En la investigación neurocientífica, los modelos animales estables y confiables son la piedra angular para explorar los mecanismos vitales y verificar las estrategias terapéuticas. Como tecnología central para construir una variedad de modelos de investigación científica cerebral, la Craneotomía en ratones es muy importante para su estandarización y precisión. Una cirugía exitosa no solo minimiza el daño animal, sino que también es la clave para garantizar la precisión y repetibilidad de los datos experimentales posteriores.

Dominar la Craneotomía es inseparable de una comprensión profunda de la anatomía cerebral y del temperamento repetido de las técnicas de manipulación fina. En la práctica, muchos investigadores a menudo se enfrentan a los siguientes problemas típicos:

✅ ¿¿ cómo moler el cráneo de manera segura para garantizar que el tejido cerebral esté completo e intacto?

✅ ¿Al fijar la vitrina de la ventana craneal, ¿ cómo equilibrar la intensidad de la fijación con la integridad del campo de visión de la imagen?

✅ ¿¿ cuáles son los detalles a los que se debe prestar atención en la operación aséptica intraoperatoria y el cuidado de los animales postoperatorios?

Este artículo girará en torno al proceso clásico de Craneotomía en ratones, a través de una demostración clara de pasos y análisis de puntos clave, peinará sistemáticamente los métodos centrales de esta tecnología. Como el primer artículo de "cirugía de preparación de ratones de imágenes fluorescentes de dos fotones", este artículo tiene como objetivo ayudar a los lectores a consolidar la base de la cirugía. En el futuro, también explicaremos en detalle más operaciones quirúrgicas finas, como la implantación de Grin lens, la apertura de ventanas en la médula espinal, la combinación de dos fotones y la implantación de electrodos eeg, para acompañarle en el progreso continuo de la tecnología en el camino de la investigación científica.

　　Consejos cálidos:Teniendo en cuenta su sensación de visualización, hemos suavizado algunas imágenes quirúrgicas, por favor, tenga la seguridad de verlo.

　　

　　PARTE.01Preparación preoperatoria

1. equipo quirúrgico: dos pinzas finas, una espátula en miniatura de dos cabezas y un corte de resorte.

2. consumibles experimentales: preparar los consumibles y la solución salina (1% de Cefalosporina sódica) necesarios para el experimento.

3. desinfección de instrumentos: todos los instrumentos o implantes utilizados durante la cirugía deben ser desinfectados antes de su uso, se pueden desinfectar con etanol al 75% y se pueden esterilizar a alta presión regularmente si las condiciones lo permiten.

4. desinfección de la Mesa de operaciones: la Mesa de operaciones debe limpiarse y desinfectarse con un 75% de etanol antes de su uso. la Mesa de operaciones debe estar acolchada con tela estéril, almohadilla absorbente limpia o toalla. estos materiales deben cambiarse después de cada operación.

　　PARTE.02Anestesia, fijación

1. los ratones se colocan en la Cámara del almacén de Estupefacientes para la anestesia inducida, y el flujo de gas y la escala de anestesia se establecen de acuerdo con la máquina de anestesia de gas del laboratorio. Cuando los ratones experimentaron una respiración significativamente lenta y relajación de las extremidades, se indicó que los ratones habían entrado en un Estado de anestesia.

2. fijar el ratón anestesiado al estereolocalizador cerebral y mantener la anestesia, prestando atención a observar la respiración del ratón en todo momento durante la cirugía.

　　PARTE 03Depilación

1. aplicar uniformemente el ungüento ocular de eritromicina en el ojo del ratón, la cantidad debe cubrir completamente el ojo del ratón para que el ojo no esté expuesto al exterior.

2. sumerja el ungüento de depilación con un hisopo de algodón médico, aplicó uniformemente en la raíz del cabello en la dirección opuesta al crecimiento del cabello, y limpie el cabello de la cabeza con un hisopo de algodón unos 2 minutos después.

3. sumerja un hisopo de algodón médico en solución salina normal y limpie el ungüento de depilación que queda en la cabeza del ratón.

4. use yodóforo para limpiar la piel pelada.

PARTE 04Exponer y limpiar el cráneo

1. use un corte de resorte para cortar el cuero cabelludo.

2. pelar toda la mucosa del cráneo expuesto y el exceso de grasa en las dos conexiones musculares.

3. utilice una espátula de doble cabeza en miniatura para raspar la mucosa residual, el tejido conjuntivo, etc. de la superficie del cráneo.

4. mantenga la bola de lavado de orejas y sople la superficie del cráneo hasta que esté completamente seca.

　　PARTE 05Craneotomía

1. con el agujero de inyección del virus o el sitio de localización como centro del círculo, coloque la lámina de vidrio redonda de la especificación adecuada en la superficie del cráneo con unas pinzas finas.

2. ajuste la velocidad de perforación del cráneo a la posición baja, Pule a lo largo del tamaño de la lámina de vidrio una vez, use una bola de lavado de orejas para soplar suavemente los escombros, repita esta operación hasta que el rango de pulido se ajuste completamente al tamaño de la lámina de vidrio, luego ajuste la velocidad a la gama media y alta y continúe puliendo.

3. cuando aparezca una grieta en el cráneo pulido, ajuste la velocidad del taladro craneal a la posición baja, continúe puliendo y repita la Operación hasta que toda la ventana craneal esté completamente rota.

4. sostenga unas pinzas finas y levante lentamente la placa craneal.

　　PARTE 06Recoger restos óseos rotos

Con unas pinzas finas, se pincha desde el lado de la ventana craneal y se seleccionan suavemente los fragmentos óseos circundantes, repitiendo esta operación hasta que no haya fragmentos en absoluto alrededor de la ventana craneal.

PARTE 07Instalación de láminas de vidrio

1. use pinzas finas para colocar suavemente el clip de vidrio limpiado en el tejido cerebral expuesto; Presione suavemente la placa de vidrio con unas pinzas para que la placa de vidrio se ajuste firmemente a la cara craneal pulida e se inserte debajo del cráneo; Compruebe si hay burbujas de aire debajo de la lámina de vidrio bajo un microscopio de estilo. si hay burbujas de aire, retire la lámina de vidrio y agregue solución salina normal. repita esta operación hasta que no haya burbujas de aire.

2. retire el exceso de líquido que se filtra fuera de la vitrina con una punta de papel absorbente de humedad y seque suavemente la superficie del cráneo con una bola de lavado de orejas para sumergir una pequeña cantidad de pegamento de tejido biológico con un pequeño cepillo en orden desde el exterior hacia el interior y aplicarlo a la piel marginal, a todo el cráneo y al borde de la ventana craneal.

3. después de esperar a que el pegamento de tejido biológico se seque, sumerja el pegamento 406 con una barra de aplicación dental, el alcance de la aplicación es el mismo, y espere a que el pegamento 406 se seque.

4. sumerja la mezcla de 502 y cemento dental con una punta de papel absorbente de humedad y aplique una pequeña cantidad en el borde de la ventana craneal muchas veces. evite dejar que el pegamento fluya al Centro de la lámina de vidrio durante toda la operación.

PARTE.08Instalación de la cabeza

1. disuelva y mezcle el cemento dental con pegamento 502, cubra el cráneo expuesto de manera delgada y uniforme, cierre completamente el cráneo expuesto e instale la cabeza cuando el cemento dental no esté seco.

2. llene completamente las grietas o las conexiones débiles con la cabeza con cemento dental para fortalecer la estabilidad de la cabeza.

3. después de esperar a que el cemento dental se seque, coloque el ratón en una caja térmica y espere a que el ratón se despierte.

PARTE 09Atención postoperatoria

1. proporcionar buenas condiciones de vida a los animales, se recomienda criar en una sola jaula y esparcir el alimento en la jaula para evitar que los animales froten y golpeen la cabeza cuando se alimentan o pelean, lo que resulta en un desplazamiento del campo de visión o la caída de la cabeza.

2. 1 - 7 días después de la cirugía, se inyectó una solución de sodio Cefalosporina en la cavidad abdominal del animal, una vez al día.