Kit de prueba libre de enzimas de Shanghai

Pruebas precisas para comprender la vida - Shanghai Xinyu Biotechnology co., Ltd.

(detección del lenguaje del corazón (xinyu biodetector), su socio científico confiable

Kit de detección libre de enzimasComposición típica de:

Un kit Elisa estándar suele contener los siguientes componentes:

1. placa microporosa preenvasada: placa de plástico de 96 o 48 agujeros, en la que se han preenvasado anticuerpos o antígenos capturados (dependiendo del tipo). Este es el lugar donde se produce la reacción.

2. anticuerpos / antígenos marcados con enzima (o anticuerpos / antígenos marcados con enzima): según el tipo de elisa, se proporcionan anticuerpos marcados con superóxidasa de rábano picante o Fosfatasa alcalina (para métodos indirectos o sándwich) o antígenos marcados con enzima (para métodos competitivos).

3. estándar: solución gradiente de la serie de antígenos (o anticuerpos) con concentraciones precisas conocidas. Se utiliza para dibujar la curva estándar y calcular la concentración de los objetos a medir en la muestra.

4. detección de anticuerpos (solo método de sándwich): anticuerpos no marcados contra otro Epítopo del antígeno.

5. diluyente de muestra: se utiliza para diluir la muestra para que su matriz coincida con los estándares y el sistema de amortiguación, reduciendo la interferencia no específica.

6. amortiguador de lavado: generalmente es un amortiguador de fosfato que contiene tween - 20. Se utiliza para lavar sustancias no combinadas entre pasos y reducir la interferencia de fondo. ¡¡ si el lavado es la clave del éxito o el fracaso del experimento!

7. líquido de cierre: se utilizan comúnmente soluciones de albúmina sérica bovina o leche en polvo desnatada. Se utiliza para cerrar los sitios no Unidos en la placa microporosa después de la envoltura, evitar la adsorción no específica en los pasos posteriores y reducir el fondo.

8. solución de sustrato:

Para hrp: se utilizan comúnmente tetrametilbifenilamina o 3,3 ', 5,5' - tetrametilbifenilamina.

Para ap: se utiliza comúnmente el fosfato de P - nitrobenceno.

9. líquido de terminación:

Para HRP - tmb: solución de ácido sulfúrico diluido de uso común.

Para AP - pnpp: se utilizan comúnmente * soluciones. Se utiliza para detener la reacción enzimática y estabilizar el color final.

10. película de sellado de la placa: cubra la placa microporosa en el paso de incubación para evitar la evaporación y la contaminación.

11. instrucciones: pasos de operación detallados, condiciones de conservación del reactivo, precauciones, resultados esperados y métodos de dibujo de la curva estándar.

Manejo de muestras y requisitos:

1. suero: colocar las muestras de sangre entera recogidas en el tubo de separación de suero a temperatura ambiente durante 2 horas o 4 ° C durante la noche, y luego centrifugar 1000 × G durante 20 minutos, se puede extraer el suero, o colocarlo a - 20 ° c o - 80 ° C para conservarlo, pero se debe evitar la congelación y descongelación repetidas.

2. plasma: recoger el espécimen con EDTA o Heparina como anticoagulante y centrifugarlo a 2 - 8 ° C 1000 × G durante 15 minutos dentro de los 30 minutos posteriores a la recolección, extraerlo para detectarlo o conservarlo a - 20 ° c o - 80 ° c, pero se debe evitar la congelación y descongelación repetidas.

3. homogeneización de tejidos: lavar los tejidos con PBS preconfriados (0,01m, pH = 7,4), eliminar la sangre residual (los glóbulos rojos agrietados en el homogeneizado pueden afectar los resultados de la medición), pesar los tejidos y cortarlos. El tejido cortado se compara con el volumen correspondiente de PBS (generalmente en una relación peso - volumen de 1: 9, como una muestra de tejido de 1G que corresponde a 9 ml de pbs, el volumen específico se puede ajustar adecuadamente de acuerdo con las necesidades experimentales y hacer un buen registro. Se recomienda agregar inhibidores de proteasa al pbs) en un homogeneizador de vidrio y moler completamente sobre Hielo. Para romper aún más los tejidos y las células, el homogeneizado se puede triturar por ultrasonido o congelar y descongelar repetidamente. Finalmente, el homogeneizado se centrifuga en 5000 × G durante 5 a 10 minutos y se extrae para su detección.

4. sobrenadante del cultivo celular: centrifugar 1000 × G durante 20 minutos, extraer el sobrenadante para detectarlo, o conservarlo a - 20 ° c o - 80 ° c, pero evitar la congelación y descongelación repetidas.

5. otros especímenes biológicos: 1000 × G centrifugación durante 20 minutos, se puede detectar tomando el líquido superior.

6. apariencia de la muestra: la muestra debe ser clara y transparente, y la suspensión debe eliminarse por centrifugación.

7. conservación de la muestra: si la muestra se detecta dentro de una semana después de la recolección, se puede conservar en 4 ° c. si no se puede detectar a tiempo, se embala de acuerdo con el uso de una vez, se congela en - 20 ° c (prueba dentro de un mes) o - 80 ° c (prueba dentro de 6 meses) Para evitar la congelación y descongelación repetidas. la Hemólisis de la muestra afectará el resultado final de la prueba, por lo que la Hemólisis de la muestra no es adecuada para esta prueba.

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