El kit qpcr del método de la sonda de marchitez bacteriana de la avellana Oriental no contiene ginseng interno.

Kit qpcr del método de sonda de marchitez de avellanas orientales (sin ginseng interno)

Kit de PCR en tiempo real (sin control interno)

Kit qpcr del método de sonda de marchitez de avellanas orientales (sin ginseng interno)Productos y características:
Tecnología de PCR cuantitativa fluorescente en tiempo real basada en el método de sonda taqman. Se diseñaron Primers específicos y sondas fluorescentes taqman para secuencias genéticas específicas de marchitez bacteriana en el este de avellanas. En el sistema de reacción pcr, si existe un ácido nucleico de marchitez bacteriana en el este de la avellana, el primer se unirá específicamente a la región correspondiente del ácido nucleico y la amplificación genética se llevará a cabo bajo la acción de la polimerasa de ADN taq. Al mismo tiempo, la sonda fluorescente se cruza específicamente con la secuencia de ADN objetivo amplificada, y la enzima Taq corta la sonda fluorescente durante el proceso de extensión, separando el Grupo fluorescente del Grupo de enfriamiento y liberando la señal fluorescente. A través del monitoreo en tiempo real de los cambios en las señales fluorescentes, se realiza la detección de marchitez bacteriana en el este de avellanas en la muestra.Tiene las siguientes características:

1. está listo para abrir y usar, y el usuario solo necesita proporcionar una plantilla de ADN de muestra.

2. después de la optimización de los primeros y las sondas, la sensibilidad del análisis es alta y puede alcanzar 100 copias / reacciones.

3. proporcionar controles positivos para facilitar la distinción de muestras falsas negativas.

4. alta especificidad, el primer está diseñado de acuerdo con la zona altamente conservadora del ADN de Fusarium Wilt en el este de la avellana y no reacciona cruzadamente con otros adn.

5. se puede utilizar tanto para pruebas cualitativas como para pruebas cuantitativas. Cuando se utiliza para la cuantificación, su rango lineal no es inferior a 5 órdenes de magnitud.

6. este producto es suficiente para 50 reacciones PCR cuantitativas fluorescentes con el método de sonda del sistema de 20 μl.

7. este producto solo se puede utilizar para la investigación científica.

Especificaciones e ingredientes:

Transporte y conservación:Transporte a baja temperatura, conservación a - 20 ° c, período de conservación de 12 meses.
Muestras de ADN de reactivos propios.

Kit qpcr del método de sonda de marchitez de avellanas orientales (sin ginseng interno)Método de uso:
I. muestras de la curva estándar de dilución(tomemos como ejemplo la dilución de 10 veces de 10e1 - 10e6 copias / μl). Debido a que la concentración del estándar es muy alta, las siguientes operaciones de dilución deben llevarse a cabo en áreas independientes y no deben contaminar la muestra ni otros ingredientes de este kit). Para aumentar la estabilidad del producto y evitar la propagación de patógenos infecciosos, este producto no proporciona muestras vivas como controles positivos, sino solo fragmentos de ADN no infecciosos como controles positivos.

1. marque 6 tubos centrífuga, 6, 5, 4, 3, 2, 1.

2. agregue un diluyente de plantilla especial para PCR fluorescente de 45 μl con una cabeza de pistola con núcleo, preferiblemente con una cabeza de pistola con núcleo, el mismo a continuación.

3. añadir 5 μl 1 × 10e7 copias / μl de control positivo (proporcionado por el kit) al tubo 6 y sacudir completamente durante 1 minuto para obtener una muestra de curva estándar de 1 × 10e6 copias / μl. Poner hielo para usar.

4. cambie la cabeza de la pistola, agregue un control positivo de 5 μl 1 × 10e6 copias / μl en el tubo 5 (obtenido de la dilución anterior), agite completamente durante 1 minuto y obtenga una muestra de curva estándar de 1 × 10e5 copias / μl. Poner hielo para usar.

5. cambie la cabeza de la pistola, agregue un control positivo de 5 μl 1 × 10e5 copias / μl en el tubo 4 (obtenido de la dilución anterior), agite completamente durante 1 minuto y obtenga una muestra de curva estándar de 1 × 10e4 copias / μl. Poner hielo para usar.

6. repita la operación anterior hasta obtener una muestra de curva estándar de 6 diluciones. Poner hielo para usar.

II. preparación del ADN de la muestra

7. si hay N muestras, es mejor configurar n + 2 extracciones, una más es PC (control positivo de preparación de muestras) y la otra es NC (control negativo de preparación de muestras). Se puede utilizar la dilución número 4 obtenida a partir de 10 μl más una cierta cantidad de agua para hacer que el volumen total sea el mismo que el volumen inicial requerido para cada preparación, como

PC. además, el agua se utiliza como nc.

8. purificar el ADN de la muestra con un método de selección propia, este Kit es compatible con la mayoría de los kits de extracción de ADN de la muestra en el mercado. También se puede comprar el liberador de ácido nucleico sin extracción de la compañía.

3. reacción qpcr probe (sistema de 20 μl, realizada en la Sala de preparación de muestras)

9. si se realiza un análisis cuantitativo y solo se repite una vez, se marcan n n + 9 tubos pcr, de los cuales n + 2

Para las muestras n + 2 obtenidas en el paso anterior, una para el control negativo de PCR (con agua como plantilla) y seis para la curva estándar. Si se realiza un análisis cualitativo y solo se repite una vez, se marcan n n + 4 tubos pcr, de los cuales n + 2 se utilizan para las muestras n + 2 obtenidas en el paso anterior, 1 para el control negativo PCR (con agua como plantilla) y 1 para el control positivo PCR (directamente con la dilución de control positivo del Tubo 4 del Paso 6 como plantilla). A continuación, solo se describen los pasos de operación tomando como ejemplo el análisis cuantitativo.

10. presione la tabla en el tubo de marcado para agregar los ingredientes(esta tabla solo enumera las repeticiones una vez. los tubos de muestra y los controles negativos no se establecen hasta que se establecen los controles positivos, y las muestras de control positivo deben esperar a que todos los tubos estén tapados y almacenados antes de agregar):

11. después de tapar, sube a la máquina y realiza PCR de acuerdo con los siguientes parámetros:

IV. procesamiento de datos

12. si este kit se utiliza para la detección cuantitativa, se dibuja la curva estándar con el valor de registro de la concentración de control positivo como eje transversal y el valor CT como eje longitudinal. A continuación, se calcula el valor de registro de la concentración de ADN de la muestra a partir de la curva estándar con el valor CT de la muestra a medir, y luego se calcula su concentración.

13. si este kit se utiliza para una prueba cualitativa y solo se juzga positivo o negativo, el control negativo CT no debe tener un valor, o el valor CT es igual o superior a 40. El control positivo debe tener un crecimiento logarítmico de fluorescencia, una curva de amplificación típica y un valor CT inferior a 40. Para las muestras analizadas, si su CT es inferior a 40, es positivo. Si no hay valor ct, o si es mayor o igual a 40, es negativo.
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