Kit de secuenciación ilumina nextxeq 500 / 550 v2.5

Nombre del producto:Kit de secuenciación ilumina nextxeq 500 / 550 v2.5(150 ciclos) suministro al contado

Número de producto: 20024904

Marca del producto: llumina / Estados Unidos inmena

El kit de secuenciación ilumina nextseq 500 / 550 está disponible， Kit de secuenciación de llumina, suministro al contado, bienvenido a consultar

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Kit de secuenciación de llumina, suministro al contado, bienvenido a consultar

La tecnología de secuenciación de segunda generación de llumina, la secuenciación mientras se sintetiza (sbs), es una tecnología de secuenciación de nueva generación (ngs) ampliamente utilizada para generar más del 90% de los datos de secuenciación en el mundo.

La tecnología de secuenciación de segunda generación de ilumina se llama secuenciación - por - síntesis (sbs). El SBS incluye principalmente tres pasos: extensión de base, excitación por fluorescencia y recolección y Corte de señales. Estos tres pasos se pueden repetir y circular. Se determina una base cada ciclo. Cuántas bases se quieren medir (es decir, leer más), se circulan tantas veces como se quiere. El número de ciclos de secuenciación se puede configurar en el software. Cuánto tiempo es apropiado secuenciar depende de la naturaleza y las necesidades del proyecto. En la mayoría de los casos, el experimento Sr (secuenciación de un solo extremo) determina 1x50 bases, y el experimento PE (secuenciación de dos extremos) determina 2x150 bases.

Extensión de base 1

Las características dntp utilizadas en los reactivos de secuenciación de llumina, que tienen dos grupos modificados al mismo tiempo: un grupo fluorescente y un grupo terminal reversible. Las cuatro bases a, g, C y T marcan cuatro grupos fluorescentes diferentes, que pueden emitir fluorescencia de diferentes longitudes de onda (es decir, colores) estimuladas por láser de diferentes longitudes de onda. El color de la fluorescencia corresponde al tipo de base uno por uno, por lo que la base se puede identificar en función de la longitud de onda de la luminiscencia. Los grupos terminales de las cuatro bases son los mismos. Debido a la existencia del Grupo terminal, todos los dntp solo pueden extender una base cada vez, independientemente del tiempo de reacción dado. También debido a que el Grupo terminal es reversible, después de la recolección de la señal de fluorescencia, el Grupo terminal se puede extirpar con un agente de cizallamiento para que la base vuelva a su estado natural extensible, cuando se puede continuar la siguiente ronda de circulación y luego determinar una base.

La tecnología de grupos terminales reversibles es una característica importante de la secuenciación de segunda generación de ilumina. Junto con la tecnología PCR puente, constituye los dos pilares de la secuenciación de segunda generación de ilumina, sentando una base sólida para el acceso estable a datos de secuenciación de alta calidad.

2 Adquisición de señales

El secuenciador de la serie hiseq tiene dos tubos láser rojos y verdes y dos filtros de color. Se combinan para formar cuatro longitudes de onda de excitación diferentes, que se utilizan precisamente para estimular cuatro bases a, g, C y T.

Las señales generadas por los grupos fluorescentes marcados en el clúster estimulados por láser se pueden recoger tomando o escaneando con la Cámara. La tecnología de escaneo es relativamente rápida y es adoptada por la serie x10. Debido a que el área de FC es relativamente grande y la superficie superior e inferior deben tomarse fotos por separado, el proceso de toma de fotos lleva mucho tiempo. Para el clásico hiseq 2000, las señales fluorescentes generadas por un ciclo de secuenciación tardan unos 40 minutos en tomar fotos y recogerlas, más tiempo que la propia reacción de secuenciación.

3 Corte

Una vez recogida la señal fluorescente, se apaga el láser y se utiliza un agente de Corte para eliminar los grupos fluorescentes y los grupos terminales marcados por las bases en los productos de extensión de los primeros secuenciados. Ambos grupos modificados fueron extirpados, por un lado, eliminando la interferencia con la fluorescencia y, por otro lado, devolviendo la base al final de la cadena a un estado natural extensible, preparándose para la próxima ronda de secuenciación.

Repita los pasos de síntesis, estimulación y recolección para secuenciar la segunda base.

El ciclo de secuenciación se puede repetir varias veces. En teoría, se puede repetir hasta que la relación señal - ruido se reduzca de tal manera que no se pueda identificar eficazmente la señal de base. Debido a que la eficiencia luminosa de los grupos fluorescentes continúa disminuyendo y la actividad de la enzima Taq continúa disminuyendo, en realidad el número de ciclos de secuenciación es limitado, y el gran número de repeticiones está relacionado con la fórmula del reactivo sbs. El número de ciclos de secuenciación se puede hacer artificialmente durante la configuración del software, y este número de repeticiones es la longitud de lectura de cada fragmento de secuenciación. En la actualidad, la plataforma llumina tiene una longitud de lectura de 2x100 bp, 2x125 bp, 2x150 bp, 2x300 BP y así sucesivamente, de los cuales 2x150 BP se utiliza más ampliamente.

Secuenciación de un solo extremo: la secuenciación de un solo extremo (single - read) primero fragmenta las muestras de ADN para formar un fragmento de 200 - 500 bp, la secuencia de primer se conecta a un extremo del fragmento de adn, luego el extremo se une al conector, el fragmento se fija a la célula de flujo para generar un clúster de adn, y la secuenciación de un solo extremo se realiza en la máquina para leer la secuencia.

Secuenciación de doble extremo: el método de secuenciación de doble extremo (paired - end) se refiere a la adición de sitios de Unión de primer de secuenciación a los conectores en ambos extremos al construir la Biblioteca de ADN a medir, eliminando la cadena de plantilla de la secuenciación de * ronda después de la finalización de la secuenciación de * ronda, y guiando La regeneración y amplificación de la cadena complementaria en su posición original con el módulo de secuenciación de lectura (paired - end) para alcanzar la cantidad de plantilla utilizada para la segunda ronda de secuenciación y realizar la secuenciación sintética de la segunda ronda de cadenas complementarias.

La Biblioteca genómica se refiere a una colección formada por cortar todo el ADN genómico de un organismo en un fragmento de ADN de cierta longitud y clonarlo en un vector. La Biblioteca genómica se divide en biblioteca genómica nuclear, Biblioteca genómica cloroplasta y biblioteca genómica mitocondrial de acuerdo con la fuente de adn. Cuando se construyó la Biblioteca genómica, el donante de información genética era el ADN genómico, por lo que no había período de desarrollo y especificidad de tejidos y órganos, y una biblioteca genómica * contenía la clonación de todas las secuencias de regiones codificadas y no codificadas en el ADN genómico; Cada gen del Organismo biológico tiene su clonación en la biblioteca, cuyos fragmentos genéticos incluyen secuencias espaciadoras, por lo que la Biblioteca genómica puede mostrar realmente toda la información estructural del genoma.

La Biblioteca genómica se define como: almacenar toda la información genética de un genoma biológico en un subgrupo clonal de bacterias receptoras a través de un vector clonal, que es la Biblioteca genómica de este organismo.

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Nombre del producto: ilumina 20024904 nextxeq 500 / 550 v2.5 kit de secuenciación (150 ciclos)

Número de producto: 20024904

Marca del producto: llumina / Estados Unidos inmena

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