen llevar enzimas (como HRP o ap), que reaccionan con el sustrato para liberar señales luminosas y utilizar equipos ópticos para la detección.
Método de detección de fluorescencia: si se utilizan anticuerpos marcados con fluorescencia, el sistema de detección estimula y captura la señal de fluorescencia emitida a través de la luz de una longitud de onda específica.
Automatización: el sistema de impresión de proteínas totalmente automático agrega automáticamente sustratos de color, controla el tiempo de reacción y utiliza un sistema de imágenes integrado para la detección.
7. análisis de datos y generación de informes
Principio: cuantificar la señal de color o fluorescencia a través del software de análisis de imágenes para determinar la expresión de la proteína objetivo. Esto suele analizarse cuantitativamente comparando el brillo o la intensidad de fluorescencia de las bandas proteicas en la muestra con criterios de concentración conocidos.
Automatización: el software de análisis de datos incorporado al sistema puede procesar automáticamente imágenes y generar informes, incluyendo la cantidad de expresión de proteínas, el peso molecular de las tiras, el contraste entre muestras, etc.
Características técnicas
Totalmente automatizado: el sistema automático de impresión de proteínas puede completar automáticamente una serie de operaciones, desde la separación de proteínas, la página, la conversión de membranas, el cierre, la incubación de anticuerpos, el lavado hasta el desarrollo de color, lo que mejora en gran medida la eficiencia experimental y la repetibilidad.
Alto rendimiento: los sistemas de automatización modernos pueden procesar múltiples muestras al mismo tiempo, lo que es adecuado para experimentos a gran escala.
Control preciso: el sistema puede controlar con precisión el tiempo, la temperatura, las condiciones de reacción, etc. de cada paso experimental, reduciendo el error de operación humana.
Procesamiento y análisis de datos: el software integrado de análisis de imágenes puede analizar automáticamente los resultados experimentales cuantitativamente y proporcionar datos más precisos y repetibles.
Fácil de operar: el usuario solo necesita configurar simplemente los parámetros experimentales, el sistema completará automáticamente todo el proceso experimental y generará informes detallados, reduciendo las operaciones engorrosas.
Resumen
El sistema automático de impresión de proteínas puede mejorar en gran medida la eficiencia experimental y la precisión de los datos automatizando todos los pasos experimentales. Sus principios técnicos centrales incluyen la separación de proteínas, la transferencia eléctrica, la incubación de anticuerpos, el desarrollo de color o la detección fluorescente, etc. cada paso está controlado y optimizado con precisión y es adecuado para la detección de proteínas de alto rendimiento y bajo error.