U-Blot® Película impresa PVDF (0,2 μm)

U-Blot ® Película impresa PVDF (0,2 μm)Es una membrana microporosa de polifluoruro de vinilideno (pvdf) para transferir proteínas de diversas matrices de gel. Tiene mejores propiedades operativas que la película de nitrato de celulosa.

Esta membrana hidrofóbica tiene dos poros: 0,45 micras y 0,2 micras, lo que le permite unirse a proteínas de varios rangos de peso molecular:

• Apertura de 0,45 micras: adecuada para la mayoría de las proteínas, proporcionando una mayor sensibilidad de detección.

• Apertura de 0,2 micras: adecuada para proteínas con un peso molecular inferior a 20000, asegurando una mejor adsorción y retención de proteínas de moléculas pequeñas.

U-Blot ® Las membranas de impresión PVDF tienen una excelente retención de proteínas, alta intensidad física y una amplia compatibilidad química, lo que las convierte en una opción para la inmunodeterminación.

U-Blot ® Película impresa PVDF (0,2 μm)

1. separar muestras de proteínas y marcadores de proteínas con gel SDS page.

2. Corte y coloque cuidadosamente el gel y equilibre el gel en un amortiguador de transferencia en frío durante 5 a 20 minutos.

3. cortar la película y el papel filtrante en el tamaño adecuado para el gel. Remoje la película PVDF en metanol durante 20 segundos hasta que su blanco opaco se convierta en un gris translúcido uniforme, y luego remoje en agua ultrapura durante 1 - 2 minutos para eliminar los residuos del reactivo; Posteriormente, se equilibra en el amortiguador de transferencia en frío durante 2 - 3 minutos hasta que esté disponible.

Recordatorio de uso:

Después de humedecer la película, no la seque. Si la parte de la película se seca (se convierte en blanco opaco), también debe volver a mojarse.

4. ensamblar el dispositivo de transferencia a su vez, clip de transferencia película prehúmeda del papel de filtro de la almohadilla de esponja de papel de filtro de gel cortado y prehúmedo clip de transferencia de la almohadilla de esponja de papel de filtro de gel, preste atención a evitar arrugas, pliegues o burbujas en cada capa colocada (puede usar herramientas como cortar la Placa de Goma para presionar suavemente las burbujas para que cada capa se pegue estrechamente)

5. siga las instrucciones del dispositivo de transferencia utilizado para establecer las condiciones de funcionamiento, etc., y comience la transferencia.

6. después de la transferencia, se extrae la película impresa y se enjuaga brevemente en agua ultrapura para eliminar los escombros de gel. La película impresa se puede almacenar seca al aire o se puede utilizar inmediatamente para los pasos de inmunodetección.

Algunos de los factores clave para llevar a cabo con éxito experimentos de impresión de proteínas, como la concentración de proteínas, la concentración de líquidos de bloqueo y la concentración de anticuerpos, pueden necesitar ser optimizados en los siguientes esquemas.

Pruebas inmunológicas estándar

1. si la película impresa está seca, remoje en metanol durante 15 segundos o hasta que su color se vuelva blanco opaco a gris translúcido.

2. enjuagar la película de impresión con agua ultrapura durante 1 minuto.

3. coloque la película impresa en un amortiguador cerrado y revuelva suavemente para incubar durante 1 hora.

4. diluir un anticuerpo en una dilución de anticuerpos comercializados, un amortiguador de lavado o un amortiguador cerrado.

5. coloque la película impresa en una solución resistente diluida, incubarla a temperatura ambiente durante 1 hora (o 4 ° C durante la noche) y revuelva suavemente.

6. uso de amortiguador de lavado (incluido tween) ®- El tampón de 20 tensoactivos (tbst o pbst) lava la película impresa 3 - 5 veces durante 5 minutos cada vez.

7. diluir el segundo anticuerpo en una dilución de anticuerpos comercializados, un amortiguador de lavado o un amortiguador cerrado.

8. coloque la película impresa en una solución diluida de resistencia secundaria marcada por la enzima y incubarla a temperatura ambiente durante 1 hora.

9. lavar la película impresa 3 - 5 veces con un amortiguador de lavado durante 5 minutos cada vez.

10. coloque la película impresa en un recipiente limpio y agregue el reactivo de detección correspondiente.

11. siga las instrucciones del reactivo utilizado para la prueba y incubar durante 1 - 5 minutos.

(1) para HRP o reactivos de Quimioluminiscencia ap, exponer la película impresa a una película de rayos X o utilizar un sistema de imágenes para obtener imágenes digitales.

(2) para la detección de color, agregue el reactivo y espere a que aparezca la señal.